王本福，楊曉瑋，賴苗軍，周文華，連慶泉

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 麻醉科，浙江 溫州 325027；2.寧波大學(xué) 行為神經(jīng)科學(xué)研究中心寧波戒毒研究中心，浙江 寧波 315010）

?論 著?

條件性刺激誘導(dǎo)大鼠建立異丙酚復(fù)吸行為

王本福1，楊曉瑋1，賴苗軍2，周文華2，連慶泉1

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 麻醉科，浙江 溫州 325027；2.寧波大學(xué) 行為神經(jīng)科學(xué)研究中心寧波戒毒研究中心，浙江 寧波 315010）

目的：利用條件性刺激誘導(dǎo)大鼠建立異丙酚復(fù)吸行為。方法：在固定比率（FR=1）程序下連續(xù)訓(xùn)練14 d建立自身給藥，大鼠24只，隨機(jī)分為3組（n=8）：戒斷1 d（R1）組、戒斷14 d（R14）組和戒斷30 d（R30）組。大鼠進(jìn)行復(fù)吸測試2 h（前1 h為實(shí)驗(yàn)籠空間環(huán)境誘導(dǎo)，后1 h為條件性刺激誘導(dǎo)），記錄動物在2 h內(nèi)的有效或無效鼻觸數(shù)。結(jié)果：異丙酚自身給藥訓(xùn)練14 d，建立了穩(wěn)定的異丙酚靜脈自身給藥行為。和無效鼻觸相比，有效鼻觸數(shù)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與R1組比，R14組有效鼻觸數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），R30組有效鼻觸數(shù)亦升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.057）。條件性刺激誘導(dǎo)的有效鼻觸反應(yīng)比實(shí)驗(yàn)籠空間環(huán)境的誘導(dǎo)作用更強(qiáng)烈（P＜0.05）。結(jié)論：條件性刺激可以誘導(dǎo)大鼠建立異丙酚復(fù)吸行為，異丙酚具有明顯的復(fù)吸特性。

異丙酚；復(fù)吸；環(huán)境線索；自身給藥

異丙酚是常用的靜脈麻醉藥物，廣泛用于麻醉和ICU鎮(zhèn)靜。異丙酚可以產(chǎn)生欣快感、愉悅和性興奮，具有明顯的獎賞效應(yīng)[1-3]。有文獻(xiàn)[4]報道異丙酚依賴患者1 d需要注射藥物100多次，也有患者戒斷后出現(xiàn)復(fù)吸。這些證據(jù)表明異丙酚具有明顯的精神依賴性，存在復(fù)吸現(xiàn)象。條件性刺激誘導(dǎo)的復(fù)吸模型是研究成癮藥物的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制和干預(yù)措施的常用方法[5-8]，本研究旨在利用條件性刺激誘導(dǎo)大鼠建立異丙酚復(fù)吸行為。

1 材料和方法

1.1 動物選擇與分組 清潔級雄性SD大鼠24只（由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供），體質(zhì)量240～270 g，年齡14周。單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食進(jìn)水，24 h晝夜交替飼養(yǎng)，控制室溫與濕度。建立異丙酚（批號：EF834，AstraZeneca公司，意大利）靜脈自身給藥后隨機(jī)分為3組（n=8）：戒斷1 d（R1）組、戒斷14 d（R14）組和戒斷30 d（R30）組。

1.2 靜脈自身給藥模型建立[3]大鼠麻醉后，行右頸外靜脈插管。靜脈導(dǎo)管由3.5 cm硅膠管（外徑0.94 mm，內(nèi)徑0.51 mm）和10 cm聚乙烯管（PE-20）組成，聚乙烯管部分通過背部穿出體外。0.2 mL青霉素100 000 U抗感染和0.1 mL肝素鈉溶液（50 U/mL）抗凝1周。第8天開始實(shí)驗(yàn)，每天訓(xùn)練3 h，連續(xù)14 d。每次實(shí)驗(yàn)前檢查大鼠的給藥血管是否通暢、有無滲漏，實(shí)驗(yàn)期內(nèi)禁食。計(jì)算機(jī)自動記錄有效鼻觸、無效鼻觸和藥物注射次數(shù)，整個實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)由計(jì)算機(jī)自動控制。實(shí)驗(yàn)程序?yàn)楣潭ū嚷?∶1（FR=1），即大鼠鼻觸1次有效開關(guān)注射1次異丙酚1.7 mg/kg，同時開關(guān)上方的綠色信號燈在注射期間閃爍，注射完畢后熄滅，注射期間上壁的籠燈熄滅，進(jìn)入不應(yīng)期30 s。在不應(yīng)期，大鼠如再次觸動有效開關(guān)則不誘發(fā)藥物注射，但記錄有效鼻觸次數(shù)。大鼠觸碰無效鼻觸則大鼠不能獲得藥物，綠色信號燈不改變。實(shí)驗(yàn)期間由計(jì)算機(jī)控制每隔1 h給予大鼠1次強(qiáng)制注射，每天訓(xùn)練限定最高注射次數(shù)為50次。如果已經(jīng)達(dá)到注射50次，此后鼻觸開關(guān)關(guān)閉不再記錄。

1.3 復(fù)吸模型的建立 建立異丙酚自身給藥行為后，大鼠放入飼養(yǎng)籠喂養(yǎng)進(jìn)行戒斷，期間自由飲水進(jìn)食。戒斷期后，大鼠返回實(shí)驗(yàn)籠進(jìn)行環(huán)境線索誘導(dǎo)的復(fù)吸測試，共2 h。前1 h測定實(shí)驗(yàn)籠空間環(huán)境線索誘導(dǎo)的復(fù)吸，所有條件性刺激（籠燈、鼻觸燈、注射泵聲音）全部關(guān)閉，僅記錄“有效”和“無效”鼻觸反應(yīng)；后1 h自動給予1次條件性刺激，提示進(jìn)入下一測試階段，此時所有燈光和設(shè)備控制與異丙酚自身給藥訓(xùn)練時一樣，每觸發(fā)1次有效鼻觸可獲得1次條件性刺激，但沒有異丙酚注射，觸發(fā)1次無效鼻觸不給予條件性刺激。記錄動物在2 h內(nèi)的有效或無效的鼻觸數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以±s表示，統(tǒng)計(jì)方法采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析和重復(fù)測量方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 異丙酚自身給藥大鼠模型的建立 有效鼻觸次數(shù)隨著異丙酚自身給藥訓(xùn)練天數(shù)的增加而逐漸增加，有效鼻觸數(shù)和藥物注射次數(shù)處于穩(wěn)定狀態(tài)，而無效鼻觸次數(shù)一直處于較低水平。和無效鼻觸數(shù)相比，有效鼻觸次數(shù)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F （1，46）=1 517.002，P＜0.01]，建立了穩(wěn)定的異丙酚靜脈自身給藥行為。見圖1。

圖1 異丙酚自身給藥模型的建立

2.2 環(huán)境線索誘導(dǎo)的復(fù)吸測試 與R1組比，R14組大鼠的有效鼻觸次數(shù)顯著升高[F（2，23）=236.625，P＜0.01]，R30組大鼠的有效鼻觸次數(shù)也升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（2，23）=236.625，P=0.057]。復(fù)吸測試前1 h為實(shí)驗(yàn)籠空間環(huán)境誘導(dǎo)的鼻觸反應(yīng)，后1 h為先前與異丙酚注射相伴的條件性燈光刺激誘導(dǎo)的鼻觸反應(yīng)，見圖2。在測試期間，R14組大鼠條件性刺激誘導(dǎo)的有效鼻觸反應(yīng)比實(shí)驗(yàn)籠空間環(huán)境誘導(dǎo)的有效鼻觸反應(yīng)更強(qiáng)烈（F=15.862，P＜0.01），見圖3。結(jié)果表明利用靜脈自身給藥技術(shù)可以建立條件線索誘導(dǎo)的異丙酚模型，異丙酚具有明顯的復(fù)吸特性。

圖2 戒斷大鼠復(fù)吸測試時的鼻觸反應(yīng)

圖3 R14組大鼠復(fù)吸測試的鼻觸反應(yīng)

3 討論

復(fù)吸是藥物依賴者戒斷用藥一段時間后由于某些因素的激發(fā)，重現(xiàn)渴求感受藥物精神效應(yīng)欲望而產(chǎn)生的強(qiáng)迫性用藥和覓藥行為，是藥物成癮的主要特征之一，也是困擾成癮治療的首要問題。近年來藥物依賴研究已主要轉(zhuǎn)向?qū)Τ砂a藥物復(fù)吸的治療，因此建立有效的復(fù)吸行為的動物模型是問題的關(guān)鍵。

異丙酚為一種全憑靜脈麻醉藥，因其臨床性能良好，廣泛地用于麻醉誘導(dǎo)、維持和ICU鎮(zhèn)靜。臨床上發(fā)現(xiàn)異丙酚不僅可以引起欣快感、愉悅感，而且停藥后還使用藥者產(chǎn)生了想再次用藥的渴求，甚至濫用死亡[9-11]。動物研究也發(fā)現(xiàn)異丙酚可以建立位置偏愛實(shí)驗(yàn)和自身給藥實(shí)驗(yàn)，我們前期也建立了異丙酚的自身給藥模型[12-13]。1995年至2005年間，美國醫(yī)療部門醫(yī)務(wù)人員有18%濫用異丙酚，比過去10年增加了5倍，其中28%的濫用患者死于藥物過量[14]。有3例患者通過醫(yī)療手段停用異丙酚后不久復(fù)發(fā)（復(fù)吸）[4]。2009年，著名歌星邁克?杰克遜死于異丙酚的濫用。調(diào)查研究韓國的38名異丙酚依賴患者顯示：89%的患者1周至少注射異丙酚2～3次，13.2%的患者出現(xiàn)了戒斷綜合征[15]。這些證據(jù)表明異丙酚具有明顯的濫用和復(fù)吸現(xiàn)象，目前異丙酚復(fù)吸的機(jī)制還不清楚。因此，建立異丙酚復(fù)吸行為的模型對探索異丙酚復(fù)吸和生物學(xué)機(jī)制具有重要意義。

自身給藥法是檢驗(yàn)藥物是否具有精神依賴性的可靠方法，由于大鼠靜脈自身給藥模型較好地模擬了人類的用藥行為，國內(nèi)外主要是利用此技術(shù)建立復(fù)吸行為模型[16-18]。與之前應(yīng)用藥物相關(guān)的環(huán)境和條件性刺激能夠激發(fā)成癮者的藥物渴求和情感反應(yīng)，該因素更好地模擬了人類藥物濫用的復(fù)吸行為，即吸毒、離開原來環(huán)境脫毒、再次回到原來環(huán)境遇到與其以前用藥時相關(guān)聯(lián)的人或隨身物品誘發(fā)復(fù)吸[19-21]。故本研究采用大鼠靜脈自身給藥技術(shù)建立條件性刺激誘導(dǎo)的大鼠異丙酚復(fù)吸行為。

本研究建立穩(wěn)定的異丙酚自身給藥模型，分別戒斷1、14和30 d后觀察環(huán)境線索誘導(dǎo)的覓藥行為。結(jié)果顯示R14組和R30組2組戒斷大鼠出現(xiàn)了明顯的復(fù)吸行為。與R1組相比，R14組和R30組大鼠的有效鼻觸次數(shù)明顯升高，R14組大鼠的有效鼻觸次數(shù)升高更顯著。在復(fù)吸測試過程中，和實(shí)驗(yàn)籠空間環(huán)境相比，R14組大鼠條件性刺激誘導(dǎo)的鼻觸反應(yīng)更強(qiáng)烈，測試期間大鼠的鼻觸反應(yīng)主要發(fā)生在與異丙酚相伴的有效鼻觸。這些結(jié)果表明利用條件性刺激可以誘導(dǎo)大鼠建立異丙酚復(fù)吸的行為，該模型可以用來研究異丙酚復(fù)吸的機(jī)制和干預(yù)方法。

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（本文編輯：趙翠翠）

Propofol relapse induced by drug-related environmental cues

WANG Benfu1, YANG Xiaowei1, LAI Miao-jun2, ZHOU Wenhua2, LIAN Qingquan1.
1.Department of Anesthesiology, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325027; 2.Laboratory of Behavioral Neuroscience, Ningbo Addiction Research and Treatment Center, School of Medicine, Ningbo University, Ningbo, 315010

Objective: To induce rat establishing propofol relapse behavior, conditioned cues was utilized.Methods: Rats received propofol self-administration 3 h session per day for a total of 14 days under FR=1 (fi xedratio=1) schedule.Twenty-four rats well trained for propofol self-administration were divided into 3 groups (n=8): Relapse 1 day (R1), Relapse 14 days (R14) and Relapse 30 days (R30).After withdrawal, those rats reintroduce to training-chambers for consecutive 1 hour relapse testing induced by contextual and contingent discreet conditioned cues respectively.Results: Stable propofol self-administration was established after 14 days training sessions.Compared to inactive nose-poke response, the number of active nose-poke response increased signifi -cantly (P＜0.01).Compared to active nose-poke response of R1, the number of active nose-poke response of R14 increased signifi cantly after 14 withdrawal days (P＜0.01).And the number of active nose-poke response of R30 also increased after withdrawal 30 days, but there was no statistic difference compared with that of R1 (P=0.057).The number of active nose-poke response of contingent discreet conditioned cues was strongly higher than that of contextual (P＜0.01).Conclusion: Propofol relapse can be induced by drug-related environmental cues, and propofol has obvious characteristics of relapse.

propofol; relapse; environmental cues; self-administration

R971

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2016.12.002

2016-01-15

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81271469）；溫州市科技局科研基金資助項(xiàng)目（Y20140692，H20100060）；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目（2014KYB161）。

王本福（1980-），男，浙江溫州人，主治醫(yī)師，碩士。

連慶泉，主任醫(yī)生，教授，Email：lianqingquanmz@ 163.com。