胡如芳 曾建國 吳雪松 周青 賀瓏 周琴 郭逸榴

（吉安市林業(yè)科學(xué)研究所 江西吉安 341000）

龍血樹組織培養(yǎng)和快速繁殖

胡如芳 曾建國 吳雪松 周青 賀瓏 周琴 郭逸榴

（吉安市林業(yè)科學(xué)研究所 江西吉安 341000）

本文通過科學(xué)的實(shí)驗(yàn)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆治鰜硌芯縿θ~龍血樹組織培養(yǎng)和快速繁殖。

龍血樹；組織培養(yǎng)

龍血樹（拉丁學(xué)名：Dracaena），為百合科、龍血樹屬植物。亞灌木、灌木或喬木。葉長劍形，有短葉柄，葉面常具各種斑點(diǎn)和條紋，葉密生頂枝，約40種，分布于亞洲和非洲的熱帶與亞熱帶地區(qū)。我國有5種，產(chǎn)南部，屬國家二級(jí)瀕危保護(hù)植物。性喜高溫多濕、陽光充足的環(huán)境，但對(duì)光照的適應(yīng)范圍較廣，十分耐蔭。生長溫度為15～30℃，一般安全的越冬溫度要在5℃左右，對(duì)土壤要求不嚴(yán)。龍血樹具有重要的觀賞價(jià)值，株形整齊，莖干挺拔，葉形葉色多姿多彩，中、小盆花可點(diǎn)綴書房、客廳和臥室，為現(xiàn)代室內(nèi)裝飾的優(yōu)良，名貴觀葉植物。

1 材料和方法

1.1 外植體

在取龍血樹的外植體之前，先對(duì)龍血樹的整棵植株進(jìn)行消毒處理，方法是用1g/L的70％甲基托布津可濕性粉劑水溶液進(jìn)行噴灑，每隔3d噴一次，看到植株及盆土淋濕為止，連續(xù)噴灑3次。選取接種材料為優(yōu)良的腋芽或頂芽和莖段作為外植體。

1.2 外植體的消毒

外植體采集前控制水分、淋殺菌劑的預(yù)處理方法可降低材料的污染率，提高誘導(dǎo)的成功率。把取來的外植體在自來水上沖洗干凈后，在加有少量洗潔精的水中浸泡5min，自來水沖洗20min，再用75％的乙醇浸泡30s，隨后用無菌水沖洗3～4次，再放在飽和漂白粉水中消毒10min，無菌水沖洗4～5次；最后在0.1％升汞中消毒4min，用無菌水沖洗5次。在無菌條件下，借助手術(shù)刀，將消過毒的材料（用無菌濾紙吸干水分），切成0.5cm大小備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 M S培養(yǎng)基的配方與配制方法

在 實(shí) 驗(yàn) 過 程 中 ， 大 量 元 素 ：KNO3、NH4NO3、MgSO47H2O、KH2PO4、CaCl22H2O，大量元素按照擴(kuò)大20倍來配制母液。微量元素：MnSO44H2O、ZnSO47H2O、H3BO3、KI、Na2MoO42H2O、CuSO45H2O、CoCl26H2O，微量元素母液擴(kuò)大100倍。鐵鹽：Na2-EDTA、FeSO47H2O；有機(jī)物質(zhì)：肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素（VB1）、鹽酸吡哆醇（VB6），鐵鹽和有機(jī)物質(zhì)也是按照擴(kuò)大100倍來配制母液。

1.3.2 植物生長調(diào)節(jié)劑的配制

6-BA（母液）：濃度為1mg/mL（溶于少量1mol/L鹽酸后以蒸餾水定容）；NAA（母液）：濃度為1mg/mL（先用少量95％乙醇溶解后以蒸餾水定容）。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析討論

2.1 初代培養(yǎng)

把消過毒后的材料接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，外植體培養(yǎng)15d后，外植體邊緣開始萌動(dòng)出現(xiàn)愈傷組織，長勢(shì)快；初代培養(yǎng)30d后愈傷組織為顆粒狀，繼續(xù)培養(yǎng)，顆粒狀的組織最終形成叢生的小芽。將叢生的小芽和嫩綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L的培養(yǎng)基。

2.2 增值、繼代培養(yǎng)基篩選結(jié)果

經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論，培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA對(duì)芽的增殖影響很大，同時(shí)還影響芽的分化、增殖、伸長和生長。隨著濃度升高增殖倍數(shù)也在增加，芽的長度則表現(xiàn)為隨濃度升高而降低。當(dāng)6-BA增加的濃度達(dá)到一定值，如達(dá)到2.5mg/L時(shí)，芽的生長開始表現(xiàn)不正常，部分出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。在接種芽數(shù)一定的情況下，隨著6-BA濃度的增加，增殖芽樹在不斷的增加，增殖的倍數(shù)也在增加，但是平均的芽長在逐漸的減少。

2.3 根誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選結(jié)果

以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別加入NAA 0.5mg/L、IBA 0～1.0mg/L的植物生長調(diào)節(jié)劑，將增殖獲得的叢生芽剪切成約2cm的莖段，接種于6種不同生根培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基各接種20瓶，每瓶接種10株。接種約4周開始生根，30d后統(tǒng)計(jì)芽苗出根情況。以上培養(yǎng)基都添加蔗糖30.0g/L，瓊脂0.8％，活性炭0.1％，pH5.5。

3 結(jié)論

通過用龍血樹的頂芽或腋芽、莖段作外植體，建立了龍血樹的組織培養(yǎng)和再生體系。結(jié)果表明：龍血樹腋芽、頂芽或莖段誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)95％。選擇MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養(yǎng)基有利于壯芽；選擇MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養(yǎng)基有利于芽增殖繼代；培養(yǎng)45d左右，每個(gè)外植體分化形成的再生小植株數(shù)達(dá)8～20個(gè)；在1/2MS+IBA 0.4mg/L+NAA 0.2mg/L+活性炭0.1％的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根效果最好。

[1]靳靜晨，卜 媚，羅雪楓，陳雄進(jìn)，譚家壯.A tissue culture technique for rapid propagation of Dracaenacambodiana Pierre ex Gagnep.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，41（8）：755～757.

[2]何旭君，劉善輝，馮遠(yuǎn)來，林曉萍，張華通.海南龍血樹組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究.廣東林業(yè)科技，2006，22（1）：22～25.

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2016-11-13