段秀娟+任延軍
摘 要:研究了聚維酮碘、硫酸銅、高效氯氰菊酯三種藥物在一定條件下對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)(70日齡)的毒性效應(yīng)。結(jié)果表明:聚維酮碘的安全濃度為4.062 g/mL;24 h半致死濃度為55.296 mg/L,48 h半致死濃度為34560 mg/L。硫酸銅的安全濃度為0.667 mg/L,24 h半致死濃度為2.812 mg/L,48 h半致死濃度為2.600 mg/L。高效氯氰菊酯的安全濃度為0.079 μg/L,24 h半致死濃度為7.112 μg/L,48 h半致死濃度為2.371 μg/L。
關(guān)鍵詞:漠斑牙鲆; 聚維酮碘;硫酸銅;高效氯氰菊酯;毒性
中圖分類(lèi)號(hào):S917
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
漠斑牙鲆(ParalichthysLethostigma) 屬硬骨魚(yú)綱、鰈形目、鰈亞目、牙鲆亞科、牙鲆屬,又稱“美國(guó)漠斑牙鲆”、“大花鲆”,為暖溫性、廣鹽性種[1],適溫范圍 3~34 ℃,適鹽范圍0~40‰[2],原產(chǎn)于美國(guó)沿海,具有生長(zhǎng)快、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)良的養(yǎng)殖性能[3]。
漠斑牙鲆自1999年引入福建省,現(xiàn)已成為我國(guó)海水魚(yú)工廠化養(yǎng)殖的主要品種之一[4],但在常規(guī)養(yǎng)殖過(guò)程中常出現(xiàn)腹脹病、出血病、缺鰓病等疾病[5],淡化養(yǎng)殖中出現(xiàn)腹水病、爛鰭病、鰓霉病、脂肪肝病等[6],造成慘重?fù)p失。這些細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)等疾病主要是由于管理不善,養(yǎng)殖密度高,水質(zhì)惡化等因素導(dǎo)致,生產(chǎn)上常用的防治方法是用藥物對(duì)魚(yú)體進(jìn)行浸泡或全池潑灑[7],而藥物對(duì)牙鲆一般具有顯著毒性,因此,必須在藥浴過(guò)程中嚴(yán)格控制藥物的使用濃度和時(shí)間,一般幼魚(yú)對(duì)有毒物質(zhì)的敏感性高于成魚(yú)[8]。為增加幼魚(yú)期藥浴的安全性,本試驗(yàn)應(yīng)用聚維酮碘、硫酸銅、高效氯氰菊酯三種藥物對(duì)牙鲆幼魚(yú)[9]開(kāi)展急性毒性試驗(yàn),研究其對(duì)聚維酮碘、硫酸銅、高效氯氰菊酯藥物的敏感性,進(jìn)而為患病牙鲆藥浴治療提供數(shù)據(jù)參考。
1 材料與方法
1.1 材料
本試驗(yàn)于2014年5月-6月在天津海生水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司在育苗一車(chē)間進(jìn)行。
1.1.1 魚(yú)的來(lái)源和暫養(yǎng) 試驗(yàn)所用漠斑牙鲆幼魚(yú)選體長(zhǎng)40~50 mm,體質(zhì)健壯、活力強(qiáng)、無(wú)外傷的正常魚(yú)苗作試驗(yàn)用魚(yú),在水溫為(18±1) ℃,鹽度為22.34‰,24 h連續(xù)充氣,pH為7.6的條件下暫養(yǎng)3 d,餌料是新鮮的鹵蟲(chóng),為防止飼料的影響 ,實(shí)驗(yàn)期間不喂食。
1.1.2 試驗(yàn)藥品 試驗(yàn)藥品共有3種,聚維酮碘,硫酸銅(AR)[10-11]、高效氯氰菊酯均為市售,其成分、含量及其來(lái)源如表1。
1.1.3 試驗(yàn)儀器 試驗(yàn)所用的物品主要有:充氣泵(若干)、塑料盆、溫度計(jì)、比重計(jì)、電子天平、格尺、燒杯、玻璃棒、網(wǎng)袋(200目、150目)、顯微鏡、自然海水、淡水、pH試紙?jiān)噭?、?biāo)簽、手表、量筒(250 mL、100 mL)、膠頭滴管等。
1.1.4 試驗(yàn)用水 試驗(yàn)所用的海水為自然海水。其中自然海水鹽度34‰左右,自然海水經(jīng)沙濾后在進(jìn)水管口用200目網(wǎng)袋過(guò)濾,進(jìn)入池中的海水用0.8 mg/L的菌毒凈曝氣10 min靜置24 h后使用。
1.2 試驗(yàn)方法
急性毒性試驗(yàn)按常規(guī)毒性試驗(yàn)方法[12-13]進(jìn)行。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定正式試驗(yàn)濃度范圍,在此范圍內(nèi)按等比濃度梯度設(shè)定6個(gè)及1個(gè)對(duì)照組(CK)。每個(gè)濃度組均設(shè)2個(gè)平行,每個(gè)容器中放置10尾試驗(yàn)用魚(yú)。
試驗(yàn)開(kāi)始后,48 h內(nèi)連續(xù)觀察,并于24 h、48 h和96 h記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡和存活數(shù),以及中毒癥狀和死亡癥狀。每天更換試驗(yàn)溶液,及時(shí)清理死魚(yú)(以喪失游動(dòng)能力、針刺無(wú)反應(yīng)的作為死亡標(biāo)準(zhǔn))。
試驗(yàn)容器為塑料盆,內(nèi)盛5 L自然海水,水深30 cm。試驗(yàn)藥液配制成母液后,按比例稀釋成所需濃度,試驗(yàn)溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。
1.3 數(shù)據(jù)處理
采用直線內(nèi)插法[14]以濃度的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),死亡率為縱坐標(biāo),作出死亡率與實(shí)驗(yàn)藥品質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)的平面坐標(biāo)圖,并在圖上求出24、48、96 h的半致死濃度(LC50),安全濃度按下式計(jì)算:SC=48 h LC50×0.3/(24 h LC50/48 h LC50)2。
2 試驗(yàn)結(jié)果
2.1 聚維酮碘對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)毒性試驗(yàn)的結(jié)果
由圖1和表3可見(jiàn),聚維酮碘的安全濃度為4.062 mg/L,24 h的半致死濃度為55.296 mg/L,48 h的半致死濃度為:34.560 mg/L。對(duì)照組的正常試驗(yàn)魚(yú)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都靜伏于底層或緩慢游動(dòng),無(wú)任何異?,F(xiàn)象。當(dāng)聚維酮碘的質(zhì)量濃度為141.558 mg/L時(shí),將漠斑牙鲆幼魚(yú)放入藥液中應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈,四處游動(dòng),2 min后可見(jiàn)體形彎曲,呼吸急促,呈現(xiàn)明顯的中毒癥狀,5 min后伏底不動(dòng),呼吸頻率加快,10 min后減慢,15 min后鰓蓋張開(kāi)呼吸停止,心臟停止跳動(dòng),死亡率達(dá)100%。濃度為 34.560 mg/L時(shí),1 h后四處游動(dòng),體形有些彎曲,有明顯的中毒癥狀,20 h后開(kāi)始死亡,24 h死亡率為30%,48 h為50%。當(dāng)質(zhì)量濃度為 21.60 mg/L時(shí),4 h后開(kāi)始四處游動(dòng),然后恢復(fù)安靜狀態(tài),96 h后的死亡率為30 %。
2.2 硫酸銅對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)毒性試驗(yàn)的結(jié)果
由圖2和表3所示,硫酸銅的安全濃度為0667 mg/L。對(duì)照組的正常試驗(yàn)魚(yú)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中同樣都靜伏于底層或緩慢游動(dòng),無(wú)任何異?,F(xiàn)象。當(dāng)硫酸銅的質(zhì)量濃度為4.506 mg/L時(shí),30 min后牙鲆急劇狂游、撞壁,1 h后表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀,身體強(qiáng)烈抽搐、扭曲變形,4 h后開(kāi)始死亡,24 h死亡率達(dá)100%;質(zhì)量濃度為2404 mg/L時(shí),1 h后急劇狂游,11 h后有明顯的中毒癥狀,22 h后開(kāi)始死亡,24 h死亡率為20%,48 h為30%;當(dāng)質(zhì)量濃度為1.756 mg/L時(shí),6 h后也出現(xiàn)狂游、擊壁,然后變得安靜,96 h死亡率為20%。漠斑牙鲆幼魚(yú)死后身體扭曲變形。
2.3 高效氯氰菊酯對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)毒性試驗(yàn)的結(jié)果
由圖3和表3所示,高效氯氰菊酯的安全濃度為0.079 μg/L,24 h的半致死濃度為7.112 μg/L,48 h半致死濃度為2.371 μg/L。對(duì)照組的正常試驗(yàn)魚(yú)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中依然是靜伏于底層或緩慢游動(dòng),無(wú)任何異?,F(xiàn)象。當(dāng)其濃度為 9351 μg·L-1時(shí),7 min幼魚(yú)出現(xiàn)上浮現(xiàn)象,20 min幼魚(yú)出現(xiàn)明顯中毒癥狀(抽搐,撞壁現(xiàn)象,游動(dòng)減慢,運(yùn)動(dòng)失去平衡),1.5 h出現(xiàn)死亡現(xiàn)象;當(dāng)濃度為5400 μg·L-1時(shí),30 min出現(xiàn)抽搐,撞壁現(xiàn)象,游動(dòng)減慢,3 h出現(xiàn)死亡。
3 討論
3.1 漠斑牙鲆幼魚(yú)對(duì)聚維酮碘、硫酸銅和高效氯氰菊酯的敏感程度
根據(jù)現(xiàn)行農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)毒性的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(劇毒,LC50≤0.1 mg/L;高毒,0.1 mg/L
依據(jù)國(guó)家環(huán)保局1986 年制訂的 《生物技術(shù)監(jiān)測(cè)規(guī)范(水環(huán)境部分)》中將化學(xué)物質(zhì)對(duì)魚(yú)類(lèi)的毒性分為 5 級(jí):LC50<1 mg/L 為劇毒;LC50在1~100 mg/L 為高毒;LC50在100~1 000 mg/L 為中等毒性;LC50在 1 000~10 000 mg/L 為低毒;LC50>10 000 mg/L 為微毒或無(wú)毒[16-17]據(jù)此本試驗(yàn)得出的結(jié)論為:高效氯氰菊酯>硫酸銅>聚維酮碘。
3.2 聚維酮碘對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)毒性影響
聚維酮碘又名聚乙烯吡咯烷酮碘、碘絡(luò)酮,它為廣譜消毒劑,對(duì)大部分細(xì)菌、真菌和病毒等均有不同程度的殺滅作用,而且可以調(diào)節(jié)生長(zhǎng)與代謝等作用。它主要用于魚(yú)卵、水生動(dòng)物的體表消毒;同時(shí)對(duì)病毒也有不同程度的殺滅作用。據(jù)報(bào)道聚維酮碘對(duì)海灣扇貝的SC為4.48 mg/L[18],對(duì)皺紋盤(pán)鮑的稚鮑[19]SC為0.136 mg/L,由于試驗(yàn)條件所限本試驗(yàn)測(cè)得聚維酮碘的SC為4.062 mg/L。據(jù)悉當(dāng)聚維酮碘的濃度達(dá)到一定量時(shí),它的殺菌效果與其所釋放出的有效碘濃度呈正相關(guān),一般在較低濃度下,偏酸性環(huán)境下,穩(wěn)定性好,有效碘濃度要高;溫度升高時(shí)殺菌力亦增強(qiáng),在水體中有機(jī)物會(huì)抑制碘的作用;但在較高濃度下聚維酮碘可使魚(yú)體彎曲、四處狂游、呼吸急促,直至鰓蓋張開(kāi)死亡,因此在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)注意使用對(duì)象、有機(jī)物的含量及環(huán)境條件。
3.3 硫酸銅對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)毒性影響
硫酸銅俗稱藍(lán)礬 膽礬或石礬 是一種重金屬鹽類(lèi),常溫下為深藍(lán)色的三斜系結(jié)晶體或藍(lán)色透明結(jié)晶性顆?;蚪Y(jié)晶性粉末,對(duì)病原體有較強(qiáng)的抑制和殺傷作用,同時(shí)對(duì)藻類(lèi)也有很強(qiáng)的殺滅作用[19],而本試驗(yàn)則使用的是藍(lán)色透明結(jié)晶性顆粒。硫酸銅在養(yǎng)殖中,常用于一些寄生蟲(chóng)引起的疾病,特別對(duì)原蟲(chóng)動(dòng)物如小瓜蟲(chóng),刺激隱核蟲(chóng)等有很強(qiáng)的殺傷力。其主要作用機(jī)理是銅離子與病原體體內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合生成蛋白鹽,使蛋白質(zhì)變性、沉淀,使酶失去活性,從而殺死病原體。因此,在防治寄生蟲(chóng)引起的疾病時(shí),能獲得較好的效果[20]。漠斑牙鲆幼魚(yú)對(duì)硫酸銅的耐受性在三種藥物中不是最敏感的,其24 h的LC50為2.912 mg/L,SC為0.667 mg/L,剛剛符合硫酸銅的常用濃度0.500~0.700 mg/L,因此使用時(shí)一定要謹(jǐn)慎,同時(shí)因?yàn)榱蛩徙~的安全濃度范圍較小,據(jù)報(bào)道一般情況 ,濃度應(yīng)控制在0 .7 mg/L,若濃度低于0.5 mg/L,殺蟲(chóng)效果較差 濃度高于1 mg/L,魚(yú)就有中毒死亡的危險(xiǎn)[21]。因此硫酸銅的施用應(yīng)根據(jù)水質(zhì)情況,增減藥量(水中溶解有機(jī)物特別是蛋白質(zhì)及多羥基化合物能與硫酸銅形成復(fù)合物,降低硫酸銅的藥性,因此若水質(zhì)較肥,水溫較低時(shí),可適當(dāng)加大藥量,反之,減少藥量)。
3.4 高效氯氰菊酯對(duì)漠斑牙鲆幼魚(yú)毒性影響
高效氯氰菊酯是一種微乳液形式[22]的白色藥液,可在表面活性的作用下增強(qiáng)其穩(wěn)定性。對(duì)昆蟲(chóng)有很高的胃毒和觸殺作用,具有殺卵活性,殺蟲(chóng)譜廣,對(duì)棉花、蔬菜、果樹(shù)等農(nóng)林害蟲(chóng)以及蚊蠅、蟑螂、跳蚤、臭蟲(chóng)和螞蟻等衛(wèi)生害蟲(chóng)有極高的殺滅效果。本試驗(yàn)中當(dāng)高效氯氰菊酯[23]達(dá)到一定濃度后,漠斑牙鲆幼魚(yú)則出現(xiàn)抽搐、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、麻醉等癥狀,最后死亡。原因如謝文平研究所報(bào)道[24]高效氯氰菊酯通過(guò)鰓的吸附進(jìn)入魚(yú)體內(nèi)后,增加神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)其敏感性,同時(shí)對(duì)離子轉(zhuǎn)運(yùn)、滲透壓平衡、能量代謝、呼吸等造成嚴(yán)重的影響,所以高效氯氰菊酯應(yīng)在水產(chǎn)上特別注意。
參考文獻(xiàn):
[1] 林越赳,黃瑞芳,張雅芝,等.漠斑牙鲆人工育苗技術(shù)探討[J].福建水產(chǎn),2008,6(2):1-4
[2] 丁亞君.漠斑牙鲆人工育苗技術(shù)要點(diǎn)[S].齊魯漁業(yè),2006,23(2):22-25
[3] 楊學(xué)宋,孫瑞曉,等.漠斑牙鲆幼魚(yú)和成魚(yú)對(duì)溫度的適應(yīng)性試驗(yàn)[J].齊魯漁業(yè),2005(9):2-9
[4] 王彥懷,王金亮,李萬(wàn)舉.漠斑牙鲆工廠化養(yǎng)殖技術(shù)研究[J].漁業(yè)現(xiàn)代化,2003(3):11-15
[5] 繳建華.漠斑牙鲆淡化養(yǎng)殖中的疾病及其防治[J].科學(xué)養(yǎng)魚(yú),2005(4):52 - 53
[6] 鄭春靜.漠斑牙鲆親魚(yú)養(yǎng)成中主要病害的防治[J].中國(guó)水產(chǎn),2006(2):83
[7] 李碧全,陳明達(dá),游劍濤,等.不同餌料系列對(duì)漠斑牙鲆苗種培育效果的影響[J].集美大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版 ),2007,12(2):103-107
[8] 王偉,侯林,姚鋒,高巖,等.牙鲆魚(yú)白化病因的研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué),2004,28(6):21-25.
[9] 翟良安,姚愛(ài)琴,李紀(jì)芳,等.八種農(nóng)藥對(duì)魚(yú)種和大型溞毒性致毒研究[J].淡水漁業(yè),1989,18(3):18-20
[10] 白麗蓉,陳 剛,張健東,等.表面活性劑SDS與DBS對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)急性毒性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),Journal of Anhui Agri.Sci.2008,36(21):9087 - 9090
[11] 劉曉倩.硫酸銅在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].江西農(nóng)業(yè)科技 2003(11):10-15
[12] 趙長(zhǎng)太,隋紅霞.硫酸銅防治魚(yú)病注意事項(xiàng)[J].黑龍江水產(chǎn),2008(2):35
[13] 邱郁春.水污染魚(yú)類(lèi)毒性實(shí)驗(yàn)方法[M].北京:中國(guó)環(huán)境出版社,1992:50-65
[14] 鄭繁生,鄭海濤,盧飛麟.幾種常見(jiàn)藥物對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性試驗(yàn)[J].廣西水產(chǎn)科技,2007(3):25-28
[15] 蔡道基.農(nóng)藥環(huán)境毒理學(xué)研究[M].北京:中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社,1999:79-82
[16] 國(guó)家環(huán)境保護(hù)局.生物監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范(水環(huán)境部分) [S].北京:中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社,1986:95
[17] Boyd,C·E·1996·Water quality in ponds for aquaculture [J].A-uburen University,Auburn,alabama,USA·337-343
[18] 姜禮燔.漁藥的安全濃度評(píng)價(jià)方法[M].中國(guó)漁業(yè)經(jīng)濟(jì)研究——漁藥知識(shí)講座.1995:197-198
[19] 呂豪,梁峻,等.聚維酮碘對(duì)海灣扇貝等貝類(lèi)幼蟲(chóng)的毒性試驗(yàn)研究[J].水產(chǎn)科學(xué),2003,22(6):24-28
[20] 高平.高效氯氰菊酯對(duì)卿的安全性評(píng)價(jià)及其相關(guān)研究[D].武漢:華中師范大學(xué).2007
[21] 李蘭,王化江.硫酸銅在水產(chǎn)病害防治中的使用.農(nóng)家致富,2006(22):
[22] 王新偉,路福綏,李培強(qiáng).高效氯氰菊酯微乳液形成規(guī)律研究和形成機(jī)理初探[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2004(2):69-72
[23] 龐世勛,魏泰莉,賴子尼,等.三種菊酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)劍尾魚(yú)、羅非魚(yú)的毒性研究[J].淡水漁業(yè),2004,34(4):15
[24] 王朝暉,尹伊偉.常見(jiàn)擬除蟲(chóng)菊酯(原藥、商品)及助溶劑對(duì)水生生物毒性的比較.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)[J],1997,18(1):98-103
Abstract:the author research the Acute toxicity tests of PVP-I,cupric sulfate and cypermethrin on the ParalichthysLethostigma juveniles(70 d) In this study.The results showed that the safe concentration of the PVP-I to ParalichthysLethostigma juveniles was 4.062 mg/L,the semi-lethal concentrations of 24 h was 55.296 mg/L and 34.560 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration,of cupric sulfate was 0.667 mg/L.the semi-lethal concentrations of 24 h was 2812 mg/L and 2.600 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration of effective cypermethrin was 0.079 mg/L. Semi-lethal concentrations of 24 h was 7.112 μg/L and 2371 μg/L was its semi-lethal concentrations of 48 h.
Key words:ParlichthysLethostigma; PVP-I; cupric sulfate; effective cypermethrin; acute toxic
(收稿日期:2015-03-10)