袁靜萍，袁修學，陳創(chuàng)，高利昆，何惠華，饒潔，閻紅琳*

（1武漢大學人民醫(yī)院病理科，武漢 430060；2武漢科技大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，武漢 430065；3武漢大學人民醫(yī)院乳腺甲狀腺外科，武漢 430060）

TGF-β1在乳腺癌中下調(diào)E-cadherin、上調(diào)N-cadherin和促進侵襲轉(zhuǎn)移

袁靜萍1，袁修學2，陳創(chuàng)3，高利昆1，何惠華1，饒潔1，閻紅琳1*

（1武漢大學人民醫(yī)院病理科，武漢 430060；2武漢科技大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，武漢 430065；3武漢大學人民醫(yī)院乳腺甲狀腺外科，武漢 430060）

目的探討乳腺癌中轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）與上皮性鈣粘蛋白E-cadherin和神經(jīng)性鈣粘蛋白N-cadherin水平的關(guān)系及在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中的臨床意義。方法采用免疫組織化學染色檢測230例乳腺癌組織芯片及相應(yīng)癌旁組織中TGF-β1、E-cadherin和N-cadherin的免疫組織化學表達，與乳腺癌臨床病理資料進行對照分析，并比較三者表達水平的相關(guān)性。將不同濃度的TGF-β1處理乳腺癌細胞檢測E-cadherin和N-cadherin免疫反應(yīng)性，并通過Transwell實驗檢測TGF-β1對乳腺癌細胞侵襲能力的影響。結(jié)果免疫組織化學染色顯示，在乳腺癌組織中，TGF-β1和N-cadherin的陽性率明顯高于癌旁組織，而E-cadherin的陽性率明顯低于癌旁組織。TGF-β1的陽性率隨著組織學分級的升高而升高，且在5年后復(fù)發(fā)的病人中的陽性率顯著高于沒有復(fù)發(fā)的病人；E-cadherin的表達與組織學分級呈負相關(guān)，且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年后復(fù)發(fā)的病人中的陽性率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未復(fù)發(fā)的病人；與E-cadherin相反，N-cadherin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年后復(fù)發(fā)的病人中的陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年未復(fù)發(fā)的病人。E-cadherin表達與N-cadherin和TGF-β1表達水平呈顯著負相關(guān)，而N-cadherin表達與TGF-β1表達具有顯著正相關(guān)性。TGF-β1處理可降低MCF-7乳腺癌細胞和MDA-MB-231乳腺癌細胞中E-cadherin水平及上調(diào)N-cadherin水平，并顯著增加兩種乳腺癌細胞的侵襲和遷移能力。結(jié)論乳腺癌組織中TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin的表達與腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化引起的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，檢測其免疫組織化學表達對臨床指導預(yù)后具有重要意義。

乳腺癌；轉(zhuǎn)化生長因子-β1；上皮性鈣粘蛋白；神經(jīng)性鈣粘蛋白；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

乳腺癌是女性常見腫瘤之一，腫瘤的轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因，探討腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機制已成為腫瘤治療的熱點問題。近年來，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）和腫瘤微環(huán)境在惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用備受關(guān)注。EMT常表現(xiàn)為上皮表型的鈣粘蛋白E-cadherin的丟失及間質(zhì)表型的神經(jīng)性鈣粘蛋白N-cadherin的表達升高，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）可通過下調(diào)E-cadherin參與EMT過程。為了闡明EMT在乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，我們應(yīng)用免疫組織化學方法在230例乳腺癌組織芯片及相應(yīng)癌旁組織中檢測TGF-β1、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表達，分析這些標記物之間的表達相關(guān)性，并通過體外細胞實驗觀察TGF-β1對E-cadherin、N-cadherin的表達與腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化引起的侵襲轉(zhuǎn)移的影響進一步探討三者在乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。

材料與方法

1 標本資料

收集武漢大學人民醫(yī)院、武漢大學中南醫(yī)院、武漢市中心醫(yī)院病理科230例具有詳盡臨床病理資料的乳腺癌樣本制作成組織芯片，同時收集相應(yīng)的癌旁組織作為對照?；颊咝g(shù)前均未行化療、放療及內(nèi)分泌治療。均為女性，年齡自29歲至78歲，平均年齡48.9歲。主要為浸潤性癌（浸潤性導管癌175例，浸潤性小葉癌27例，其他28例）。其他臨床病理資料詳見表1。

2 試劑

兔抗人多克隆抗體TGF-β1、E-cadherin以及鼠抗人單克隆抗體N-cadherin，免疫組織化學SP試劑盒，DAB顯色劑均購自DAKO公司。TGF-β1購自美國R＆D公司。

3 細胞株及細胞培養(yǎng)

人乳腺癌細胞系MCF-7和MDA-MB-231由武漢大學人民醫(yī)院孫圣榮教授提供。乳腺癌細胞系培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞密度達到80%～90%覆蓋瓶底時，通過胰酶消化更換培養(yǎng)基傳代。

4 免疫組織化學染色及結(jié)果判讀

組織連續(xù)切片（4μm），脫蠟至水。3%H2O2室溫孵育，10min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS漂洗5min×3，pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液隔熱高壓抗原修復(fù)20min，自然冷卻20min以上，PBS漂洗5min×3，正常山羊血清封閉非特異性蛋白20min，然后一抗37℃孵育1～2h，PBS漂洗5min×3，生物素標記的二抗37℃孵育30min，PBS漂洗5min×3，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS漂洗5min×3，DAB反應(yīng)顯色，自來水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。陽性對照為已知的陽性切片，將PBS代替一抗的處理組作為陰性對照。TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin在乳腺癌組織中主要定位于細胞膜和（或）細胞質(zhì)內(nèi)，而TGF-β1在細胞核偶見表達。TGF-β1和N-cadherin以細胞出現(xiàn)褐色或棕褐色顆粒為陽性，根據(jù)陽性細胞數(shù)和著色深度計分，每例均隨機觀察計數(shù)5個高倍視野（400×），確定每個視野的陽性率，取平均數(shù)，按下列計分：陽性細胞≤5%為0分，＞5%至25%為1分，＞25%至50%為2分，＞50%至75%為3分，＞75%為4分。陽性細胞表達的著色深度：基本不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩項積分相乘：≥1為陽性，＜1為陰性。E-cadherin以細胞膜和（或）細胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒為陽性，參照Mahler-Araujo等［1］的評分方法判斷結(jié)果：陽性細胞0%～10%為0分；陽性細胞＞10%～25%為1分；陽性細胞＞25%～50%為2分；陽性細胞＞50%～75%為3分；陽性細胞＞75%為4分，0～3分為表達陰性，≥3分為表達陽性。

5 TGF-β1給藥實驗

用滅菌雙蒸水將TGF-β1粉劑配置成50mg／ml的貯存液（-20℃保存）。用PBS配置2mg／ml的BSA溶液，用0.22μm的過濾頭過濾滅菌。將50mg／ml的貯存液用過濾后的BSA稀釋100倍，得到TGF-β1母液（濃度：500ng／ml）。待細胞生長至合適濃度，更換培養(yǎng)基時，將TGF-β1用培養(yǎng)基稀釋至4ng／ml、6ng／ml、8ng／ml、10ng／ml和12ng／ml，給藥48h后進行后續(xù)實驗。

6 Transwell實驗

應(yīng)用24孔Transwell進行侵襲試驗，并在Transwell小室中加入不同濃度的TGF-β1，各實驗組連續(xù)培養(yǎng)48h后，取出Transwell，輕輕擦去上面的細胞，用甲醛固定，HE染色，高倍鏡下計數(shù)穿膜細胞數(shù)，并計算穿膜細胞率（穿膜細胞數(shù)／總細胞數(shù)×100%）。

7 統(tǒng)計學分析

計數(shù)資料應(yīng)用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗比較TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin的表達相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析法，Transwell細胞穿膜計量資料均采用均數(shù)±標準差表示，兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 TGF-β1、E-cadherin和N-cadherin在乳腺癌組織中異常表達

圖1 TGF-β1、E-cadherin及N-cadherin在乳腺癌組織及癌旁組織的免疫組織化學表達比較。A1，癌旁組織TGF-β1染色；A2，乳腺癌組織TGF-β1染色；B1，癌旁組織E-cadherin染色；B2，乳腺癌組織E-cadherin染色；C1，癌旁組織N-cadherin染色；C2，乳腺癌組織N-cadherin染色；比例尺，100μmFig.1 Comparison of the immunohistochemicalexpressions of TGF-β1，E-cadherin and N-cadherin in breast cancer tissue and adjacent tissue.A1，TGF-β1 expression in adjacent tissue；A2，TGF-β1 expression in breast cancer tissue；B1，E-cadherin expression in adjacent tissue；B2，E-cadherin expression in breast cancer tissue；C1，N-cadherin expression in adjacent tissue；C2，N-cadherin expression in breast cancer tissue；scale bar，100μm

TGF-β1主要表達于細胞質(zhì)，部分表達于細胞核，在癌旁組織中呈弱陽性或陰性表達（圖1A1）。其在癌旁組織中陽性率為21.3%（49／230），在乳腺癌組織中陽性率為72.6%（167／230），顯著高于癌旁組織（圖1A2）。E-cadherin主要表達于細胞膜和（或）細胞質(zhì)，其在癌旁組織中表達水平較高（圖1B1），陽性率為99.1%（228／230）；而在乳腺癌組織中E-cadherin表達明顯減少，陽性表達率為29.1%（67／230），有的以胞質(zhì)著色為主，細胞膜表達降低（圖1B2）。N-cadherin主要表達于細胞膜和細胞質(zhì)，在癌旁組織中呈弱陽性或陰性表達（圖1C1），在乳腺癌組織中陽性率為75.7%（174／230）顯著高于癌旁組織中的陽性率17.0%（39／230）（圖1C2）。

2 TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin的表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

對TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin的表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析顯示（表1），TGF-β1在乳腺癌組織中的表達與乳腺癌的組織學分級和5年是否復(fù)發(fā)密切相關(guān)，而與年齡、是否絕經(jīng)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。當組織學分級較高時TGF-β1陽性率也隨之升高，且在5年后復(fù)發(fā)的病人中TGF-β1陽性率顯著高于沒有復(fù)發(fā)的病人，提示TGF-β1是一個不良預(yù)后因子。E-cadherin在乳腺癌組織中的表達與組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5年是否復(fù)發(fā)密切相關(guān)，而與乳腺癌患者的年齡、是否絕經(jīng)、臨床分期無關(guān)：隨著組織學分級的升高，E-cadherin陽性率逐漸降低，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年后復(fù)發(fā)的病人中E-cadherin陽性率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年未復(fù)發(fā)的病人，提示E-cadherin表達的降低或丟失是乳腺癌患者發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移過程中的一個重要事件。N-cadherin在乳腺癌組織中的表達與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、5年是否復(fù)發(fā)密切相關(guān)，而與乳腺癌患者的年齡、是否絕經(jīng)、臨床分期、組織學分級無關(guān)。與E-cadherin相反，N-cadherin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年后復(fù)發(fā)的病人中的陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和5年未復(fù)發(fā)的病人，提示在E-cadherin表達降低或丟失的過程中N-cadherin表達是升高的，在腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中可能存在上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程。

表1 TGF-β1、VEGF蛋白表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Tab.1 Relationship between the expression of TGF-β1 and VEGF and the clinical pathological parameters of breast cancer

3 TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin表達的相關(guān)性分析

對TGF-β1、E-cadherin和N-cadherin在乳腺癌中表達的相關(guān)性進行經(jīng)Spearman秩和相關(guān)分析顯示，E-cadherin與N-cadherin表達呈負相關(guān)，與TGF-β1表達呈負相關(guān)，N-cadherin與TGF-β1表達呈正相關(guān)（表2）。

表2 乳腺癌中TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin表達相關(guān)性Tab.2 Correlation between the expressions of TGF-β1，E-cadherin and N-cadherin in breast cancer

4 TGF-β1在乳腺癌細胞中下調(diào)E-cadherin和上調(diào)N-cadherin

基于TGF-β1和N-cadherin在乳腺癌組織中表達上調(diào)，E-cadherin在乳腺癌組織中表達下調(diào)，且TGF-β1與E-cadherin表達呈負相關(guān)，與N-cadherin表達呈正相關(guān)，我們推測TGF-β1可通過下調(diào)E-cadherin參與EMT過程。為證明這一假設(shè)，繼而檢測了不同濃度的TGF-β1（4ng／ml、6ng／ml、8ng／ml、10ng／ml和12ng／m l）對MCF-7乳腺癌細胞和MDAMB-231乳腺癌細胞中E-cadherin和N-cadherin免疫反應(yīng)性的影響。結(jié)果顯示，10ng／ml或12ng／ml的TGF-β1處理細胞48h后，無論是MCF-7細胞還是MDA-MB-231細胞的突起均呈現(xiàn)不同程度的增多，尤其是MDA-MB-231細胞變得更加細長，呈EMT樣改變（圖2）。此外，隨著TGF-β1濃度的升高（4ng／ml、6ng／ml、8ng／ml、10ng／ml和12ng／ml），兩種乳腺癌細胞中E-cadherin免疫反應(yīng)性均逐漸減弱，特別是當TGF-β1濃度為10ng／ml時，足以使兩種不同乳腺癌細胞系中E-cadherin免疫反應(yīng)性明顯減弱或消失（圖2）。與E-cadherin免疫反應(yīng)性的減弱或消失相反，隨著TGF-β1濃度的升高，N-cadherin免疫反應(yīng)性明顯增強（圖2）。

圖2 TGF-β1（10ng／ml）對乳腺癌細胞形態(tài)和E-cadherin和N-cadherin免疫反應(yīng)性影響的免疫組織化學檢測。比例尺，50μmFig.2 Immunohistochemical detection of the effect of TGF-β1（10ng／ml）on themorphology of breast cancer cells and the immunoreactivitiy of E-cadherin and N-cadherin in the cells；scale bar，50μm.

5 TGF-β1促進乳腺癌細胞侵襲和遷移

為進一步探討TGF-β1誘導的EMT在乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移中的作用，我們應(yīng)用24孔Transwell侵襲小室實驗檢測TGF-β1對乳腺癌細胞侵襲能力的影響。結(jié)果顯示，與不給予TGF-β1處理的對照組相比較，不同濃度的TGF-β1（4ng／ml、6ng／ml、8ng／ml、10ng／ml、12ng／ml）處理MCF-7乳腺癌細胞48h后Transwell穿膜率均顯著提高（圖3A），且當TGF-β1量為12ng／ml時，MCF-7細胞Transwell穿膜率最高。MDA-MB-231乳腺癌細胞也顯示類似結(jié)果（圖3B），當TGF-β1量為10ng／ml時，MDA-MB-231細胞Transwell穿膜率最高。因此，TGF-β1能夠促進乳腺癌細胞侵襲和遷移。

圖3 TGF-β1促進乳腺癌細胞侵襲和遷移。A，MCF-7細胞Transwell穿膜率的統(tǒng)計學分析；B，MDA-MB-231細胞Transwell穿膜率的統(tǒng)計學分析；*，與未用TGF-β1處理的對照組比較，0.01＜P＜0.05Fig.3 TGF-β1 promotes the invasion and migration of breast cancer cells.A，statistical analysis of the percentage of the MCF-7 breast cancer cells penetrating transwell；B，statistical analysis of the percentage of the MDA-MB-231 breast cancer cells penetrating transwell.*，0.01＜P＜0.05，compared with the cells without TGF-β1 treatment.

討 論

乳腺癌是一種具有高度異質(zhì)性的腫瘤，即使是不同患者的相同階段也往往有著不同組織病理學特征、遺傳基因組變異和預(yù)后。雖然近年來乳腺癌患者的死亡率有所下降，但是仍有許多患者經(jīng)初期的內(nèi)分泌或化學藥物治療后發(fā)生了轉(zhuǎn)移，而乳腺癌預(yù)后的好壞與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT是腫瘤發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移的首要步驟：腫瘤細胞獲得分子學改變而導致功能異常，細胞與細胞間的粘連逐漸喪失，細胞骨架發(fā)生重組，所有這些改變將導致細胞失去極向并獲得更加梭形的形態(tài)，在EMT的過程中，上皮細胞逐漸獲得間質(zhì)細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能，這些過程將最終促進腫瘤細胞穿過基底膜及向周圍微環(huán)境浸潤［2，3］。

TGF-β信號已被證實可在體外誘導EMT。TGF-β細胞因子包括三個亞型：TGF-β1，TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β1是TGF-β家族的主要成員。TGF-β1在腫瘤中的作用更像一把雙刃劍，在腫瘤發(fā)生的早期，TGF-β1作為腫瘤抑制因子發(fā)揮作用，而在腫瘤的進展期TGF-β1又通過促進血管新生促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。關(guān)于TGF-β1增加腫瘤的侵襲及浸潤能力的機制仍未有統(tǒng)一的定論。研究顯示，TGF-β1通過Smad依賴的和非Smad依賴的兩種途徑作用于細胞間的連接而誘導EMT［4］。阻滯EMT發(fā)生的主要分子之一是細胞與細胞間的粘附受體，E-cadherin。E-cadherin丟失是EMT發(fā)生的早期事件，同時也是重要的EMT誘發(fā)因素。E-cadherin在許多腫瘤中表達下調(diào)，其過度表達可以抑制腫瘤細胞的入侵，TGF-β誘導的EMT與E-cadherin表達的丟失相關(guān)［5-7］。在本研究中，TGF-β1在乳腺癌組織中的陽性率顯著高于癌旁組織，而E-cadherin在乳腺癌組織中的陽性率顯著低于癌旁組織，這與文獻報道的TGF-β誘導EMT過程中E-cadherin的丟失是一致的。而在體外細胞實驗中，我們同樣發(fā)現(xiàn)應(yīng)用10ng／ml或12ng／ml的TGF-β1處理細胞48h后，無論是MCF-7乳腺癌細胞還是MDA-MB-231乳腺癌細胞均發(fā)生EMT樣改變，且當TGF-β1的濃度≥10ng／ml時，兩種不同乳腺癌細胞系中的E-cadherin的表達消失，進一步提示TGF-β1能夠誘導乳腺癌細胞EMT過程中E-cadherin的丟失。關(guān)于其機制，研究認為TGFβ信號通過Smad介導表達高遷移率蛋白A族2（high mobilitygroup A2，HMGA2）而誘導Snail和Slug的表達，而Snail和Slug是抑制E-cadherin基因重要的鋅指轉(zhuǎn)錄因子［8］。最近的研究也同樣指出TGF-β通過Snail信號通路下調(diào)E-cadherin調(diào)控EMT，而Snail的表達反過來可上調(diào)TGF-β信號通道基因的表達，二者之間存在正向反饋循環(huán)機制［9，10］。也有研究認為TGF-β通過Notchl和其配體Jaggedl的介導促進Slug的表達，從而減少E-cadherin的表達，加速EMT發(fā)生的進程［11］。

N-cadherin與E-cadherin同屬于經(jīng)典鈣粘蛋白，E-cadherin是細胞維持上皮表型的重要黏附分子，當E-cadherin表達下調(diào)時，細胞骨架改變，基底膜降解，繼而細胞連接松散，使腫瘤細胞更易遷移到細胞外基質(zhì)，而與之相反的是N-cadherin在上皮組織中表達上調(diào)，進一步影響上皮細胞的形態(tài)和行為，兩種鈣粘蛋白表達的動態(tài)變化既可以誘導上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化也可以反過來誘導間質(zhì)向上皮轉(zhuǎn)化。本研究中發(fā)現(xiàn)N-cadherin在乳腺癌中陽性率顯著高于癌旁組織，而E-cadherin在乳腺癌組織中的陽性率明顯降低，與TGF-β1表達呈正相關(guān)，提示腫瘤進展過程中TGF-β1不僅誘導了EMT過程中上皮標志物E-cadherin的丟失，使癌細胞間的粘附性減弱，還促進了間質(zhì)型鈣粘蛋白N-cadherin的表達升高使細胞具有間質(zhì)特性，從而脫離原發(fā)灶發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移。體外細胞實驗也顯示TGF-β1可顯著上調(diào)MCF-7乳腺癌細胞和MDA-MB-231乳腺癌細胞中N-cadherin的表達。

那么，TGF-β1誘導的E-cadherin下調(diào)，N-cadherin上調(diào)是否與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)呢？我們的研究顯示TGF-β1、E-cadherin與N-cadherin在乳腺癌組織中的表達均與5年是否復(fù)發(fā)密切相關(guān)，其中E-cadherin與N-cadherin在乳腺癌組織中的表達還與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。而檢測細胞侵襲遷移能力的Transwell實驗顯示TGF-β1顯著增強了MCF-7乳腺癌細胞和MDA-MB-231乳腺癌細胞的遷移能力。綜合組織和細胞實驗，TGF-β1、E-cadherin與N-cadherin三者的表達與預(yù)后密切相關(guān)，N-cadherin是一個高轉(zhuǎn)移性的風險因子，聯(lián)合檢測E-cadherin和N-cadherin有利于指導乳腺癌預(yù)后。

綜上所述，乳腺癌中E-cadherin的表達降低與N-cadherin的表達上調(diào)預(yù)示著乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中存在上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象，TGF-β1對EMT可能存在調(diào)控作用，三者的表達與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，而乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移是一個多基因參與，多因素影響的多步驟復(fù)雜過程，對于TGF-β1、E-cadherin與N-cadherin在侵襲轉(zhuǎn)移中的機制及可能存在的其他與轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號分子還有待進一步發(fā)掘和探討。

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Downregulation of E-cadherin,upregulattion of N-cadherin and promotion of invasion and m igration by TGF-β1 in breast cancer

Yuan Jingping1，Yuan Xiuxue2，Chen Chuang3，Gao Likun1，He Huihua1，Rao Jie1，Yan Honglin1*
（1Department of Pathology，Renmin Hospital ofWuhan University，Wuhan 430060，China；2Medical College ofWuhan University of Science and Technology，Wuhan 430065，China；3Department of Breast and Thyroid Surgery，Renmin Hospital ofWuhan University，Wuhan 430060，China）

ObjectiveTo explore the relationship between the expression of transforming growth factor-β1（TGF-β1）and the levels of E-cadherin and N-cadherin in breast cancer aswell as the clinical significance of these three proteins in the invasion and metastasis of breast cancer.M ethodsThe expression levels of TGF-β1，E-cadherin and N-cadherin were detected by immunohistochemical staining in amicroarray of 230 cases of breast cancer tissue and corresponding adjacent tissue.The results were compared between each other and with the clinical pathological parameters of breast cancer，and the correlations analyzed.Breast cancer cellswere treated with TGF-β1 of different concentrations and the immunoreactivity of N-cadherin and E-cadherin in the cellswas detected.The influence of TGF-β1 on the invasiveness of breast cancer cells was detected by Transwell assay.ResultsImmunohistochemical staining results showed that the positive rates of TGF-β1 and N-cadherin were significantly higher，while that of E-cadherin significantly lower in breast cancer tissue than in adjacent tissue.The positive rate of TGF-β1 increased with higher histological grading and was significantly higher in patients who relapsed after5 years than in patientswithout relapse.The expression of E-cadherin was negatively correlated with histological grading，and its positive rate was significantly lower in patients with than without lymph nodemetastasis and in those who re-lapsed after 5 years than without relapse.In contrast with E-cadherin，the positive rate of N-cadherin was significantly higher in patientswith than without lymph nodemetastasis and in those who relapsed after 5 years than without relapse.The expression of E-cadherin was negatively correlated with that of N-cadherin and TGF-β1，while the expression of N-cadherin was positively correlated with that of TGF-β1.TGF-β1 treatment down-regulated the expression of E-cadherin and up-regulated the expression of N-cadherin in MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells，and significantly increased the invasiveness and metastasis of these two types of breast cancer cells.Conclusion The expression of TGF-β1，E-cadherin and N-cadherin in breast cancer tissue is closely related to the invasion，metastasis and prognosis of breast cancer which are induced by epithelial-mesenchymal transition（EMT）.The immunohistochemical detection of their expression is of great significance in the clinical evaluation of prognosis.

Breast cancer；transforming growth factor-β1；E-cadherin；N-cadherin；epithelial-mesenchymal transition

R737.9

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2016.06.011

2016-07-25

2016-12-12

湖北省教育廳科學研究計劃指導性項目（B2015350）；武漢大學自主科研項目（2042016kf0116）

袁靜萍，女（1974年），漢族，主任醫(yī)師

*通訊作者（To whom correspondence should be addressed）：honglin1229＠163.com