趙全能，楊珍珍，萬正宇，李多孚△

(1.南充市中心醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000；2.四川省瀘州市第一人民醫(yī)院，四川瀘州 646099)

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·論著·

肝素鋰對比濁法檢測微量總蛋白的干擾分析

趙全能1，楊珍珍1，萬正宇2，李多孚1△

(1.南充市中心醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000；2.四川省瀘州市第一人民醫(yī)院，四川瀘州 646099)

摘要:目的證實肝素鋰對比濁法檢測微量總蛋白的干擾效應(yīng)，并對其進行相關(guān)方法性能評價。方法分別配對檢測8份不同濃度微量總蛋白尿液干擾標本，篩查判斷肝素鋰是否是試驗的干擾物；濃度0.172、0.427 g/L微量蛋白質(zhì)標本中分別加入不同量的肝素鋰(干擾物試驗系列樣品，肝素鋰濃度分別為0.000、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050 mg/L)，重復(fù)檢測4次，進行干擾物劑量效應(yīng)試驗。結(jié)果干擾標本檢測結(jié)果顯示，8份含肝素鋰與不含肝素鋰的配對標本中最大偏倚為159.37%，最小偏倚為11.37%，2組間結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=17.24,P< 0.05)；濃度為0.025 mg/L肝素鋰對0.172 g/L微量蛋白質(zhì)標本干擾效果的95%置信區(qū)間為0.034～0.062；0.030 mg/L肝素鋰對0.427 g/L干擾效果的95%置信區(qū)間為0.043～0.053；肝素鋰濃度分別為0.025 mg/mL和0.050 mg/mL時，0.172 g/L微量蛋白質(zhì)標本的結(jié)果偏倚分別為27.33%、58.14%；肝素鋰濃度分別為0.030 mg/mL和0.050 mg/mL時，0.427 g/L微量蛋白質(zhì)標本的結(jié)果偏倚分別為11.24%、18.74%；同系列濃度的肝素鋰對0.172 g/L和0.427 g/L微量蛋白質(zhì)標本的干擾物劑量呈線性相關(guān)，其線性方程分別為Y=1.974X-0.001 03,Y=1.599X-0.000 5。結(jié)論肝素鋰是比濁法檢測微量蛋白質(zhì)的外源性干擾物，它對微量蛋白質(zhì)檢測結(jié)果為正干擾，特別對低水平微量蛋白質(zhì)檢測的干擾效果更明顯，且隨著肝素鋰濃度升高，干擾效果越強。

關(guān)鍵詞:干擾試驗；微量蛋白質(zhì)；尿液；腦脊液；肝素鋰

微量蛋白質(zhì)的檢測主要用于尿液和腦脊液標本檢測，這些標本中蛋白質(zhì)水平升高是早期腎病、糖尿病、高血壓、甲狀腺疾病、腦膜炎、腦腫瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等疾病的診斷和療效觀察的重要指標。影響微量蛋白質(zhì)檢測結(jié)果的因素較多，其中干擾物對試驗的干擾是重要的影響因素之一。在應(yīng)用比濁法檢測微量蛋白質(zhì)過程中，發(fā)現(xiàn)肝素鋰污染以上標本后，可能導(dǎo)致微量蛋白質(zhì)結(jié)果明顯升高的現(xiàn)象，肝素鋰是否是影響比濁法檢測微量蛋白質(zhì)結(jié)果的干擾物質(zhì)？目前相關(guān)文獻鮮有報道。本研究按照WS/T416-2013 《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準——干擾實驗指南》，對此進行了探討，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源8份含不同水平的微量質(zhì)白質(zhì)新鮮隨機尿液，離心，待用。2份含微量蛋白質(zhì)濃度為0.172、0.427 g/L的新鮮隨機尿液標本，離心，待用。

1.2儀器與試劑日立7600-110型生化分析儀。微量總蛋白檢測試劑由羅氏診斷有限公司生產(chǎn)，批號601011-01。肝素鋰由博美生物科技有限公司生產(chǎn)，批號S856V1123。

1.3方法

1.3.1比濁法標本預(yù)先在含有乙二胺四乙酸(EDTA)的堿性溶液中孵育，使其中的蛋白質(zhì)變性，并消除鎂離子的干擾性，然后加入芐索氯銨，產(chǎn)生的濁度與蛋白質(zhì)濃度呈正比，505 nm處讀取吸光度(OD)值。

1.3.2配制干擾物將肝素鋰用生理鹽水配制成濃度為1 mg/mL的干擾物原液，再稀釋成濃度為0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL系列溶液，于2～8 ℃保存待用。

1.3.3干擾篩查試驗8份含不同濃度的微量蛋白質(zhì)尿液標本4 200 r/min離心5 min。每份標本各分裝2份，每份0.95 mL。其中1份加入肝素鋰原液0.05 mL(濃度0.05 mg/mL)為干擾標本；另1份加入生理鹽水0.05 mL為對照標本。以上標本，混勻后，按1→8，8→1順序各重復(fù)檢測4次，記錄結(jié)果。

1.3.4肝素鋰干擾比濁法檢測微量蛋白質(zhì)的判斷標準干擾篩查試驗配對標本間的結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且偏倚大于或等于10%。其判定依據(jù)以下標準：(1)CLIA′88常見生化質(zhì)量指標中總蛋白的允許總誤差小于10%[1]；(2)本試劑盒聲明(見試劑盒說明書)檢測微量質(zhì)白質(zhì)的最大變異系數(shù)(CV)不超過5.3%，偏倚大于或等于10%則完全排除試驗不精密度引起的試驗誤差。

1.3.5干擾物劑量效應(yīng)評價試驗按文獻[1-2]的方法進行干擾物劑量效應(yīng)評價試驗。用濃度為0.172、0.427 g/L的微量蛋白尿液標本，制備對照樣品和試驗樣品。(1)對照標本：0.95 mL尿液標本與0.05 mL生理鹽水混合制備，肝素鋰濃度為0.000。(2)試驗標本：0.95 mL尿液標本與0.05 mL不同濃度的肝素鋰溶液混合，配制成含肝素鋰終濃度為0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050 mg/mL的6個系列試驗樣品。每個濃度標本分為4支，待用。將上述所有樣品按干擾物濃度從低到高、從高到低、再從低到高的順序，4次重復(fù)檢測，記錄檢測結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用Excel2007軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析。配對資料組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。參考文獻[1]計算干擾效果的95%置信區(qū)間。采用直線相關(guān)分析評價干擾效果是否呈線性相關(guān)。

2結(jié)果

2.1肝素鋰對比濁法檢測微量蛋白質(zhì)結(jié)果的干擾篩查檢測8份干擾篩查(配對)標本，干擾標本與對照標本結(jié)果間最小偏倚是11.37%，最大偏倚是159.37%，2組標本檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=17.24,P<0.05)。見表1。

表1　　肝素鋰(0.05 mg/mL)對8份標本檢測微量蛋白

2.2干擾物劑量效應(yīng)評價試驗不同濃度肝素鋰對低濃度微量蛋白質(zhì)(0.172 g/L)標本和病理濃度微量蛋白質(zhì)(0.427 g/L)標本的干擾效果和偏倚見表2～3。

2.3干擾效應(yīng)的95%置信區(qū)間含0.172 g/L微量蛋白質(zhì)標本，0.025 mg/L肝素鋰干擾效果的95%置信區(qū)間為0.034～0.062；而0.427 g/L微量蛋白質(zhì)標本，0.030 mg/L肝素鋰干擾效果的95%置信區(qū)間0.043～0.053。

2.4干擾物劑量相關(guān)的線性肝素鋰分別對含0.172、0.427 g/L微量蛋白標本的干擾物劑量相關(guān)線性分析，其線性方程分別為Y=1.974X-0.001 03(r=0.999,t=1 039.94,P<0.05)；Y=1.599X-0.000 5(r=0.997，t=761.43,P<0.05)。

表2　　肝素鋰對尿液微量蛋白測定(0.172 g/L)的干擾效果

-：無數(shù)據(jù)。

表3　　肝素鋰對尿液微量蛋白測定(0.427 g/L)的干擾效果

-：無數(shù)據(jù)。

圖1　　微量蛋白濃度為0.172 g/L時干擾效果

圖2　　微量蛋白濃度為0.427 g/L時干擾效果

2.5干擾物濃度與微量蛋白質(zhì)測量值的關(guān)系肝素鋰可致微量蛋白質(zhì)測定結(jié)果明顯升高，它對0.172 g/L水平微量蛋白質(zhì)檢測的干擾效果，較對0.427 g/L水平微量蛋白質(zhì)檢測更明顯。見圖1～2。

3討論

筆者在工作中發(fā)現(xiàn)肝素鋰污染微量蛋白質(zhì)標本后，應(yīng)用比濁法檢測微量蛋白質(zhì)，其結(jié)果明顯升高。本文參考文獻[1]，圍繞干擾，進行了相關(guān)方法性能評價。

本文對所檢測試驗標本，均重復(fù)了4次，并計算了批內(nèi)精密度，結(jié)果顯示，比濁法檢測微量蛋白質(zhì)的最大CV(2.77%)小于試劑盒說明書最大允許CV(5.3%)，同時也未超過蛋白質(zhì)測定的試驗允許總誤差(10%)。由此說明，干擾篩查試驗中干擾(配對)標本結(jié)果間的偏倚不是由試驗變異引起的，而是肝素鋰的干擾作用結(jié)果。本研究結(jié)果還證實，肝素鋰對檢測不同濃度微量蛋白質(zhì)的干擾效果呈線性相關(guān)，從線性方程可見，斜率為正值，表明其肝素鋰引起干擾為正干擾，當樣品中污染肝素鋰時，可以導(dǎo)致檢測結(jié)果明顯升高。

有文獻指出，在測定分析物過程中，不同濃度的干擾物所產(chǎn)生的干擾作用有一定的差異，因此在進行配對差異試驗時有必要選擇合適的干擾物濃度[2]。本研究的干擾物劑量效應(yīng)評價試驗結(jié)果證實了不同濃度肝素鋰對含同樣濃度微量蛋白質(zhì)標本的干擾作用存在明顯差異，表明一定濃度微量蛋白質(zhì)標本隨著肝素鋰濃度的增加，干擾效果明顯增強。另一方面，隨著標本中微量蛋白質(zhì)濃度增加，同濃度的肝素鋰對檢測結(jié)果的干擾效果明顯減少，0.05 mg/mL肝素鋰的干擾效果也只是在一定分析物濃度范圍內(nèi)出現(xiàn)，即當標本中微量蛋白濃度高于1.1～1.2 g/L時，該濃度肝素鋰的干擾效果可能已不明顯。

參考試驗盒尿液微量蛋白質(zhì)參考區(qū)間和臨床病理診斷意義，選擇參考區(qū)間高限接近濃度(0.172 g/L)及病理濃度(0.427 g/L)作為試驗標本濃度，這2種濃度有利于觀察干擾效果，評價干擾導(dǎo)致的誤差屬性?？梢哉J為，本試驗干擾產(chǎn)生的誤差既是比例系統(tǒng)誤差，也是恒定系統(tǒng)誤差。

肝素鋰對比濁法檢測微量蛋白質(zhì)的干擾機制還有待探討。但觀察它的干擾效果及其干擾的有限性，推測其機制可能是：一定濃度(>0.025 mg/mL)的肝素鋰,在一定pH條件下，鋰離子可能與芐索氯銨反應(yīng)，形成懸浮顆粒狀物質(zhì),從而增加液體濁度,隨即引起一定濃度范圍(小于1.0 g/L)的微量蛋白質(zhì)結(jié)果假性升高。當然，這一推論還需進一步研究證實。

本研究表明，肝素鋰是比濁法檢測微量蛋白質(zhì)的外源性干擾物，它對微量蛋白質(zhì)檢測結(jié)果為正干擾，特別對低水平微量蛋白質(zhì)檢測的干擾效果更明顯，且隨著肝素鋰濃度升高，干擾效果越強。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.WST-416-2013 中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準——干擾實驗指南[S].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2013.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP7-A2 Interference testing in clinical chemistry[S]．Wayne,PA,USA:CLSI，2002.

The analysis of heparin lithium interference in turbidimetric method to detect total protein

ZhaoQuanneng1,YangZhenzhen1,WanZhengyu2,LiDuofu1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,NanchongCentralHospital,Nanchong,Sichuan637000，China；

2.LuzhouFirstPeople′sHospital,Luzhou,Sichuan646099，China)

Abstract:ObjectiveTo confirm the interference effect of heparin lithium on turbidimetry method for detecting total protein,and to conduct performance evaluation of it.MethodsEight different concentrations of total protein urine specimen with and without heparin lithium were detected respectively,to confirm the interference of heparin lithium on the experiment.Adding different concentration of heparin lithium solution to the prepared total protein samples with concentration of 0.172 ,0.427 g/L(a series of interference experiment samples,with heparin lithium concentrations of 0.000,0.025,0.030,0.035,0.040,0.045,0.050 mg/L),repeat four times detection,and then conduct the dose-effect experiment of interference.ResultsThe biggest bias of the testing results in the two paired samples was 159.37%,the mini-bias was 11.37%,the difference of the results in two groups was statistical significant(t=17.24 ,P< 0.05).95% confidence interval of the interference effect in the total protein samples with concentration of 0.172 g/L was 0.034～0.062,while in the total protein samples with concentration of 0.427 g/L was 0.043-0.053.When the heparin lithium were 0.025 mg/mL and 0.050 mg/mL respectively,the results of bias of the total protein samples with concentration of 0.172 g/L were 27.33%,58.14% respectively.But in the 0.427 g/L total protein samples,the results of bias were 11.24%、18.74% respectively.Dose effect of interference both showed a linear relationship in the series concentration of the heparin lithium and interference of sample of 0.172 g/L and 0.427 g/L,and the linear equations wereY=1.974X-0.001 03,Y=1.599X-0.000 5 respectively.ConclusionHeparin lithium is the exogenous interfering substance to the detection of total protein in turbidimetry method,it is the positive interference to the determination results of total proteins,especially for the low level of total protein detection,and as heparin lithium concentration increases,the stronger the interference effect.

Key words:interference test;total protein;urine;cerebrospinal fluid;heparin lithium

(收稿日期：2015-10-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.032

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)03-0364-03

作者簡介：趙全能，男，初級檢驗師，主要從事臨床生化研究。△通訊作者，E-mail：42814520@qq.com。