楊　盛，張飛燕，何　然，薛　強，徐曉玉（西南大學(xué)藥學(xué)院、中醫(yī)藥學(xué)院，重慶　400715）

梓葛凍干粉針抗血栓作用實驗研究

楊盛，張飛燕，何然，薛強，徐曉玉
（西南大學(xué)藥學(xué)院、中醫(yī)藥學(xué)院，重慶400715）

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-4-26 11：06網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160426.1106.056.html

基于地黃和葛根在中醫(yī)臨床治療中風(fēng)疾病的廣泛應(yīng)用［1］及其現(xiàn)代藥理學(xué)作用［2-3］，課題組前期將其藥效成分梓醇和葛根素配伍，研制成治療腦缺血中風(fēng)的新藥——梓葛凍干粉針（lyophilized powder of catapol and puerarin，C-P）。研究顯示，C-P對中風(fēng)模型小鼠具有神經(jīng)保護作用［4］。但是，C-P是否也具有抗血栓的作用尚不清楚。本實驗研究C-P的體內(nèi)外抗血栓作用，為將C-P研制成兼具抗血栓作用的、治療缺血性中風(fēng)疾病的神經(jīng)保護劑提供實驗依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物與試劑新西蘭大白兔、昆明種小鼠購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心；梓醇和葛根素購自石家莊流波白鳥生物科技有限公司，純度均≥98%；C-P由本實驗室研制（批號：20120518）；尿激酶、戊巴比妥鈉、I型膠原蛋白均購自Sigma；鹽酸腎上腺素注射液、二磷酸腺苷、阿司匹林均購自廣州白云山制藥。

1.2家兔體外血凝塊溶解實驗實驗分為5組：生理鹽水對照組、陽性藥（尿激酶100 kU·L-1）組、3個C-P藥物濃度（49、24.5、12.25 mg·L-1）組。取♂新西蘭兔，麻醉，參照文獻［5］制得血凝塊。稱取各組給藥前后血栓重量，計算血栓溶解率。

1.3抗膠原蛋白-腎上腺素（collagen-adrenal，CA）誘發(fā)小鼠體內(nèi)血栓形成實驗60只小鼠隨機分成6組，每組10只。正常對照組和模型組灌胃蒸餾水0.2 mL·（10 g）-1，陽性藥阿司匹林0.2 mL·（10 g）-1，其他3組灌胃相應(yīng)容積藥物，連續(xù)5 d，每天1次。末次給藥45 min后，除正常組注射生理鹽水外，其余每組尾靜脈注射CA。觀察并計算5 min內(nèi)小鼠死亡數(shù)和15 min內(nèi)小鼠偏癱數(shù)［5］。

1.4二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）誘導(dǎo)兔血血小板聚集抑制實驗血漿的制備參照文獻［6］，♂新西蘭家兔麻醉，制備富血小板血漿（PRP）；再以3 000 r·min-1離心20 min，吸取上清液得貧血小板血漿（PPP）。

操作步驟：以上述PRP為血小板供體，并用PPP調(diào)零。實驗分5組：阿司匹林組、空白對照組和C-P 3個劑量組（49、24.5、12.25 mg·L-1），每組8個平行樣。用血小板聚集測試儀測定各組血小板最大聚集率。

1.5數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對各組數(shù)據(jù)進行t檢驗，數(shù)值用±s表示。質(zhì)反應(yīng)數(shù)據(jù)用Monte Carlo確切概率法進行組間比較。

2　結(jié)果

2.1C-P可明顯溶解家兔體外血凝塊與生理鹽水組相比，49 mg·L-1的C-P對家兔體外血凝塊有明顯的溶解作用（P＜0.01）。

2.2C-P可明顯抑制CA誘發(fā)的小鼠體內(nèi)血栓形成小鼠在尾靜脈注射CA后，均出現(xiàn)不同程度死亡或偏癱現(xiàn)象。49、24.5、12.25 mg·L-1C-P對CA誘發(fā)的小鼠體內(nèi)血栓形成具有明顯的抑制作用（P＜0.05）。

2.3C-P可明顯抑制ADP誘導(dǎo)的兔血血小板聚集與生理鹽水組比較，24.5 mg·L-1C-P對ADP誘導(dǎo)的離體家兔血小板聚集具有明顯抑制作用（P＜0.01）。

3　討論

理想的缺血中風(fēng)疾病治療藥物除應(yīng)及早溶解血栓、恢復(fù)血供外，還應(yīng)具有較好的神經(jīng)保護作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，C-P對中風(fēng)模型小鼠具有明顯的神經(jīng)保護效果［4］。本研究的體內(nèi)、體外實驗結(jié)果顯示，C-P可通過抑制血小板聚集、促進血凝塊溶解，從而達到抗血栓的作用。該研究結(jié)果為將C-P研發(fā)成兼具溶栓作用的神經(jīng)保護劑帶來了希望。當然，其在血栓所致缺血性中風(fēng)疾病中的抗血栓作用有待于在動物模型中進一步驗證。

［1］Gong X，Sucher N J.Stroke therapy in traditional Chinese medicine（TCM）：prospects for drug discovery and development［J］. Phytomedicine，2002，9（5）：478-84.

［2］Zhu H F，Wan D，Luo Y，et al.Catalpol increases brain angiogenesis and up-regulates VEGF and EPO in the rat after permanent middle cerebral artery occlusion［J］.Int J Biol Sci，2010，6（5）：443-53.

［3］Zhou Y X，Zhang H，Peng C.Puerarin：a review of pharmacological effects［J］.Phytother Res，2014，28（7）：961-75.

［4］Yang L，Qiang X，Xu L，et al.Amelioration of stroke-induced neurological deficiency by lyophilized powder Catapol and Puerarin ［J］.Int J Biol Sci，2014，10（4）：448-56.

［5］陳元元，熊天琴，趙玉民，等.毛冬青總提取物的抗血栓作用及基于ADP的機制研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015，5（33）：1092-6.

［5］Chen Y Y，Xiong T Q，Zhao Y M，et al.Antithrombotic activity of llexpubescens total extract and the action of mechanism based on ADP［J］.Chin Arch Tradit Chin Med，2015，5（33）：1092-6.

［6］郭月芳，謝煒，王玉梅，等.聚乙二醇化降纖酶對血小板聚集和凝血功能的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2011，27（4）：512-5.

［6］Guo Y F，Xie W，Wang Y M，et al.Effects of PEGylated defibrase on platelet aggregation and coagulability activity［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27（4）：512-5.

Effect of lyophilized powder of catalpol and puerarin on antithrombosis

YANG Sheng，ZHANG Fei-yan，HE Ran，XUE Qiang，XU Xiao-yu
（College of Pharmaceutical Sciences&College of Chinese Medicine，Southwest University，Chongqing400715，China）

梓葛凍干粉針；抗血栓；體外溶栓；抗血小板聚集；ADP誘導(dǎo)；膠原-腎上腺；腦缺血中風(fēng)

lyophilized powder of catapol and puerarin；antithrombosis；thrombolytic in vitro；platelet aggregation；ADP-induced；collagen-adrenal；cerebral ischemic stroke

2016-01-26，修回日期：2016-03-01

國家自然科學(xué)基金面上項目（No 81473549）；國家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項（No 2014ZX09304-306-04）；教育部中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費（No XDJK2014 D023）

楊盛（1989-），女，碩士生，研究方向：中藥藥理與新藥研發(fā)，E-mail：yangsheng89@swu.edu.cn；徐曉玉（1958-），女，碩士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥理與新藥研發(fā)，通訊作者，Tel：023-68251679，E-mail：xuxiaoyu@swu.edu.cn

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.05.028

A

1001-1978（2016）05-0737-02

R-332；R282.71；R284.1；R743.305.31；R973.2