甄時(shí)建（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院 病理科，湖南 株洲 412000）

乳腺癌分子病理診斷中檢測ERCC2基因多態(tài)性的應(yīng)用研究

甄時(shí)建
（湖南中醫(yī)藥高等專科學(xué)校附屬第一醫(yī)院 病理科，湖南 株洲 412000）

目的 探討分析乳腺癌分子病理診斷中檢測ERCC2基因多態(tài)性的應(yīng)用效果。方法 選取我院收治的80例乳腺癌患者（觀察組），以及80例健康志愿者（對照組）作為觀察對象，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性。結(jié)果 觀察組和對照組之間的rs1799793位點(diǎn)野生基因型、等位基因比較無顯著差異（P＞0.05）；觀察組和對照組之間的rs238416位點(diǎn)在基因型、等位基因比較具有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)論 ERCC2基因rs1799793和rs238416位點(diǎn)多態(tài)性與腫瘤大小、三陰性乳腺癌、PR狀態(tài)的表達(dá)有一定的關(guān)聯(lián)，在乳腺癌的早期診斷和預(yù)后中，具有可觀的應(yīng)用價(jià)值。

乳腺癌；分子病理診斷；ERCC2基因多態(tài)性

乳腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤疾病，近年來，惡性腫瘤在中國女性腫瘤的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢［1］。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展與不斷成熟，近年來，有相關(guān)研究表明，在癌癥的易感性多分布有ERCC2基因多態(tài)性的分析，多個(gè)位點(diǎn)與癌癥的易感性相關(guān)的有乳腺癌、肺癌、胃癌等［2］。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取我院2012年1月至2015年4月收治的80例乳腺癌患者（觀察組），以及與患者生活環(huán)境相似、年齡相似的同民族健康人群（對照組）作為觀察對象。觀察組患者年齡28～65歲，平均年齡（46.2± 3.8）歲，對照組27～65歲，平均年齡（47.2±4.6）歲。兩組觀察對象均為女性，且均簽署知情同意書。組間年齡對比無顯著差異（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采用的儀器有PCR儀、凝膠成像系統(tǒng)、瓊脂糖、電泳系統(tǒng)、Universal genomic DNA Extraction Kit VER.3.0以及2×GoTaq Green Master Mix、限制性內(nèi)切酶Taql和Csp61。先用試劑盒提取兩組標(biāo)本的抗凝血中的外周基因組DNA，在-85 ℃的溫度中將其保存。利用Tagger程序，根據(jù)最小等位基因頻率≥0.05，以及連鎖不平衡系數(shù)≥0.8的標(biāo)準(zhǔn)，來進(jìn)行ERCC2基因多態(tài)性的初級篩選，再使用Fast SNPs軟件篩選出最典型的Tag SNPs，即是rs1799793和rs238416來進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.2 PCR反應(yīng)體系是2×GoTaq Green Master Mix 20 μL，其總體積是35 μL，將PCR進(jìn)行5分鐘的95 ℃的預(yù)變，在71 ℃時(shí)進(jìn)行20 s的延伸，將其擴(kuò)增至33個(gè)循環(huán)后，再在72 ℃中延伸10 min。接著分別用內(nèi)切酶Taql以及csp61進(jìn)行15 μL rs1799793和rs238416的PCR產(chǎn)物的酶切，在用2%瓊脂糖凝膠電泳對酶切產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。

1.2.3 選用免疫組化SP法，對乳腺癌術(shù)后組織切片的ER、HER-2以及PR的表達(dá)進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo)：核陽性細(xì)胞數(shù)＞10%、Allred評分≥3，ER、PR為陽性；HER-2的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是：+++是膜強(qiáng)染色細(xì)胞數(shù)＞30%；++是膜強(qiáng)染色細(xì)胞數(shù)在10%～30%；+是膜不持續(xù)染色的細(xì)胞數(shù)在10%以上；-是膜染色細(xì)胞數(shù)在10%以下。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：本研究數(shù)據(jù)以SPSS20.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，比較以t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的比較經(jīng)χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

ERCC2基因rs1799793和rs238416位點(diǎn)在對照組之間的分布符合平衡規(guī)律，也就是說該試驗(yàn)對象具有群體代表性。通過野生基因型和等位基因作參考，觀察組和對照組之間的rs1799793位點(diǎn)野生基因型、等位基因比較無顯著差異（P＞0.05）；觀察組和對照組之間的rs238416位點(diǎn)在基因型、等位基因比較具有顯著差異（P＜0.05）。缺失雜合突變基因型、缺失純合突變基因型GA與rs238416基因型GG相比，其個(gè)體患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)要高。通過研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以rs1799793位點(diǎn)中的GG基因型為參考，PR陰性者多攜帶的GA基因型頻率要高于PR陽性者；而三陰性乳腺癌患者所攜帶的CT基因型頻率要高于非三陰性乳腺癌患者。rs238416和rs1799793位點(diǎn)的多態(tài)性分布與乳腺癌患者的臨床病癥、ER、HER-2D的表達(dá)沒有顯著差異（P ＞0.05），不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

腫瘤的出現(xiàn)是細(xì)胞分化，再到增殖，最后到死亡機(jī)制的一個(gè)非常復(fù)雜的異常過程。在DNA被損傷之后，沒有進(jìn)行及時(shí)的修復(fù)，等到了一定的程度就會(huì)使細(xì)胞遺傳出現(xiàn)不穩(wěn)定升高，引起細(xì)胞增殖和分化的失控，最后就會(huì)造成腫瘤的出現(xiàn)。所以導(dǎo)致腫瘤易感性的主要因素之一就是DNA修復(fù)能力的差異［3-5］。所以ERCC2在乳腺癌發(fā)病的過程中有著重要的作用。本研究通過對rs1799793和rs238416位點(diǎn)多態(tài)性分布與乳腺癌的發(fā)生進(jìn)行相關(guān)的分析，通過研究發(fā)現(xiàn)，rs1799793與乳腺癌的發(fā)生沒有關(guān)系，其中的純合突變基因AA沒有被檢測出來；而rs238416位點(diǎn)的內(nèi)含子增強(qiáng)子功能，會(huì)受到雜合基因型GA的缺失受到阻礙，同時(shí)其也會(huì)對ERCC2基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平造成影響，并降低DNA修復(fù)能力，影響基因組多部分損傷的修復(fù)功能，在加上各種致癌原因、年齡增加以及基因位點(diǎn)突變等，最后就會(huì)造成癌癥的出現(xiàn)。

［1]張靈小.多基因單核苷酸多態(tài)與三陰性乳腺癌預(yù)后及療效的關(guān)聯(lián)研究［D］.北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2012.

［2]王濤，張永東，郭歡，等.檢測ERCC2基因多態(tài)性在乳腺癌分子病理診斷中的應(yīng)用［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2015，12（3）:277-281.

［3]張偉，李志剛，張蕾，等.Hcy及CBS T833C基因多態(tài)性與新疆漢族乳腺癌的關(guān)系［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2016，32（6）:897-899.

［4]劉新蘭，張海霞，劉堯邦，等.C1236T、G2677T/A和C3435T基因多態(tài)性與乳腺癌分子分型的關(guān)系及意義［J］.天津醫(yī)藥，2016，44（4）:389-393.

［5]張靈小，馬飛，王佳玉，等.ERCC2rs1799793多態(tài)性與三陰性乳腺癌鉑類化療療效的關(guān)系［J］.中國癌癥雜志，2012，22（5）:358-362.

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1671-8194（2016）18-0048-01