陸毅奇　黃劍崗　王祥林

1)揚(yáng)州大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院常熟市二院老年醫(yī)學(xué)科　常熟　215500　2)江蘇常熟市中醫(yī)院心血管內(nèi)科　常熟　215500

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老年急性腦梗死患者血漿熱休克蛋白70和血清白介素10及18水平測定的價(jià)值

陸毅奇1)黃劍崗1)王祥林2)△

1)揚(yáng)州大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院常熟市二院老年醫(yī)學(xué)科常熟2155002)江蘇常熟市中醫(yī)院心血管內(nèi)科常熟215500

【摘要】目的探討外周血指標(biāo)水平的變化與病情進(jìn)展及動(dòng)脈粥樣硬化程度的關(guān)系，評(píng)價(jià)其測定的臨床價(jià)值。方法血漿HSP70水平檢測方法采用酶聯(lián)免疫法，血清IL-10和IL-18水平測定采用放射免疫分析法。血清糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)水平測定均采用7600-020型全自動(dòng)生化儀檢測。頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(IMT)采用彩色多普勒超聲儀測定。結(jié)果患者組高血壓家族史、急性腦梗死(ACI)家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8項(xiàng)因素與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。3組不同病情患者外周血指標(biāo)水平顯示，輕型腦梗死組IL-10水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而IL-18水平則顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；中型組和重型組3項(xiàng)外周血指標(biāo)與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)；相鄰組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。將IMT與HSP7O、HbAlc、IL-10和IL-18水平分別行相關(guān)性分析，分別為r=0.176，P<0.05，r=0.231，P<0.01，r=-0.144，P<0.05和r=0.345，P<0.01。結(jié)論外周血標(biāo)志物參與了ACI的病理過程，其測定對(duì)于了解、評(píng)估腦梗死病情和抗感染免疫功能及動(dòng)脈粥樣硬化程度有較大幫助。

【關(guān)鍵詞】急性腦梗死；熱休克蛋白70；動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度；白介素10；白介素18

熱休克蛋白(HSPs)是機(jī)體在遭受各種應(yīng)激性損害時(shí)所產(chǎn)生的一組具有高度保守性的蛋白質(zhì)，又稱應(yīng)激蛋白。其在人體生理和病理狀態(tài)下具有重要的細(xì)胞保護(hù)作用。國內(nèi)研究[1]認(rèn)為，HSP70對(duì)神經(jīng)損傷具有保護(hù)作用，其含量的變化與腦損傷程度密切相關(guān)，已成為近年來神經(jīng)損傷研究領(lǐng)域中少數(shù)幾個(gè)熱點(diǎn)血液生化標(biāo)志物之一。有研究[2]還闡明，急性腦梗死(acute cerebral infarction，ACI)患者血漿熱休克蛋白70(heat-shock proteins 70，HSP70)發(fā)生了顯著變化，且與病情的進(jìn)展程度關(guān)系一致。為進(jìn)一步探討外周血中相關(guān)標(biāo)志物水平的變化與病情進(jìn)展的關(guān)系，評(píng)價(jià)其測定的臨床價(jià)值，本研究測定了32例ACI患者的血漿HSP70、血清IL-10和IL-18等指標(biāo)水平，并與其他血清生化指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)性分析?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象選擇2012-01-2013-12入住我院和中醫(yī)院的老年腦梗死患者32例，男25例，女7例，年齡61～88歲，平均(71.7±5.9)歲。(1)ACI診斷及分組符合《腦卒中患者臨床神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)》[3]。所有病例均經(jīng)頭顱CT或MRI證實(shí)。(2)病程選擇發(fā)病第1天，并均首次發(fā)病。按該標(biāo)準(zhǔn)[3]將不同病情患者分為輕型(n=12)、中型(n=8)和重型(n=12)3組進(jìn)行測定。另選擇同期來我院健康體檢中心的健康老年人35例為對(duì)照組，男25例，女10例，年齡60～79(67.3±6.5)歲。臨床三大常規(guī)、血清學(xué)、肝腎功能、生化、免疫學(xué)指標(biāo)水平均屬正常范圍。排除心理疾病及其他急、慢性感染和患者組所列疾病。亦未接受過各種免疫功能制劑的治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并房顫、感染性心內(nèi)膜炎、全身感染、腫瘤、糖尿病患者以及心、肝、腎衰竭者、疑似腦卒中的疾病，如低血糖、偏頭痛、腦出血及短暫性腦缺血發(fā)作。既往也未接受過各種免疫功能制劑的治療。

1.2測定方法

1.2.1標(biāo)本采集：分別抽取ACI患者入院后清晨空腹肘靜脈血6 mL，將3 mL血注入含有40 μL 10% EDTA-Na2和60 μL抑肽酶的抗凝試管中混勻，余3 mL注入干燥潔凈的玻璃試管中，均于2 500 r/min，2～6 ℃低溫離心10 min分離血漿和血清，將其注入各自試管中，加蓋塞緊，置于-70 ℃低溫冰箱中保存待測。正常對(duì)照組標(biāo)本采集條件相同。

1.2.2測定方法：血漿HSP70水平檢測采用酶聯(lián)免疫法，試劑盒由愛爾蘭Biotrin International公司提供。檢測儀器為美國生產(chǎn)的FAMIER-150型全自動(dòng)酶標(biāo)分析系統(tǒng)。血清IL-10和IL-18水平測定采用放射免疫分析法，試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。測量儀器為由安徽中科中佳科技有限公司生產(chǎn)的GC-911型全自動(dòng)γ-計(jì)數(shù)器。血清糖化血紅蛋白(glycohemoglobin A1c，HbA1c)、TC、TG、LDL-c、HDL-c水平測定均采用日立公司生產(chǎn)的7600-020型全自動(dòng)生化儀檢測。操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2腦梗死程度判定：將32例腦梗死患者于入院時(shí)分別按[3]進(jìn)行評(píng)分，用于實(shí)施不同病情的分組研究。最高評(píng)分為45分(重型腦損傷)，最低為0分(正常腦功能)。本文3組評(píng)分情況：輕型腦梗死組(12例，評(píng)分0～15分)、中型腦梗死組(8例，評(píng)分16～30分)和重型腦梗死組(12例，評(píng)分31～45分)。

1.2.3IMT測定：于入院第1天采用美國通用電器公司(GE)的VIVID-7彩色多普勒超聲儀檢測雙側(cè)頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(intima-media thickness，IMT)，取雙側(cè)IMT均值。按斑塊積分法[2]：不計(jì)算各斑塊長度，只分別將同側(cè)各孤立的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的最大厚度(mm)進(jìn)行相加，得到該頸動(dòng)脈斑塊積分，兩側(cè)頸動(dòng)脈斑塊積分之和為斑塊總積分，斑塊積分1.1～5.0為輕度頸動(dòng)脈粥樣硬化；5.1～10.0為中度頸動(dòng)脈粥樣硬化；>10.0為重度頸動(dòng)脈粥樣硬化。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用直線回歸相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.12組臨床資料和常規(guī)檢查指標(biāo)水平比較患者組性別、年齡、吸煙百分率，飲酒百分率和TC 5項(xiàng)指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但高血壓家族史、ACI家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8項(xiàng)因素與對(duì)照組比較差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。見表1。

表12組臨床資料和常規(guī)檢查指標(biāo)

指 標(biāo)患者組(n=32)對(duì)照組(n=35)t/χ2值P值年齡/歲71.7±5.969.3±6.50.6420.601性別(男)/%65.2370.120.0120.965吸煙百分率/%52.1748.860.1450.699飲酒百分率/%21.7817.860.1360.708高血壓家族史/%10.8952.217.7820.000ACI家族史/%6.1218.236.5620.000血糖(mmol/L)6.87±0.974.98±0.790.6980.001TC(mmol/L)4.09±0.464.01±0.390.4090.498TG(mmol/L)1.89±0.431.03±0.249.5620.000LDLc(mmol/L)4.15±0.692.35±0.377.9740.000HDLc(mmol/L)1.21±0.151.95±0.180.7520.000HbA1c/%6.26±0.754.72±0.5314.8710.000IMT(mm)1.12±0.290.71±0.2113.8930.000

2.2不同病情ACI患者與對(duì)照組外周血指標(biāo)水平比較3組不同病情患者外周血指標(biāo)水平顯示，輕型腦梗死組IL-10水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而IL-18水平則顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；中型組和重型組3項(xiàng)外周血指標(biāo)與對(duì)照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)；相鄰組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2不同病情ACI患者與對(duì)照組外周血指標(biāo)水平

組別nHSP70(ng/L)IL10(pg/mL)IL18(pg/mL)對(duì)照組3514.09±4.0249.41±9.12201.77±71.98輕型組1217.12±6.0130.10±7.61a308.09±81.75a中型組829.31±10.02a25.96±5.79b387.09±89.76b重型組1248.31±16.28bc15.27±8.87bc472.07±98.39bc

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與相鄰組比較，cP<0.05

2.3IMT與外周血四項(xiàng)指標(biāo)水平的相關(guān)性分析見表3。

表3　IMT與外周血四項(xiàng)指標(biāo)水平的相關(guān)性分析

3討論

HSPs是生物細(xì)胞在受熱和其他應(yīng)激因素(如缺血、缺氧)刺激后，產(chǎn)生的一組特殊的蛋白質(zhì)，它能保護(hù)機(jī)體細(xì)胞在隨后的致死性應(yīng)激中不受或少受傷害，即應(yīng)激耐受性。而HSP70是HSPs家族中最為重要的一族，具有分子伴侶功能，參與免疫反應(yīng)、抗細(xì)胞凋亡、抗氧化、提高細(xì)胞的應(yīng)激耐受性、促進(jìn)細(xì)胞增殖、參與細(xì)胞骨架的形成和修復(fù)等。研究[5]發(fā)現(xiàn)，具有γδT細(xì)胞受體并誘導(dǎo)細(xì)胞毒性的胸腺依賴性淋巴細(xì)胞表達(dá)HSP70的炎性巨噬細(xì)胞，從而使宿主器官免受因巨噬細(xì)胞所致的局部組織損傷，是一種人體重要的多功能保護(hù)性蛋白伴侶，許多疾病的發(fā)生和發(fā)展都伴隨著該指標(biāo)水平的變化。

表1結(jié)果顯示，患者組高血壓家族史、ACI家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較均存在顯著性差異(P均<0.01)。表明患者體內(nèi)的8項(xiàng)指標(biāo)處于高水平狀態(tài)。由于以往文獻(xiàn)[2，6]對(duì)臨床記錄資料與ACI發(fā)病的關(guān)系觀點(diǎn)和結(jié)果不一，故筆者僅選擇了HbA1c和IMT二項(xiàng)檢測指標(biāo)與HSP70進(jìn)行了相關(guān)性分析。

表2結(jié)果示，中型和重型腦梗死組患者血漿HSP70水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05或0.01)；相鄰組比較也均存在顯著差異(P<0.05)。與IMT的相關(guān)分析結(jié)果顯示，前者呈顯著正相關(guān)(r=0.023，P<0.05)，且發(fā)現(xiàn)IMT與HbA1c的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(P<0.01，r=-0.144)。結(jié)果表明，中型和重型ACI組患者HSP70水平均顯著升高。再次證實(shí)了ACI患者血漿HSP70的表達(dá)水平與腦梗死程度呈平行關(guān)系；即梗死組織破壞越重表達(dá)水平越高。有關(guān)其在ACI患者血漿中升高的原因較為復(fù)雜。究其原因，筆者認(rèn)為還是與患者ACI導(dǎo)致腦組織缺血缺氧、壞死，炎癥滲出，引起炎性細(xì)胞因子大量合成分泌有關(guān)。因此時(shí)患者的防御機(jī)制為保障體內(nèi)細(xì)胞大量應(yīng)激合成蛋白質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)，用于應(yīng)激性防御需要。同時(shí)機(jī)體的體溫調(diào)節(jié)中樞即應(yīng)激下調(diào)，體溫升高；相關(guān)細(xì)胞和體液的信號(hào)通路將誘導(dǎo)伴侶性功能蛋白-HSP70的伴隨合成并向細(xì)胞外釋放，導(dǎo)致循環(huán)血液中水平升高。本文中中型和重型ACI組患者IL-18水平的升高，也證實(shí)ACI患者血漿HSP70的表達(dá)水平與炎癥發(fā)生、發(fā)展存在密切的因果關(guān)系。故有研究將其譽(yù)為細(xì)胞受損敏感而可靠的指標(biāo)之一。在臨床內(nèi)外科和其他各專業(yè)系統(tǒng)疾病的研究中，各種應(yīng)激刺激均可誘導(dǎo)熱休克基因的表達(dá)。值得一提的是，本文還發(fā)現(xiàn)重型ACI組患者的HSP70表達(dá)水平與IMT值存在顯著的正相關(guān)；IMT與HbA1c的表達(dá)水平也呈顯著正相關(guān)。提示HSP70和HbA1c水平的升高與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生與發(fā)展關(guān)系密切，2種指標(biāo)的測定對(duì)于了解患者由動(dòng)脈粥樣硬化向ACI的病理進(jìn)展機(jī)制和評(píng)估病情有不可忽視的應(yīng)用價(jià)值。到目前為止，本指標(biāo)的測定雖尚缺乏可靠的診斷特異性，但可為進(jìn)一步深入研究人體的應(yīng)激、保護(hù)性防御機(jī)制的運(yùn)作，提供了又一個(gè)新的生物學(xué)指標(biāo)。

再從血清IL-10和IL-18水平的變化特點(diǎn)看，其水平于輕度ACI組前者顯著低于對(duì)照組，而后者則顯著高于對(duì)照組(P均<0.05)，中型和重型組患者水平均呈顯著低下及顯著高水平態(tài)勢(shì)(P<0.01)。二者與IMT值分別存在顯著的負(fù)相關(guān)和正相關(guān)性(r=-0.144，r=0.345，P<0.05或<0.01)。國外學(xué)者[7]的研究也提示，血清HSP70和炎性細(xì)胞因子的含量呈正相關(guān)，并認(rèn)為HSP70升高是機(jī)體細(xì)胞啟動(dòng)免疫保護(hù)反應(yīng)的上游事件。Yoshikai等[8]也證實(shí)，HSP70可活化CD4+T細(xì)胞，產(chǎn)生IL-10，從而可抑制Th1細(xì)胞介導(dǎo)的過度炎癥反應(yīng)。但如果HSP 70產(chǎn)生過量，也能抑制IL-10的產(chǎn)生，而不能抑制IL-6的生成[9]。由于IL-18與IL-6同為致炎性細(xì)胞因子，故可以確認(rèn)本文結(jié)果與上述文獻(xiàn)基本吻合。又因二者在炎癥感染和抗感染的病理過程中是一對(duì)功能相互拮抗的平衡體系。二者的變化隨病情的加重其水平呈負(fù)向形梯度式減增，顯示患者體內(nèi)存在明顯的感染-抗感染功能的失調(diào)，同時(shí)又可說明患者存在細(xì)胞免疫功能的降低。其測定對(duì)于臨床了解患者的抗感染免疫功能狀態(tài)有不可忽視的作用。而用于評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化程度筆者認(rèn)為價(jià)值似不大。理由是因二者在ACI的病程進(jìn)展中與其他病理應(yīng)激機(jī)制存在諸多交叉，如炎癥應(yīng)激的啟動(dòng)、細(xì)胞免疫應(yīng)答上調(diào)，甚至還涉及到組織的精細(xì)解剖的改變和修復(fù)過程的參與等人體整套防御機(jī)制的運(yùn)作，故認(rèn)為要明確其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值尚待大樣本量的基礎(chǔ)及臨床研究。

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【中圖分類號(hào)】R743.33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1673-5110(2016)02-0032-03

通訊作者：△王祥林，E-mail：csxqyy@sina.com