張　贊，陳娜云，孫　陽，姚仁南

(中國人民解放軍九七醫(yī)院輸血科，江蘇徐州 221004)

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·論著·

梅毒螺旋體明膠凝集試驗對酶聯(lián)免疫吸附試驗法和金標(biāo)法梅毒抗體檢測的結(jié)果評價*

張贊，陳娜云，孫陽，姚仁南△

(中國人民解放軍九七醫(yī)院輸血科，江蘇徐州 221004)

摘要:目的應(yīng)用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)法對ELISA法和膠體金法梅毒血清學(xué)檢測試劑的臨床適用性進(jìn)行評價。方法收集6 291例臨床手術(shù)前或輸血前住院患者的血清標(biāo)本，采用ELISA法(試劑A、試劑B)和金標(biāo)法分別進(jìn)行初篩檢測，初篩陽性或弱陽性標(biāo)本用TPPA法做確證試驗。結(jié)果血清標(biāo)本6 291份中，試劑A、試劑B、金標(biāo)法檢測陽性分別為66、64、56份，金標(biāo)法陽性檢出率與試劑A、B比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。陽性標(biāo)本經(jīng)TPPA確證為66份，其中試劑A、試劑B陽性均為61份，金標(biāo)法為56份。試劑A檢測為陽性的5份標(biāo)本及試劑B檢測為陽性的3份標(biāo)本，經(jīng)TPPA確證為陽性的分別為3、2份，金標(biāo)法靈敏度與試劑A、B比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論ELISA法靈敏度高，易實現(xiàn)自動化酶聯(lián)免疫分析，適合臨床手術(shù)前或輸血前患者標(biāo)本的篩查，金標(biāo)法靈敏度低，但特異度高，方法簡捷，適用于大規(guī)模健康體檢及急診手術(shù)前的初篩試驗。為避免醫(yī)療糾紛，對ELISA法和金標(biāo)法陽性的標(biāo)本應(yīng)用TPPA法來確診。

關(guān)鍵詞:梅毒；梅毒螺旋體明膠凝集試驗；酶聯(lián)免疫吸附試驗；膠體金法

梅毒是臨床上常見的一種經(jīng)血液和性傳播的傳染性疾病，是由密螺旋體屬蒼白螺旋體的蒼白亞種感染人體后引起的一種慢性傳播疾病。梅毒可以引起患者的皮膚黏膜、心血管系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)等的病變。其病變過程比較緩慢，病程可以長達(dá)數(shù)十年，如果不及時診斷和系統(tǒng)治療，可以引起嚴(yán)重的病變，對患者造成極大的危害[1]。實驗室檢查結(jié)果對于梅毒的篩查具有重要的作用，對于早期發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體(TP)感染及監(jiān)測臨床治療效果均有不可替代的作用[2]。本研究分別應(yīng)用ELISA法及金標(biāo)法對2014年2～7月的臨床手術(shù)前或輸血前住院患者血清標(biāo)本進(jìn)行檢測，旨在探討各檢測試劑的臨床適用性?，F(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源本院2014年2～7月的臨床術(shù)前或輸血前住院患者血清標(biāo)本6 291份。

1.2儀器與試劑上?？迫AST-360酶標(biāo)儀，伯樂1575型全自動酶標(biāo)洗板機(jī)。梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)試劑盒為日本富士生物制品株式會社產(chǎn)品，批號VN30714；2種抗-TP ELISA試劑盒分別為上海科華實業(yè)有限公司生產(chǎn)的第三代批檢合格產(chǎn)品，批號201401031(ELISA法試劑A)，北京萬泰實業(yè)有限公司生產(chǎn)的第三代批檢合格試劑盒，批號N20140115(ELISA法試劑B)。金標(biāo)法檢測試劑為廈門英科新創(chuàng)科技有限公司產(chǎn)品，批號2014020909。本次試驗質(zhì)控品由衛(wèi)生與計劃生育委員會臨檢中心提供。

1.3檢測方法6 291例臨床手術(shù)前或輸血前住院患者血清標(biāo)本，分別進(jìn)行ELISA法試劑A、ELISA法試劑B、金標(biāo)法檢測，陽性標(biāo)本經(jīng)同批號試劑復(fù)查結(jié)果不變的，應(yīng)用TPPA法做確證試驗。各種試劑操作方法及結(jié)果判斷均嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行。血清標(biāo)本經(jīng)首次檢測為陽性后，置于-80 ℃冰箱存放，避免被檢標(biāo)本反復(fù)凍融。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.13種梅毒血清學(xué)檢測試劑結(jié)果比較6 291份血清標(biāo)本經(jīng)ELISA法試劑A、試劑B、金標(biāo)法檢測，陽性標(biāo)本分別為66份(1.05%)、64份(1.02%)、56份(0.89%)，金標(biāo)法陽性檢出率與ELISA法試劑A、ELISA法試劑B比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2TPPA法對3種梅毒血清學(xué)檢測試劑的評價TPPA法檢測結(jié)果顯示，陽性標(biāo)本66份。其中試劑A、試劑B均陽性61份，金標(biāo)法陽性為其中56份。試劑A檢測為陽性的5份標(biāo)本經(jīng)TPPA確證3份為陽性，試劑B檢測為陽性的5份標(biāo)本經(jīng)TPPA確證2份為陽性。試劑A、試劑B靈敏度分別為96.97%(64/66)、95.45%(63/66)。金標(biāo)法檢測陽性56份，靈敏度為84.85%(56/66)。金標(biāo)法與試劑A、試劑B靈敏度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　　TPPA法對試劑A、試劑B和金標(biāo)法陽性標(biāo)本

*：P<0.05，與試劑A、試劑B比較。

2.3ELISA法試劑A、試劑B和金標(biāo)法檢測結(jié)果不一致的10份標(biāo)本原始數(shù)據(jù)分析10份血清標(biāo)本ELISA法試劑A、試劑B檢測的標(biāo)本吸光度/臨界值(S/CO)均較低，大部分處于臨界值附近，金標(biāo)法檢測結(jié)果均為陰性。這10份血清標(biāo)本中TPPA法陽性7份，其滴度均較低(≤160)。數(shù)據(jù)顯示ELISA法試劑檢測結(jié)果在臨界值附近時，金標(biāo)法的靈敏度大大降低，提示單獨使用金標(biāo)法檢測會導(dǎo)致漏檢。見表2。

表2　　10份3種梅毒血清學(xué)檢測不一致結(jié)果

續(xù)表2　　10份3種梅毒血清學(xué)檢測不一致結(jié)果

TPPA法：(滴度)≥1:80即為陽性；試劑A、試劑B：(S/CO)≥1即為陽性。

3討論

梅毒是嚴(yán)重危害人類健康的一種性傳播疾病，具有高度的傳染性，癥狀多樣，且傳播途徑多，潛伏期長，發(fā)病初期常被患者忽視，易造成誤診、漏診，社會危害極大[3-4]。近年來隨著人們思想的開放，社會活動增加和流動人口的加劇，梅毒感染率呈明顯增長趨勢,已成為較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。與此同時，梅毒與艾滋病密切相關(guān)，梅毒發(fā)病率高，意味著性亂現(xiàn)象嚴(yán)重，提供了艾滋病流行的條件。從醫(yī)學(xué)角度來說，患有梅毒的人艾滋病感染的易感性會增加2～10倍[5]。臨床發(fā)現(xiàn)，除人為原因可引起梅毒檢測假陽性外，還有生物學(xué)假陽性反應(yīng)、非密螺旋體疾病的病原體和某些疾病所致的反應(yīng)素反應(yīng)，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、瘧疾、斑疹傷寒及乙型肝炎等[6]，此外，為防止梅毒院內(nèi)感染，明確醫(yī)患責(zé)任，在臨床手術(shù)前或輸血前進(jìn)行TP篩查意義重大。所以對梅毒陽性標(biāo)本應(yīng)采用TPPA檢測方法，并結(jié)合臨床做好確診工作[7]。

目前，臨床常用的梅毒抗體血清學(xué)檢測方法為TPPA法、ELISA法、金標(biāo)法。TPPA主要是把純化致病性梅毒的精致菌株成分包被在人工載體明膠粒子上檢測血清中相應(yīng)的抗體。其靈敏度和特異度均較高，對各期梅毒的檢測都有較好的穩(wěn)定性，不易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，作為確證試驗被廣泛使用，尤其對被檢標(biāo)本在臨界值的情況下有較高的準(zhǔn)確度。但其操作步驟繁瑣，檢測時需要將標(biāo)本做系列倍比稀釋，由于手工操作，大批量標(biāo)本檢測時會增加差錯概率。肉眼判讀結(jié)果較為主觀，結(jié)果不易保存，又因試劑盒的價格較為昂貴，臨床上難以將其作為常規(guī)的梅毒篩查項目來廣泛開展[8]。

ELISA法的靈敏度高，對于梅毒窗口期可表現(xiàn)為陽性結(jié)果[9]。原理是利用基因工程合成梅毒特異性抗原包被在微孔板上來檢測梅毒特異性抗體(IgM、IgG)。當(dāng)梅毒感染機(jī)體后，首先出現(xiàn)IgM抗體，隨著疾病的發(fā)展，IgG抗體隨后才慢慢上升[10]。即使經(jīng)過治療IgG抗體在相當(dāng)長的時間內(nèi)仍可存在較高的陽性率，甚至終生陽性[11]。因而ELISA法檢測梅毒可避免因治療或非活動期梅毒造成的漏檢。本研究結(jié)果顯示，ELISA法試劑A、試劑B靈敏度分別達(dá)到96.97%(64/66)、95.45%(63/66)，與TPPA靈敏度相近。數(shù)據(jù)還顯示試劑A、試劑B同時陽性的61份標(biāo)本TPPA也陽性，提示使用不同廠家試劑同時檢測可提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。ELISA法具有靈敏度、特異度、陽性符合率較高等優(yōu)點，且較易實現(xiàn)自動化酶聯(lián)免疫分析，能夠進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，更符合實驗室室內(nèi)和室間質(zhì)量控制的要求。其結(jié)果判讀客觀，原始資料易于保存，具有溯源性。所以ELISA法是目前梅毒血清學(xué)診斷的最佳方法之一[12]。

金標(biāo)法是結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)與色譜層析技術(shù)的一項快速檢測技術(shù)，具有方便快捷、成本低、對實驗室環(huán)境要求不高、判讀結(jié)果直觀等特點，可在診斷領(lǐng)域中迅速推廣[13]。本研究結(jié)果顯示，金標(biāo)法陽性檢出率為0.89%，與試劑A、B比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。金標(biāo)法的靈敏度為84.85%(56/66)，與試劑A、試劑B比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因其靈敏度較低，易出現(xiàn)假陰性，所以只適合大批量的健康體檢及急診手術(shù)的初篩試驗。

綜上所述，ELISA法具有較高的靈敏度、特異度和陽性符合率，與TPPA法相比，其成本低廉，且較易實現(xiàn)自動化酶聯(lián)免疫分析，適用于大批量的臨床手術(shù)或輸血前標(biāo)本的篩查工作。金標(biāo)法具有檢測時間快、假陽性少的優(yōu)點，但其靈敏度較低，適用于大批量的健康體檢及急診手術(shù)前的初篩試驗。為避免醫(yī)療糾紛，對ELISA法檢測陽性的標(biāo)本和金標(biāo)法檢測陽性的標(biāo)本，均應(yīng)采用TPPA法來確診。

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TPPA method for evaluating ELISA method and colloidal gold method in detection results of syphilis antibody*

ZhangZan,ChenNayun,SunYang,YaoRennan△

(DepartmentofBloodTransfusion,97HospitalofPLA,Xuzhou,Jiangsu221004,China)

Abstract:ObjectiveTo use the syphilis helicoid gelatin aggregation experiment (TPPA) method to compare the results of syphilis serological detection reagents between the ELISA method and the colloidal gold method for evaluating the clinical applicability of each detection reagent.Methods6 291 serum samples were selected from the hospitalized patients before surgery or before blood transfusion,and performed the preliminary screening detection by the ELISA method (reagent A and B) and the colloidal gold method,the positive or weakly positive specimens in preliminary screening were performed the confirmation test by the TPPA method.ResultsIn 6 291 serum specimens,the positive cases of the reagent A,reagent B and colloidal gold method were 66,64 and 56 cases respectively,the positive detection rate of colloidal gold method had no obvious difference between the reagent A and reagent B (P>0.05).The positive samples were confirmed to be 66 cases by TPPA,including 61 cases of reagent A and reagent B positive,and the colloidal gold method had 56 cases.5 cases of reagent A positive and 3 cases of reagent B positive were confirmed to be 3 and 2 cases by TPPA respectively,the sensitivity of the colloidal gold method had significant difference between the reagent A and reagent B(P<0.05).ConclusionELISA method has high sensitivity and is easy to realize the automated enzyme-linked immunoassay,which is suitable for the screening of the patient sample before surgery or before blood transfusion.The colloidal gold method has low sensitivity,but high specificity,is simple and convenient which is suitable for large-scale healthy physical examination and preliminary screening test before emergency surgery.In order to avoid medical disputes,the positive samples by the ELISA method and colloidal gold method should be confirmed by the TPPA method.

Key words:syphilis;syphilis helicoid gelatin aggregation experiment;enzyme-linked immunosorbent assay;colloidal gold method

(收稿日期：2015-08-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.002

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)03-0291-03

通訊作者△，E-mail：yaorn97@sohu.com。

作者簡介：張贊，男，主管技師，主要從事采供血、輸血前免疫檢測研究。

*基金項目：南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新重點課題項目(14ZD17)。