唐建紅　劉川玉　何　潔

（1廣西省桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，桂林　541199；2廣西省桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部，桂林　541001）

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4種工藝制備蘆薈凝膠中蘆薈多糖的含量比較※

唐建紅1劉川玉2*何潔2

（1廣西省桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，桂林541199；2廣西省桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部，桂林541001）

摘要：目的測(cè)定比較四種工藝制備的蘆薈凝膠中蘆薈多糖的含量。方法以D-甘露糖作為對(duì)照品，采用紫外分光光度法在610 nm處測(cè)吸光度，測(cè)定比較鮮榨汁法、冷榨汁法、超聲提取法及酶提取法等4種方法所得蘆薈凝膠的蘆薈多糖。

結(jié)果甘露糖在0.05～0.60 g·L- 1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系(r=0.9985)，測(cè)得四種工藝制備的蘆薈凝膠中蘆薈多糖的含量分別為鮮榨汁法2.202 mg·g- 1、冷榨汁法1.604 mg·g- 1、超聲提取法2.000 mg·g- 1及酶提取法2.150 mg·g- 1。結(jié)論不同制備工藝所得蘆薈凝膠中蘆薈多糖的含量有所不同，其中以鮮榨汁法所得的蘆薈多糖含量為最高。研究為蘆薈凝膠的制備工藝篩選提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：蘆薈凝膠；蘆薈多糖；含量

蘆薈為百合科多年生常綠草本植物，目前分布于世界的蘆薈屬植物多達(dá)500余種，但可供藥用的只有十幾種，其中以庫(kù)拉索蘆薈、好望角蘆薈及斑紋蘆薈最為常用。蘆薈集醫(yī)藥、食用、美容和觀賞于一體，含有多種藥理成分，具有保護(hù)神經(jīng)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力[1]、防輻射、抗癌、抗病毒、抑菌殺菌、抗炎抗過(guò)敏、促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成等作用[2、3]，在民間具有“百藥箱”之稱(chēng)，直接取其原植物入藥，不利于臨床推廣應(yīng)用。蘆薈凝膠是由新鮮蘆薈葉肉加工制備而成，既便于臨床應(yīng)用又保持了蘆薈原植物的特效。蘆薈多糖是蘆薈凝膠中主要有效成份之一[4]，具有抗菌、消炎、生肌、促進(jìn)傷口愈合及組織修復(fù)、減少疤痕形成及增強(qiáng)免疫力等多種藥理作用[5]。蘆薈多糖的含量是蘆薈凝膠質(zhì)量確定的重要指標(biāo)之一。本研究通過(guò)采用醇沉方法提取其中蘆薈多糖，用蒽酮-濃硫酸紫外分光光度法測(cè)定比較鮮榨汁法、冷榨汁法、超聲提取法及酶提取法等4種方法制備蘆薈凝膠的蘆薈多糖含量，旨在為蘆薈凝膠最佳制備方法的篩選提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與儀器

1.1試劑75%乙醇，無(wú)水乙醇（分析純，批號(hào)：1304272），98%濃硫酸（分析純，批號(hào)：1102111），蒽酮（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20130426），D-甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)：140651－200602），果膠酶（上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：131105）。

1.2藥材蘆薈凝膠庫(kù)拉索蘆薈，品種來(lái)源于桂林醫(yī)學(xué)院藥用植物園。

1.3儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52AA（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-250真空干燥器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；B2500S-M7超聲波清洗器（必能信超聲有限公司產(chǎn)品）；HANGPING FA2004電子天平（上海精科天平儀器廠）；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；YOKO-SY紫外線分析儀（武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）等。

2　方法與結(jié)果

2.1蘆薈凝膠的制備取新鮮蘆薈葉適量，潔凈消毒處理，分成四等份，分別采用鮮榨汁法、冷榨汁法、超聲提取法及酶提取法等4種方法制備蘆薈凝膠，分別將所得蘆薈凝膠于80℃水浴30 min，加入活性炭脫色，減壓抽濾。取濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至一定體積，并按0.2~0.5%的量加入一定量的亞硫酸鈉防止其氧化。

2.2蘆薈多糖曲線的繪制D-甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：精確稱(chēng)取D-甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品25 mg于25 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解定容，得1 g·L-1甘露糖標(biāo)準(zhǔn)液。

蒽酮試劑的制備：將98%濃硫酸緩緩加入蒸餾水中，配置成80%的濃硫酸溶液100 ml，準(zhǔn)確稱(chēng)取蒽酮0.2 g加入，冷卻至室溫后貯存于棕色瓶?jī)?nèi)，于4°C冰箱保存。

甘露糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別準(zhǔn)確移取甘露糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0 ml，各置于10 ml容量瓶中，加入蒸餾水定容。分別取上述溶液1.0 ml及甘露糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0 ml置于10 ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入0.2%蒽酮試液2.0 ml，搖勻，水浴加熱反應(yīng)10 min，放冷，以空白試劑為參比，在610 nm處測(cè)吸光度。以甘露糖的濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=6.1147x+0.0206 (r= 0.9985，n=6)，甘露糖在0.05～0.60 g·L-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.3供試品溶液的制備分別取上述四種制備方法所制備的蘆薈凝膠10 g，用3倍量蒸餾水于70℃水浴靜置溶解30 min，真空抽濾，濾液分別用75%乙醇配成料液比1∶6的蘆薈凝膠-乙醇溶液，靜置1 h后，過(guò)濾并用適量無(wú)水乙醇洗滌3次，得蘆薈粗多糖（4個(gè)品種）。用適量蒸餾水20~30 ml于70℃水浴溶解粗多糖，放冷至室溫，定容于50 ml容量瓶中，取粗多糖水溶液2 ml定容于10 ml容量瓶，搖勻，得各種蘆薈多糖供試品溶液。

2.4精密度試驗(yàn)精密量取1 g·L-1甘露糖對(duì)照品溶液0.5 ml于具塞管中，加入0.2%蒽酮-濃硫酸液2 ml，煮沸10 min，連續(xù)6次于610 nm處測(cè)吸光度，測(cè)得甘露糖吸光度的平均值為0.601，RSD為0.557%。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)精密量取“2.2”項(xiàng)中鮮榨汁法蘆薈多糖溶液5份，分別于具塞管中，加入0.2%蒽酮－濃硫酸液煮沸10 min，于610 nm處測(cè)吸光度，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性良好。索蘆薈多糖吸光度的平均值為0.696，RSD為0.388%。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取“2.2”中鮮榨汁法蘆薈多糖樣品溶液0.5 ml，分別于1、2、3、4、5 h后測(cè)定吸光度，測(cè)得蘆薈多糖的RSD為0.411%，表明供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗(yàn)精密量取鮮榨汁法蘆薈多糖溶液2.5 ml，與1.0 g·L-1甘露糖標(biāo)準(zhǔn)液2.5 ml置于25 ml容量瓶中，混勻，用蒸餾水稀釋至刻度，用移液槍精取該液1 ml于具塞管，加入4.0 ml 0.2%蒽酮－濃硫酸液煮沸10 min，于610 nm處測(cè)吸光度，得出含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　蘆薈多糖回收率測(cè)定結(jié)果

2.8樣品含量的測(cè)定比較精密稱(chēng)取“2.2”項(xiàng)中各種制備方法所制備的蘆薈多糖供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)中方法操作，測(cè)出吸光度，根據(jù)所做的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出濃度，再通過(guò)稀釋倍數(shù)計(jì)算蘆薈凝膠中蘆薈多糖含量。得出測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　4種方法制備蘆薈凝膠中蘆薈多糖含量的比較　(n=200)

3　討論

蘆薈凝膠是以新鮮蘆薈葉肉加工制備而成，既可以保持蘆薈原植物的特殊藥效，又便于蘆薈在臨床上推廣應(yīng)用。蘆薈多糖是蘆薈的主要活性成份，可作為蘆薈凝膠的質(zhì)量控制指標(biāo)之一，本研究通過(guò)測(cè)定四種不同方法制備蘆薈凝膠中的蘆薈多糖，為篩選蘆薈凝膠的最佳制備方法提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。研究結(jié)果顯示，在鮮榨汁法、冷榨汁法、超聲提取法及酶提取法等4種方法制備的蘆薈凝膠中，以鮮榨汁法所得蘆薈凝膠中蘆薈多糖含量為最高。由于鮮榨汁法是直接選取新鮮蘆薈葉肉而成，在不破壞蘆薈原植物分子結(jié)構(gòu)的前提下，最大程度地保留了蘆薈多糖分子的生物活性。四種制備方法中鮮榨汁法制備蘆薈凝膠工藝簡(jiǎn)單易行，耗時(shí)短，保留蘆薈多糖的含量高，因此以蘆薈多糖為工藝參數(shù)，鮮榨汁法可作為蘆薈凝膠制備的最佳工藝選擇。

參考文獻(xiàn)

[1]王月華，曹立莉.杜冠華.蘆薈提取物有效成分對(duì)神經(jīng)細(xì)胞和腦線粒體的保護(hù)作用[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（3）：364-368.

[2]傅繼華，溫濤，徐琛，等.蘆薈多糖對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的影響[J].中草藥，2006，37（6）：894-897.

[3]唐建紅，劉川玉，何潔，等.蘆薈凝膠對(duì)大鼠Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（10）：156-158.

[4]孫培.蘆薈的藥理作用研究進(jìn)展[J].湖北中醫(yī)雜志，2012，34（4）：79-81.

[5]趙芯芝，甄丹丹，甄漢深，等.中藥蘆薈研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015，11(6)：45-47．

Content Comparison of Aloe Polysaccharide in Aloe Vera Gel by Four Kinds of Preparation Technology

TANG Jianhong1, LIU Chuanyu2, HE Jie2
(1. Department of Pharmacy, The Second Affiliated Hospital of Guilin Medical University, Guangxi Province, Guilin 541199, China ;
2. Department of Pharmacy, The Affiliated Hospital of Guilin Medical University, Guangxi Province, Guilin 541001, China)

Abstract:Objective To determine the content of Aloe polysaccharide in Aloe vera gel by four kinds of preparation technology. Methods Using carubinose as reference substance, we measured and compared polysaccharide content with the method of UV spectrophotometry at 610 nm absorbance. To determine the content of Aloe polysaccharide in Aloe vera gel by fresh juice, cold juice, ultrasonic extraction and enzyme extraction four kinds of methods. Results Mannose had good linear relationship within the scope of 0.05 to 0.60 (r= 0.9985) . Four kinds of preparation of aloe polysaccharide content in the aloe vera gel is fresh juicing method respectively 2.202 mg·g-1. Cold juicing method is 1.604 mg·g-1. The ultrasonic extraction method of 2.000 mg·g-1and enzymatic extraction method is 2.150 mg·g-1. Conclusion The content of polysaccharide in four kinds of preparation of aloe polysaccharide content in the aloe vera gel was differing. The fresh juicing method was the highest. This study provided scientific basis for the selection of preparation technology of Aloe vera gel.

Keywords:Aloe vera gel; Aloe polysaccharide; content

收稿日期：（本文編輯：蘇玲本文校對(duì)：童禾錫2015-10-07）

*通訊作者：1046728261@qq.com

基金項(xiàng)目：※廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專(zhuān)項(xiàng)課題（No：GZYZ1129）；廣西衛(wèi)生廳科技計(jì)劃課題（No：Z2011166）；廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（No：桂科攻1355004- 8）；廣西教育廳科技項(xiàng)目（No：2013LX073）；廣西省桂林市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（No：20110322）

doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2016.01.073

文章編號(hào)：1672-2779（2016）-01-0139-02