趙紅磊　趙紅艷　于敦洋

摘要：展青霉素作為一種真菌毒素，在腐敗霉?fàn)€的水果中經(jīng)常存在。當(dāng)前展青霉素的檢測方法主要是薄層色譜和液相色譜法，這兩種方法特異性差，假陽性不可避免，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法由于儀器成本高，難以廣泛推廣，特異性高、簡便、靈敏、快速的免疫學(xué)方法是今后需要重點(diǎn)開發(fā)的一個(gè)方向。

關(guān)鍵詞：展青霉素 污染檢測 方法進(jìn)展

展青霉素（Patulin），多聚乙酰內(nèi)酯類化合物，其化學(xué)名稱為4-羥基-4氫-呋喃-[3，2c]-吡喃-2（6）-酮[1]，化學(xué)式C7H6O4，分子量154。

展青霉素在酸性環(huán)境中非常穩(wěn)定，在堿性條件下活性降低。展青霉素最先在霉?fàn)€蘋果和蘋果汁中發(fā)現(xiàn)，并廣泛存在于各種霉變水果中。許多青霉能產(chǎn)生展青霉素，包括展青霉、棒型青霉等共3屬16種，這種毒素具有影響生育、致癌和免疫等毒理作用。同時(shí)，該青素也是一種神經(jīng)毒素，可能使人神經(jīng)麻痹、肺水腫、腎功能衰竭[1]。

1 展青霉素污染現(xiàn)狀

展青霉素主要污染水果及其制品，尤其是蘋果、山楂等[1]。有研究表明，展青霉素的污染不分地域，在國內(nèi)外均有發(fā)現(xiàn)。賀玉梅等[2]對(duì)采自北京市5個(gè)區(qū)縣7個(gè)生產(chǎn)廠家的109個(gè)水果制品進(jìn)行了分析，其中測定的28份果醬中展青霉素自然污染的陽性率為31.3%；宋家玉等[3]對(duì)山東地區(qū)的水果中展青霉素污染情況進(jìn)行了調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)新鮮水果未見污染，霉?fàn)€蘋果污染率40%，蘋果制品污染率70%，陽性樣品平均含量80.6μg/kg，山植制品污染率31.4%，平均含量51.9μg/kg；魯琳等[4]對(duì)廣東省市場銷售的蘋果、山楂制品中展青霉素殘留量的情況進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)展青霉素檢出率7.2%，超標(biāo)率占樣品總數(shù)的1.2%；吳南等[5]、劉勇等[6]也分別對(duì)我國不同省市的水果制品進(jìn)行了考察，陽性檢測率分別為76.9%和73.3%，以上結(jié)果說明我國水果及其制品展青霉素污染情況比較普遍。

鑒于展青霉素潛在的毒性及危害性，我國對(duì)展青霉素的限量也作了規(guī)定，GB 2761-2011《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》規(guī)定以蘋果及山楂為原料制成的產(chǎn)品中（果丹皮除外）展青霉素限量為50μg/kg。

2 檢測方法現(xiàn)狀

2.1 薄層色譜法

薄層色譜法是最早應(yīng)用于展青霉素檢測的方法，具有設(shè)備簡單、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，為展青霉素的廣泛檢測發(fā)揮了重要作用。Silvana等[7]建立了一種快速薄層色譜法檢測蘋果制品中展青霉素的方法，可同時(shí)檢測10個(gè)樣品。方法檢測限分別為20ng/g和12ng/g，平均回收率為78%，適用于展青霉素含量50～150μg/kg的樣品測定。劉勇等[8]利用1.5%碳酸鈉凈化樣品、經(jīng)雙向薄層分離后，利用CS-910薄層掃描儀進(jìn)行紫外反射光掃描定量。方法平均回收率為90%～104%，展青霉素最低檢出量為2ng。

但是薄層色譜法在實(shí)際檢驗(yàn)過程中操作繁瑣，重復(fù)性差，在有酚類物質(zhì)存在的條件下，有可能出現(xiàn)假陽性，需進(jìn)行確證性試驗(yàn)。

2.2液相色譜法

隨著檢驗(yàn)設(shè)備的發(fā)展，高效、快速、準(zhǔn)確的液相色譜儀也越來越多地應(yīng)用于展青霉素的檢測。鄧鳴等[9]采用1%醋酸溶液提取，經(jīng)分子印跡固相萃取柱凈化，以乙腈-水作為流動(dòng)相，C18色譜柱分離，紫外檢測波長為276nm。結(jié)果展青霉素在4.83～96.59ng/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9999，方法檢測限為3μg/kg，回收率在72.9%～86.0%。

高效液相色譜法最主要的就是展青霉素與羥甲基糠醛的分離。方法一般都用大量有機(jī)溶劑提取，以碳酸鈉凈化，但在此條件下展青霉素容易被破壞，回收率降低，而且由于液相色譜法中紫外檢測器的局限性，假陽性的情況不可避免會(huì)發(fā)生。因此液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS/MS）越來越多地被應(yīng)用于展青霉素的檢驗(yàn)和確證試驗(yàn)。

牛華等[10]建立了超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜（UPLC-ESI-MS/MS）聯(lián)用技術(shù)分析果汁中展青霉素的方法。濃縮果汁樣品經(jīng)酶解，乙酸乙酯提取，固相萃?。⊿PE）小柱凈化后，以水和乙腈作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，電噴霧離子源負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測模式質(zhì)譜進(jìn)行分析。展青霉素在1.0～500.0μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定量限為5.0μg/kg；加標(biāo)回收率為80.6%～91.8%。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀能夠確證展青霉素，但是設(shè)備價(jià)格高，難以廣泛推廣。

2.3 免疫學(xué)檢測方法

免疫學(xué)方法以其特異性、高通量、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)，在檢測領(lǐng)域發(fā)展迅速，應(yīng)用前景非常廣闊。目前，展青霉素的主流檢測方法還是色譜法，但是其免疫學(xué)方法也不斷被開發(fā)、完善。1993年Mcelroy等人[11]首次提出了展青霉素的間接酶聯(lián)免疫（ELISA）檢測方法。從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)展青霉素的快速特異性檢測。Wang等人[12]指出免疫技術(shù)抗原制備繁瑣、檢測成本高，而且由于抗原分子小，容易受到基質(zhì)影響，假陽性也難免存在。由于免疫學(xué)技術(shù)的高特異性，很多成品試劑盒也被開發(fā)出來，并被應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室快速檢測。免疫學(xué)技術(shù)作為一種新興技術(shù)，由于其簡便、靈敏、檢測快速等優(yōu)點(diǎn)，仍然有巨大的發(fā)展前景，是未來展青霉素檢測的發(fā)展方向。

3 展望

當(dāng)前，食品安全問題日益受到社會(huì)關(guān)注，食品安全問題時(shí)有發(fā)生，因此，檢驗(yàn)技術(shù)的提高需求日益迫切。當(dāng)前展青霉素的檢測方法主要是薄層色譜和液相色譜法，這兩種方法特異性差，假陽性不可避免，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法由于儀器成本高，難以廣泛推廣，特異性高、簡便、靈敏、快速的免疫學(xué)方法是今后需要重點(diǎn)開發(fā)的一個(gè)方向。

參考文獻(xiàn)

[1] 周玉春等.展青霉素的研究進(jìn)展[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（2）：112-116.

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[4] 魯琳，高燕紅，許秀敏，黃湘東，李暉.2005～2007年廣東省抽檢蘋果、山楂制品中展青霉素殘留量結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18（8）：1591-1604.

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