文 慧，胡晨曦，王李昂，王 涵，劉春穎，宋艷艷, 劉若丹，姜 鵬，王中全，崔 晶

旋毛蟲肌幼蟲排泄分泌抗原診斷早期旋毛蟲病的研究

文 慧，胡晨曦，王李昂，王 涵，劉春穎，宋艷艷, 劉若丹，姜 鵬，王中全，崔 晶

目的 評價旋毛蟲肌幼蟲排泄分泌(excretory-secretory，ES)抗原診斷早期旋毛蟲病的價值。方法應(yīng)用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原Western blot對旋毛蟲感染后6～11 d的小鼠血清及19 d的早期旋毛蟲病人血清進行檢測，并與感染后35 d的晚期旋毛蟲病人和其他寄生蟲病人血清的檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果Western blot分析顯示，肌幼蟲ES蛋白中的2條蛋白帶(41.5、55 kDa)可被旋毛蟲感染后7～11 d的小鼠血清識別，6條蛋白帶(41.5、44.1、45、55、61和65.2 kDa)能被早期和晚期旋毛蟲病人血清識別，陽性反應(yīng)率均為100%(15/15)；這6條蛋白帶與裂頭蚴病人和健康人血清無交叉反應(yīng)，但與其他寄生蟲病(血吸蟲病、并殖吸蟲病、華支睪吸蟲病、棘球蚴病及囊尾蚴病)患者血清具有明顯的交叉反應(yīng)(19.12%～38.23%)。結(jié)論旋毛蟲肌幼蟲 ES 抗原中的41.5 kDa～65.2 kDa蛋白帶可與旋毛蟲感染早期血清反應(yīng)，但與其他蠕蟲病患者有明顯的交叉反應(yīng)。

旋毛蟲?。恍x；肌幼蟲；排泄分泌抗原；Western blot；早期診斷

旋毛蟲病是一種嚴(yán)重的食源性人獸共患寄生蟲病，主要因生食或半生食含有旋毛蟲幼蟲的豬肉、其它動物肉類及肉制品所致。全世界198個國家(或地區(qū))中66個有旋毛蟲病分布[1]，1986-2009年世界上44個國家報告65 818例病人，死亡42例[2]。1964-2009年，我國12個省、市、自治區(qū)發(fā)生了577 起人體旋毛蟲病暴發(fā)，發(fā)病25 125例，死亡251人[3]。近年來我國居民的旋毛蟲感染率呈上升趨勢，據(jù)2001-2004年全國10個省(市、區(qū))人體重要寄生蟲病調(diào)查，人群旋毛蟲血清抗體陽性率為3.38%，估計我國人體旋毛蟲感染者達4 000多萬[4]。旋毛蟲肌幼蟲排泄-分泌(excretory-secretory, ES)抗原診斷旋毛蟲病具有較高的敏感性和特異性，是國內(nèi)外用于旋毛蟲病血清學(xué)診斷的主要抗原[5]。旋毛蟲肌幼蟲ES抗原ELISA是國際旋毛蟲病委員會(International Commission on Trichinellosis, ICT)和國際獸醫(yī)局 (Office International des Epizooties, OIE)推薦用于初步診斷旋毛蟲感染的首選血清學(xué)方法, ELISA 陽性者需經(jīng)Western blot 分析確認(rèn)[6-7]；當(dāng)檢測到針對旋毛蟲肌幼蟲ES抗原40～70 kDa蛋白帶的特異性抗體時,可確認(rèn)為旋毛蟲感染[8]。

當(dāng)應(yīng)用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原通過Western blot檢測患者血清或進行血清流行病學(xué)調(diào)查時，由于不能確定旋毛蟲感染的具體時間，肌幼蟲ES抗原Western blot分析能否用于旋毛蟲感染的早期診斷目前尚不清楚。鑒于此，本文應(yīng)用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原通過Western blot對感染旋毛蟲的早期小鼠血清及旋毛蟲病暴發(fā)后的早期患者血清進行檢測，并與晚期旋毛蟲病和其他寄生蟲病患者血清的檢測結(jié)果進行了比較。

1 材料與方法

1.1 旋毛蟲蟲種與實驗動物 實驗用旋毛蟲為河南省南陽豬源旋毛蟲(ISS 534)，由本室昆明小鼠傳代保種。健康雄性6周齡昆明小鼠購自河南省實驗動物中心。

1.2 旋毛蟲肌幼蟲的收集與ES抗原 將300條旋毛蟲肌幼蟲經(jīng)口感染30只小鼠，感染后42 d 處死。膈肌壓片鏡檢證實感染成功后，剝皮，去除內(nèi)臟和脂肪，將全身骨骼肌攪碎，用人工消化液[0.33%胃蛋白酶(活性為 1∶31 000，北京芳草試劑公司進口分裝)-0.7%鹽酸-0.85%氯化鈉]消化，按貝氏法收集肌幼蟲[9]，用無菌生理鹽水洗滌后移至RPMI-1640培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)18 h。收集的培養(yǎng)液于超濾管(Amicon Ultra-4)中，低溫超濾濃縮后即為肌幼蟲ES蛋白[10]。經(jīng)Bradford法測定蛋白濃度為2.6 mg/mL，-80 ℃保存待用。

1.3 試驗血清 將300條旋毛蟲肌幼蟲經(jīng)口感染10只小鼠, 感染后6～15 d尾靜脈采血分離血清，經(jīng)肌幼蟲ES抗原ELISA檢測的陽性小鼠血清用于后續(xù)的Western blot分析。30份旋毛蟲病患者血清為我國云南省兩次旋毛蟲病暴發(fā)后，經(jīng)流行病學(xué)、臨床學(xué)、血清學(xué)(ELISA或IFT)或病原學(xué)檢查確診后的患者血清[11-12]，其中15份為感染后19 d 的早期旋毛蟲病患者血清，15份為感染后35 d的晚期旋毛蟲病患者血清。確診的華支睪吸蟲病、并殖吸蟲病、裂頭蚴病、棘球蚴病、日本血吸蟲病及囊尾蚴病患者血清, 均為本室采集與保存。健康人血清為健康獻血者血清。所有血清樣本-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 SDS-PAGE 采用Bio-Rad公司電泳系統(tǒng)，分離膠濃度為12%，積層膠濃度為5%，肌幼蟲ES抗原蛋白濃度為10 μg/孔。100 ℃水浴5 min后上樣。在濃縮膠電壓為80 V，分離膠電壓為120 V條件下進行電泳2.5 h。電泳結(jié)束后將凝膠采用考馬斯亮藍染色4 h，脫色至條帶清晰后，用蛋白圖譜掃描儀(美國GE公司產(chǎn)品，分辨率為300 bpi，像素為8 bits)掃描成圖像,數(shù)字化圖像用Gene Genius凝膠圖像分析軟件分析,用蛋白Marker標(biāo)定樣品蛋白電泳條帶的分子質(zhì)量[13]。

1.5 Western blot 將未染色的凝膠、聚偏二氟乙烯膜(PVDF，美國Millipore公司產(chǎn)品)以及濾紙均在轉(zhuǎn)印緩沖液中浸泡20 min。將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜，轉(zhuǎn)印條件為恒壓17 V，35 min。PVDF膜用5%脫脂奶粉封閉，37 ℃孵育1 h。加入1∶100稀釋的病人血清，4 ℃過夜孵育；TBST洗滌后，加入1∶5 000稀釋的HRP標(biāo)記的羊抗小鼠或羊抗人IgG(HRP-IgG, Sigma)，37 ℃孵育1 h，洗滌后加二氨基聯(lián)苯胺(DAB，Sigma)-H2O2底物顯色,置Milli-Q水終止反應(yīng)[14]，掃描拍照后，避光保存。

2 結(jié) 果

2.1 旋毛蟲肌幼蟲ES抗原的SDS-PAGE及其與感染小鼠血清反應(yīng)的Western blot分析 旋毛蟲肌幼蟲ES抗原經(jīng)SDS-PAGE分析顯示19條蛋白帶，分子量分別為97、79、65.2、61、55、53、49、45、44.1、41.5、37、35.1、33.6、31、29.6、27、22.4、18及15 kDa(圖1A)。Western blot結(jié)果顯示，肌幼蟲ES抗原中的2條蛋白帶(41.5、55kDa)可被旋毛蟲感染后7～11 d的小鼠血清識別；感染后26 d的小鼠血清可識別6條蛋白帶(55、49、44.1、41.5、37、22.4及18 kDa)，感染后42 d的小鼠血清可識別所有的肌幼蟲ES抗原蛋白帶(圖1B)。

A: 旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白的SDS-PAGE分析. M:低分子量蛋白Marker；1:旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白；B. 旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白與感染小鼠血清反應(yīng)的的Western blot分析. M:低分子量蛋白Marker；1～4：旋毛蟲感染后9～11 d及26 d小鼠血清；5與10：旋毛蟲感染后42 d小鼠血清；6與11：正常小鼠血清；7～9：旋毛蟲感染后6～8 d小鼠血清A: SDS-PAGE analysis of T. spiralis muscle larval ES antigens; M: protein molecular weight marker; 1: T. spiralis muscle larval ES antigens; B: Western blot analysis of T. spiralis muscle larval ES antigens by using mouse infection sera; M: protein molecular weight marker; 1～4: sera of mice infected with T. spiralis at 9～11 and 26 dpi; 5 and 10: sera of mice infected with T. spiralis at 42 dpi; 6 and 11: normal mouse sera; 7～9: sera of mice infected with T. spiralis at 6～8 dpi.圖1 旋毛蟲肌幼蟲ES抗原的SDS-PAGE及其與感染小鼠血清反應(yīng)的Western blot分析Fig.1 The SDS-PAGE and Western blot analysis of T. spiralis muscle larval ES antigens by mouse infection sera

2.2 肌幼蟲ES蛋白與旋毛蟲病人血清反應(yīng)的Western blot分析 Western blot分析結(jié)果顯示，肌幼蟲ES蛋白中的17條蛋白帶(65.2、61、55、53、49、45、44.1、41.5、37、35.1、33.6、31、29.6、27、22.4、18及15 kDa)可被早期旋毛蟲病人血清識別；14條蛋白帶(65.2、61、55、53、49、45、44.1、41.5、37、35.1、33.6、31、18及15 kDa)可被晚期旋毛蟲病人血清識別；肌幼蟲ES蛋白與健康人血清無陽性反應(yīng)(圖2)。

2.3 肌幼蟲ES蛋白與其他寄生蟲病人血清反應(yīng)的Western blot分析 旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白中的一些蛋白帶(分子量范圍為22.4～65.2 kDa)與其他蠕蟲病患者血清具有交叉反應(yīng)；其中11條蛋白帶(65.2、61、55、53、49、44.1、41.5、37、35.1、33.6及31 kDa)與9份日本血吸蟲病患者血清的交叉反應(yīng)率均達100%(9/9)；41.5、45 kDa和53～65.2 kDa蛋白帶與并殖吸蟲病患者血清具有明顯的交叉反應(yīng)；61、55、49 kDa蛋白帶與華支睪吸蟲病人血清的交叉反應(yīng)率為43%(3/7)、29%(2/7)及29%(2/7)(圖3)。53 kDa蛋白帶與囊尾蚴病人血清的交叉反應(yīng)率為45.45%(5/11)，61、53和45 kDa蛋白帶與棘球蚴病人血清的交叉反應(yīng)率均為31%(4/13)；肌幼蟲ES抗原與裂頭蚴病人血清無交叉反應(yīng)(圖4)。

旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白中的6條蛋白帶(41.5、44.1、45、55、61和65.2kDa)均能被早期和晚期旋毛蟲病人血清識別，陽性反應(yīng)率均為100%(15/15)，但這6條蛋白帶與其他蠕蟲病人血清具有較高的交叉反應(yīng)率(19.12%～38.23%)。雖然肌幼蟲ES蛋白中的15、18 kDa蛋白帶與其他寄生蟲病人血清無交叉反應(yīng)，但與早期旋毛蟲病人血清的陽性反應(yīng)率僅為60%～73.33%(表1)。

M：低分子量蛋白Marker；A1～15：早期旋毛蟲病人血清；B1～15：晚期旋毛蟲病人血清；C1～10：健康人血清M: protein molecular weight marker; A1～15: sera of early patients with trichinellosis at 19 dpi; B1～15: sera of late patients with trichinellosis at 35 dpi; C1～10: sera of normal persons 圖2 旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白與旋毛蟲病人血清反應(yīng)的Western blot分析Fig.2 Western blot analysis of T. spiralis muscle larval ES antigens by sera of patients with trichinellosis

M：低分子量蛋白Marker；A1～12：并殖吸蟲病人血清；B1～9：日本血吸蟲病人血清；C1～7： 華支睪吸蟲病人血清M: protein molecular weight marker; A1～12: sera of patients with paragonimiasis; B1～9: sera of patients with schistosomiasis; C1～7: sera of patients with clonorchiasis圖3 旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白與吸蟲病人血清反應(yīng)的Western blot分析Fig.3 Western blot analysis of T. spiralis muscle larval ES antigens by sera of patients with trematodiasis

M：低分子量蛋白Marker；A1～11：囊尾蚴病人血清；B1～13：棘球蚴病人血清；C1～6：裂頭蚴病人血清M: protein molecular weight marker; A1～12: sera of patients with cysticercosis; B1～13: sera of patients with echinococcosis; C1～6: sera of patients with sparganosis圖4 旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白與囊尾蚴病等其他寄生蟲病人血清反應(yīng)的Western blot分析Fig.4 Western blot analysis of T. spiralis muscle larval ES antigens by sera of patients with cysticercosis and other parasitic diseases

3 討 論

在旋毛蟲的不同發(fā)育期中，肌幼蟲在宿主體內(nèi)的存活時間最長，在人體內(nèi)肌幼蟲可存活30年，肌幼蟲的ES抗原主要來自桿狀體，直接暴露于宿主的免疫系統(tǒng)，是誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗體應(yīng)答的主要靶抗原[15]。由于旋毛蟲肌幼蟲容易通過人工消化法收集，目前國內(nèi)外對旋毛蟲病診斷抗原的研究主要集中在肌幼蟲期抗原[6]。

本研究結(jié)果表明，旋毛蟲肌幼蟲ES蛋白中的6條主要蛋白帶(41.5、44.1、45、55、61和65.2kDa)均能被感染后19 d的早期旋毛蟲病人血清識別，也可被晚期旋毛蟲病人血清識別，陽性反應(yīng)率均為100%(15/15)。雖然這6條蛋白帶與健康人血清和裂頭蚴病人血清無交叉反應(yīng)，但與其他蠕蟲病人血清具有較高的交叉反應(yīng)在，尤其是與日本血吸蟲病和并殖吸蟲病等病人血清具有明顯的交叉反應(yīng)。其他學(xué)者的研究亦表明，旋毛蟲肌幼蟲ES抗原的主要蛋白帶(42～46、49、53～54及 64 kDa)與其他蠕蟲病患者血清之間亦存在有交叉反應(yīng)[16]?？寡xgp50的單抗和抗血吸蟲gp50陽性的血吸蟲病人血清，均可與旋毛蟲肌幼蟲皮下層和桿狀體發(fā)生陽性反應(yīng)，表明血吸蟲抗原gp50是與旋毛蟲肌幼蟲抗原發(fā)生血清學(xué)交叉反應(yīng)的主要抗原[17]。應(yīng)用DNA重組技術(shù)體外表達的旋毛蟲21、31及43 kDa抗原，與血吸蟲病等其他蠕蟲病人血清也有部分交叉反應(yīng)[18-20]。上述結(jié)果提示，旋毛蟲肌幼蟲ES抗原與上述蠕蟲存在有明顯的共同抗原[21]。國際旋毛蟲病委員會推薦用于Western blot 確認(rèn)旋毛蟲感染的肌幼蟲 ES 抗原40～70 kDa蛋白帶，雖然能檢測出早期和晚期旋毛蟲病人血清抗旋毛蟲抗體，但與日本血吸蟲病、并殖吸蟲病等蠕蟲病患者血清具有明顯的交叉反應(yīng)。由于這些蠕蟲病是我國常見的寄生蟲病，因此，在我國應(yīng)用肌幼蟲 ES 抗原Western blot檢測血清樣本，當(dāng)41.5～65.2kDa蛋白帶出現(xiàn)陽性反應(yīng)時，應(yīng)結(jié)合病史、臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢查結(jié)果，與這些蠕蟲病進行鑒別。

表1 旋毛蟲肌幼蟲ES抗原與旋毛蟲病和其他蠕蟲病患者血清Western blot陽性反應(yīng)的蛋白帶分析

Tab.1 Western blot analysis of protein bands of T. spiralis muscle larval ES antigens positively reacted with sera of patients with trichinellosis and helminthiasis

肌幼蟲ES抗原分子量(kDa)MolecularweightofmusclelarvalESantigens陽性反應(yīng)血清份數(shù)(%)No．ofpositivesera(%)早期旋毛蟲病患者血清(n=15)Seraofearlypatientswithtrichinellosis(n=15)晚期旋毛蟲病患者血清(n=15)Seraoflatepatientswithtrichinellosis(n=15)其他蠕蟲病患者和正常人血清(n=68)Seraofpatientswithotherhelminthiasisandnormalpersons(n=15)65．215(100．00)15(100．00)18(26．47)61．015(100．00)15(100．00)26(38．23)55．015(100．00)15(100．00)26(38．23)45．015(100．00)15(100．00)13(19．12)44．115(100．00)15(100．00)16(23．53)41．515(100．00)15(100．00)20(29．41)18．09(60．00)4(26．67)015．011(73．33)4(26．67)0

雖然肌幼蟲ES蛋白中的15、18kDa蛋白帶與其他寄生蟲病人及健康人血清無交叉反應(yīng)，但與早期旋毛蟲病人血清的陽性反應(yīng)率僅為60%～73.33%，用于早期旋毛蟲病血清學(xué)診斷的敏感性達不到臨床診斷旋毛蟲病的要求。因此，今后需要從旋毛蟲感染宿主后的早期發(fā)育階段(如腸道感染性幼蟲、早期成蟲或成蟲)中篩選與鑒定旋毛蟲病的早期特異性診斷抗原[22]。

[1] Pozio E. World distribution ofTrichinellaspp. infections in animals and humans[J]. Vet Parasitol, 2007, 149(1-2): 3-21.

[2] Murrell KD, Pozio E. Worldwide occurrence and impact of human trichinellosis, 1986-2009[J]. Emerg Infect Dis, 2011, 7(12): 2194-2202.

[3] Cui J, Wang ZQ, Xu BL. The epidemiology of human trichinellosis in China during 2004-2009[J]. Acta Trop, 2011, 118(1): 1-5.

[4] Wang LD. Investigation on the current national status of major human parasitic diseases in China[M]. Beijing: People's Publishing House, 2008: 84-89. (in Chinese)

王隴德. 全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 2008:84-89.

[5] Wang ZQ, Cui J. Diagnosis and treatment of trichinellosis[J]. Chin J Parasitol Parasit Dis, 2008, 26(1): 53-57. (in Chinese)

王中全,崔晶. 旋毛蟲病的診斷與治療[J].中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志,2008, 26(1): 53-57.

[6] Gamble HR, Pozio E, Bruschi F, et al. International Commission on Trichinellosis: recommendations on the use of serological tests for the detection ofTrichinellainfection in animals and man[J]. Parasite, 2004, 11(1):3-13.

[7] Dupuy-Camet J, Bruschi F. Management and diagnosis of human trichinellosis. In: Dupouy-Camet J, Murrell KD (Eds.), FAO/WHO/OIE guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis[M]. FAO/WHO/OIE, Paris, France, 2007: 37-68.

[8] Dupouy-Camet J, Kociecka W, Bruschi F, et al. Opinion on the diagnosis and treatment of human trichinellosis[J]. Expert Opin Pharmacother, 2002, 3(8): 1117-1130.

[9] Li F, Cui J, Wang ZQ, et al. Factors affecting the sensitivity of artificial digestion and its optimization for inspection ofTrichinellaspiralisin meat[J]. Foodborne Pathog Dis, 2010, 7(8): 879-885.

[10] Wang L, Cui J, Hu DD, et al. Identification of early diagnostic antigens from major excretory-secretory proteins ofTrichinellaspiralismuscle larvae using immunoproteomics[J]. Parasit Vectors, 2014, 7(1): 40.

[11] Wang CQ, Wu FW, Wang XR, et al. Survey of an outbreak of trichinellosis in Lanchang county of Yunnan province[J]. China Trop Med, 2013, 13(11): 1433-1434. (in Chinese)

王春泉,吳方偉,王興榮,等.云南省瀾滄縣一起旋毛蟲病暴發(fā)的調(diào)查[J]. 中國熱帶醫(yī)學(xué), 2013, 13(11): 1433-1434.

[12] Wang ZQ, Cui J, Xu BL, et al. Diagnosis of trichinellosis[S].Health criteria of People's Republic of China，2015.

王中全，崔晶，許汴利，等. 旋毛蟲病的診斷[S].中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，2015.

[13] Liu RD, Jiang P, Wen H,. Screening and characterization of early diagnostic antigens in excretory-secretory proteins fromTrichinellaspiralisintestinal infective larvae by immunoproteomics[J]. Parasitol Res, 2016, 115(2): 615-622.

[14] Wang L, Wang ZQ, Cui J. Protein changes ofTrichinellaspiralismuscle larvaeinvitroinduced by bovine bile[J]. Vet Parasitol, 2013, 194(2-4): 164-167.

[15] Bolas-Fernandez F, Corral Bezara LD. TSL-1 antigens ofTrichinella: an overview of their potential role in parasite invasion, survival and serodiagnosis of trichinellosis[J]. Res Vet Sci, 2006, 81(3): 297-303.

[16] Yera H, Andiva S, Perret C, et al. Development and evaluation of a Western blot kit for diagnosis of human trichinellosis[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 2003, 10(5): 793-796.

[17] Linder E, Thors C, Lundin L, et al. Schistosome antigen gp50 is responsible for serological cross-reactivity withTrichinellaspiralis[J]. J Parasitol, 1992, 78(6): 999-1005.

[18] Ren DF, Cui J, Wang ZQ, et al. Prokaryotic expression of the antigen gene Ts43 ofTrichinellaspiralisand identification of its recombinant protein[J]. Chin J Zoonoses. 2008, 24(6): 539-542. (in Chinese)

任道鋒,崔晶,王中全,等. 旋毛蟲抗原基因Ts43原核表達及重組蛋白鑒定[J].中國人獸共患病學(xué)報,2008, 24(6):539-542.

[19] Wang R, Wang ZQ, Cui J. Immunodiagnostic value and immune protection of the recombinant Ts21 antigen ofTrichinellaspiralis[J]. Chin J Parasitol Parasit Dis, 2009, 27(1): 17-21. (in Chinese)

王睿, 王中全, 崔晶. 旋毛蟲Ts21重組蛋白的免疫診斷價值及免疫保護作用的研究[J]. 中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志, 2009，27(1):17-21.

[20] Cui J, Wang L, Sun GG, et al. Characterization of aTrichinellaspiralis31 kDa protein and its potential application for the serodiagnosis of trichinellosis[J]. Acta Trop, 2015, 142: 57-63.

[21] Chan SW, Ko RC. Comparison between standard ELISA and dot-ELISA for serodiagnosis of human trichinosis[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg, 1988, 82(6): 892-894.

[22] Sun GG, Liu RD, Wang ZQ, et al. New diagnostic antigens for early trichinellosis: the excretory-secretory antigens ofTrichinellaspiralisintestinal infective larvae[J]. Parasitol Res, 2015, 114: 4637-4644.

Early serodiagnosis of trichinellosis by Western blot with excretory-secretory antigens fromTrichinellaspiralismuscle larvae

WEN Hui, HU Chen-xi, WANG Li-ang, WANG Han, LIU Chun-ying,SONG Yan-yan, LIU Ruo-dan, JIANG Peng, WANG Zhong-quan, CUI Jing

(DepartmentofParasitology,BasicMedicalCollege,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

To evaluate the value ofTrichinellaspiralismuscle larval excretory-secretory (ES) antigens for early serodiagnosis of trichinellosis, the larvae were cultured in RPMI-1640 at 37 ℃ in 5% CO2for 18 h and the ES antigens were analyzed by SDS-PAGE. Western blot withT.spiralismuscle larval ES antigens was used to detect the serum samples from mice infected withT.spiralisat 6-11 days post infection (dpi) and the patients with trichinellosis at 19 dpi, and the results were compared with those of serum samples from patients with trichinellosis at 35 dpi and other parasitic diseases. The results of SDS-PAGE indicated thatT.spiralismuscle larval ES antigens had 19 protein bands with a molecular weight of 15-97 kDa, whereas the results of Western blot analysis showed that two protein bands (41.5 and 55 kDa) in the ES antigens were recognized by mouse infection sera at 7-11 dpi, and six protein bands (41.5, 44.1, 45, 55, 61 and 65.2 kDa) were recognized by serum samples from early and late patients with trichinellosis, and the positive reaction rate was 100% (15/15). The six proteins had no cross-reaction with serum samples of patients with sparganosis and healthy individuals, but they had obvious cross reaction with serum samples from the patients with other parasitic diseases (schistosomiasis, paragonimiasis, clonorchiasis, echinococcosis, and cysticercosis), with the cross reaction rate ranging from 19.12% to 38.23%. The results indicate the six protein bands with 41.5-65.2 kDa inT.spiralismuscle larval ES antigens are positively reacted with early infection sera, but they obvious have cross reaction with sera from the patients with other helminthinasis.

trichinellosis;Trichinellaspiralis; muscle larvae; excretory-secretory (ES) antigens; Western blot; early diagnosis Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 81672043) and the Science Project of Higher Education of Henan (No. 16A310017) Corresponding author: Cui Jing, Email: cuij@zzu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-2694.2016.012.004

國家自然科學(xué)基金項目(No. 81672043)和河南省高等學(xué)?？蒲许椖?No.16A310017)聯(lián)合資助

崔 晶，Email: cuij@zzu.edu.cn

鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室，鄭州 450052

R383.15

A

1002-2694(2016)12-1058-06

2016-07-11；

2016-09-29