黃海玲 陳苑雯 廖選 張雅麗 曹鳳 劉暉 劉宏偉

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院整形外科，廣東 廣州 510630)

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·護(hù)理創(chuàng)新·

細(xì)胞輔助脂肪移植術(shù)中顆粒脂肪無(wú)菌低溫保存技術(shù)的應(yīng)用及護(hù)理

黃海玲 陳苑雯 廖選 張雅麗 曹鳳 劉暉 劉宏偉

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院整形外科，廣東 廣州 510630)

脂肪移植； 脂肪源性干細(xì)胞； 抽脂術(shù)； 護(hù)理

Adipose transplantation; Adipose-derived stem cells; Liposuctio； Nursing

細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)(Cell-assisted lipotransfer)是將自體脂肪源性干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)與脂肪細(xì)胞混合，聯(lián)合注射移植[1-2]。該技術(shù)涉及到細(xì)胞的分離、提取、運(yùn)輸和保存等一系列操作程序，不同于普通脂肪移植獲取脂肪后馬上進(jìn)行移植注射。如何在這期間保護(hù)顆粒脂肪活力就顯得非常重要。因此，在臨床操作中，從脂肪顆粒的獲取、分離、運(yùn)輸?shù)揭浦财陂g，需對(duì)脂肪進(jìn)行無(wú)菌低溫保存，以保持脂肪細(xì)胞良好的活性，提高組織成活率，并嚴(yán)防細(xì)菌污染的發(fā)生。我院于2011年6月—2015年5月應(yīng)用自體細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)對(duì)進(jìn)行隆乳、面部年輕化治療加面部脂肪充填的患者，采取了一系列的操作方法[3]，取得了良好的臨床效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取我院于2011年6月—2015年5月行自體細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)的患者112例，其中隆乳89例，面部年輕化治療加面部脂肪充填23例；患者均為女性；年齡22～51歲，平均年齡36.75歲。所有患者抽脂術(shù)和脂肪注射移植術(shù)兩次手術(shù)均于24 h內(nèi)完成，顆粒脂肪于4 ℃恒溫冰箱內(nèi)保存6～21 h，平均保存15.8 h。注射移植時(shí)脂肪低溫保存時(shí)間60～145 min，平均低溫保存時(shí)間78 min。

1.2 方法 患者先行抽脂術(shù)獲取脂肪。其中111例患者采用局部腫脹麻醉，1例采用硬膜外麻醉；局部腫脹麻醉后，應(yīng)用自制的獲取可移植脂肪顆粒裝置[4]，抽吸腹部、髂腰部和大腿脂肪；根據(jù)移植需要量獲取相應(yīng)的脂肪量。抽吸出來(lái)的脂肪分成兩部分，一部分作為脂肪支架用于移植充填，脂肪支架放置于儲(chǔ)存桶內(nèi)存放于醫(yī)用4℃恒溫冰箱內(nèi)保存。另一部分脂肪放置于移送桶送細(xì)胞處理室富集提取ADSCs。當(dāng)天下午或次日行注射移植術(shù)，術(shù)前脂肪支架與ADSCs混合，用注射器裝管后放置于存放器內(nèi)低溫保存。

1.3 結(jié)果 隨機(jī)抽查15例患者，抽脂時(shí)，脂肪回收瓶壁冰水溫度為1.3～10.3 ℃，平均溫度為(5.8±2.4)℃；脂肪回收瓶壁脂肪抽出物部位溫度7.6～12.8 ℃，平均溫度為(9.3±3.6)℃。儲(chǔ)存桶打包放冰箱前，桶內(nèi)活動(dòng)板下溫度為11.6～16 ℃，平均溫度為(12.8±1.4)℃；注射器脂肪處管壁為15.4～17.5℃，平均溫度為(16.2±1.1)℃。脂肪注射時(shí)，開蓋時(shí)桶內(nèi)溫度為3.7～4.8 ℃，平均溫度為(4.1±0.3)℃；方盒里防水單上溫度為1.6～8.9℃，平均溫度為(5.3±1.8)℃；注射器脂肪處管壁溫度為8.5～15.8 ℃，平均溫度為(10.2±2.5)℃。同時(shí)對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，即抽脂時(shí)保留脂肪、送分離提取脂肪源性干細(xì)胞脂肪、脂肪干懸液和保留脂肪顆粒，行ADSCs活性檢測(cè)和細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果所有檢測(cè)標(biāo)本顯示ADSCs生長(zhǎng)良好，細(xì)菌培養(yǎng)均為陰性。術(shù)后隨訪全部患者未發(fā)現(xiàn)移植區(qū)感染，患者滿意度較高。

2 無(wú)菌低溫保存技術(shù)及護(hù)理

2.1 特殊用物 1L容量脂肪回收瓶3個(gè)(上海吸引器廠)，CV-20型STNC單向閥1個(gè)(廣州空氣壓縮機(jī)廠生產(chǎn))，抽脂機(jī)和抽脂器械一套(上海眾知天工醫(yī)療器械有限公司)，14 cm×16 cm不銹鋼盅1個(gè)，20 cm×33 cm不銹鋼儲(chǔ)存桶1～2個(gè)(自制)，18 cm×28 cm不銹鋼移送桶1～3個(gè)(自制)，29 cm×44 cm不銹鋼存放器1個(gè)(自制)，3.5 mm×35 cm平頭長(zhǎng)針頭1支(自制)，海爾恒溫冰箱一臺(tái)，紅外線溫度計(jì)1個(gè)(CEM DT-810,-30～260 ℃)，小冰箱一個(gè)(或40 cm×35 cm泡沫箱一個(gè))，500 mL無(wú)菌鹽水冰塊3塊，100 mL無(wú)菌鹽水冰塊12～14塊，冰沙適量。

2.2 抽脂獲取脂肪過程中的無(wú)菌低溫保存技術(shù)及護(hù)理 為了獲取顆粒均勻、適合移植的脂肪細(xì)胞，需要使用小管徑抽脂針(管徑2.5～3.5 mm)、(30±5)kPa的低壓力進(jìn)行抽脂術(shù)獲取脂肪，這使得抽脂手術(shù)所需時(shí)間比較長(zhǎng)，因此，獲取脂肪過程中脂肪顆粒要置于低溫環(huán)境。脂肪抽吸過程中，用不銹鋼盅內(nèi)裝500 mL無(wú)菌鹽水冰塊1塊加4 ℃無(wú)菌冰鹽水700 mL，脂肪回收瓶放入其中，使瓶?jī)?nèi)所收集脂肪處于低溫環(huán)境，以保持脂肪獲取過程中能保持脂肪細(xì)胞良好活性。

2.3 等待分離提取脂肪源性干細(xì)胞過程中的無(wú)菌低溫保存技術(shù)及護(hù)理[5]

2.3.1 密閉無(wú)菌保存可移植脂肪顆粒儲(chǔ)存桶的制作 選用不銹鋼材料，制成直徑20 cm、高33 cm圓柱形桶；桶內(nèi)高15 cm處設(shè)一圈0.4 cm支撐突出；一塊直徑19.5 cm圓形平面不銹鋼薄板，平面設(shè)12個(gè)直徑為3.2 cm的圓形掏空；使用時(shí)把有12個(gè)掏空的不銹鋼圓形活動(dòng)板放置于儲(chǔ)存桶內(nèi)支承突出處，此板可活動(dòng)拿出；桶口設(shè)四個(gè)活動(dòng)密封扣；蓋子內(nèi)貼密封膠板。蓋上蓋子，扣上4個(gè)密封扣后，桶內(nèi)處于密封狀態(tài)。

2.3.2 具體操作方法及護(hù)理配合 (1)脂肪裝管。用50 mL注射器連接內(nèi)徑3.5 mm×35 cm平頭長(zhǎng)針頭，從脂肪回收瓶蓋吸入口抽吸脂肪，即操作過程中脂肪顆粒始終處于密閉中，盡可能不暴露在空氣中，根據(jù)移植需要量抽取相應(yīng)脂肪量。抽好脂肪后注射器針頭端連接塞子。(2)儲(chǔ)存桶內(nèi)放置冰塊。打開已滅菌好的儲(chǔ)存桶蓋子，把2袋100 mL的無(wú)菌鹽水冰塊放進(jìn)已滅菌好的儲(chǔ)存桶內(nèi)，再把有12個(gè)掏空的不銹鋼活動(dòng)板放置于儲(chǔ)存桶內(nèi)支承突出處。裝好脂肪的注射器塞子端朝下放進(jìn)桶內(nèi)圓形掏空處，讓注射器呈垂直狀。桶內(nèi)放冰塊的目的是為了在收集脂肪的過程中，桶內(nèi)脂肪處于低溫環(huán)境。(3)脂肪需要量收集完畢后，把桶內(nèi)融化那部分冰水去掉，蓋上蓋子，扣緊密封扣。密封蓋子一旦蓋上，直到取用脂肪時(shí)方能開蓋，避免中途開蓋導(dǎo)致污染。紅外線溫度計(jì)檢測(cè)儲(chǔ)存桶打包放冰箱前桶內(nèi)活動(dòng)板下溫度和注射器脂肪處管壁溫度。(4)脂肪放進(jìn)儲(chǔ)存桶后盡可能在1 h內(nèi)進(jìn)4 ℃恒溫冰箱。用無(wú)菌包布將儲(chǔ)存桶無(wú)菌打包，再交給巡回護(hù)士。巡回護(hù)士在儲(chǔ)存桶外面貼好標(biāo)簽，然后放進(jìn)專門存放無(wú)菌脂肪的醫(yī)用4 ℃恒溫冰箱內(nèi)保存。標(biāo)簽必須準(zhǔn)確，以防不同患者的顆粒脂肪混淆不清，發(fā)生移植錯(cuò)誤。

2.4 移送脂肪過程中的無(wú)菌低溫保存技術(shù)及護(hù)理 如果細(xì)胞處理室是和手術(shù)室分隔兩處，脂肪移送至細(xì)胞處理室的運(yùn)輸過程中也要進(jìn)行低溫保存。

2.4.1 密閉移送桶的制作 選用不銹鋼材料，制成直徑18 cm、高28 cm圓柱形桶；桶口設(shè)4個(gè)活動(dòng)密封扣；蓋子內(nèi)貼密封膠板。蓋上蓋子，扣上4個(gè)密封扣后，桶內(nèi)處于密封狀態(tài)。

2.4.2 具體操作方法及護(hù)理配合 (1)把脂肪回收瓶的吸入口和引出口用短無(wú)菌管封口。(2)把脂肪回收瓶放進(jìn)已滅菌的移送桶內(nèi)，蓋上蓋子，扣緊密封扣。(3)把移送桶無(wú)菌打包，放進(jìn)小冰箱內(nèi)進(jìn)行運(yùn)送。沒有小冰箱可用內(nèi)裝冰沙的泡沫箱代替。

2.5 注射時(shí)可移植脂肪顆粒的無(wú)菌低溫技術(shù)及護(hù)理[6]

2.5.1 脂肪存放器的制作 選用不銹鋼材料，制成一個(gè)長(zhǎng)方形大方盒，由盒體和蓋子組成。盒體由兩個(gè)獨(dú)立的內(nèi)、外盒組成，內(nèi)盒小外盒大，內(nèi)盒為42 cm×28 cm×7.5 cm，外盒為44 cm×29 cm×8 cm，內(nèi)外盒間有1 cm的空隙；蓋子也由內(nèi)外兩層組成，內(nèi)層為42 cm×28 cm、外層為44 cm×29 cm，內(nèi)外層間隔是1 cm的焊接死隙。蓋上蓋子后，盒內(nèi)形成相對(duì)封閉空間。

2.5.2 具體操作方法及護(hù)理配合 (1)巡回護(hù)士從4 ℃醫(yī)用冰箱內(nèi)取出儲(chǔ)存桶，核對(duì)標(biāo)簽無(wú)誤后打開無(wú)菌包布，帶無(wú)菌手套后打開密封蓋子，再由手術(shù)臺(tái)上人員從罐內(nèi)拿出裝有脂肪顆粒的注射器放置于手術(shù)臺(tái)上。紅外線溫度計(jì)檢測(cè)開蓋時(shí)桶內(nèi)溫度。(2)把已滅菌的內(nèi)盒放進(jìn)外盒，然后把10塊100 mL無(wú)菌冰塊放進(jìn)盒內(nèi)，冰塊上面鋪上一次性使用治療巾。(3)脂肪源性干細(xì)胞混懸液和脂肪支架混合后，用20 mL螺紋注射器裝管后放置于冰塊盒內(nèi)治療巾上，蓋上蓋子。(4)注射時(shí)打開蓋子拿出注射器，再分裝到5 mL螺紋注射器進(jìn)行注射。紅外線溫度計(jì)檢測(cè)方盒里防水單上溫度和注射器脂肪處管壁溫度。

3 討論

脂肪組織作為充填材料應(yīng)用于臨床已有100多年歷史，特別是自體細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)的問世[1]，不僅提高了脂肪成活率，而且使大容量脂肪移植(200～300 mL)可以一次取得成功，使得自體脂肪移植受到越來(lái)越多的醫(yī)生和患者的青瞇。由于技術(shù)要求增加了抽取脂肪的量和時(shí)間，這無(wú)疑增加了顆粒脂肪體外停留的時(shí)間。如何讓顆粒脂肪在體外能夠得到很好的保存而不喪失其絕大部分活力。

成為移植成功的關(guān)鍵，筆者的研究結(jié)果提示，4 ℃低溫保存對(duì)脂肪組織有重要意義，24 h內(nèi)可以很好的保護(hù)其活性，脂肪組織離體后若無(wú)法在1 h內(nèi)使用，應(yīng)放入4 ℃冰箱中無(wú)菌低溫保存,與文獻(xiàn)[7-8]報(bào)道相似。因此，我們?cè)谂R床操作中，為能獲得無(wú)菌和較好細(xì)胞活性的脂肪組織，抽脂時(shí)，脂肪回收瓶應(yīng)置于無(wú)菌手術(shù)操作臺(tái)，并將其置于無(wú)菌冰塊鹽水混合液中；在等待對(duì)脂肪和液體部分進(jìn)行分離提取脂肪源性干細(xì)胞期間，用于移植的脂肪顆粒放置于自制的密封儲(chǔ)存桶內(nèi)，存放于專用存放無(wú)菌顆粒脂肪的醫(yī)用冰箱，4 ℃無(wú)菌低溫保存；運(yùn)輸過程中脂肪顆粒放置于自制移送桶內(nèi)，要用小冰箱或內(nèi)裝冰沙的泡沫箱運(yùn)送達(dá)細(xì)胞處理室；注射移植時(shí)，已準(zhǔn)備好的脂肪應(yīng)存放在自制的、內(nèi)裝冰塊的存放器盒內(nèi)低溫保存。采取上述無(wú)菌低溫保存方法目的是為了保持脂肪細(xì)胞良好活性，提高移植組織成活率和預(yù)防細(xì)菌污染的發(fā)生。

本研究使用的儲(chǔ)存桶、移送桶和存放器選用不銹鋼材料，因?yàn)椴讳P鋼的傳溫效果好,便于清洗滅菌。儲(chǔ)存桶內(nèi)的可活動(dòng)掏空?qǐng)A板，既可讓注射器保持垂直狀態(tài)利于脂肪靜置，又方便清洗消毒；儲(chǔ)存桶和移送桶的蓋子內(nèi)裝密封膠板及4個(gè)密封扣設(shè)計(jì)，加強(qiáng)了桶內(nèi)的密閉性，避免與空氣接觸而導(dǎo)致污染。存放器盒體和蓋子的雙層設(shè)計(jì)，是為了減少室溫環(huán)境下的熱傳導(dǎo)，讓盒內(nèi)可以維持較長(zhǎng)時(shí)間的低溫環(huán)境。我們用紅外線溫度計(jì)對(duì)低溫保存操作方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示低溫效果比較理想。這一系列操作具有簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、易于操作使用的特點(diǎn)，解決了細(xì)胞產(chǎn)品和支架材料的短期低溫保存問題，滿足了自體細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)的順利完成，值得在實(shí)踐中推廣應(yīng)用。

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國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：81272100)；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金立項(xiàng)課題(編號(hào)：A2014391)；暨南大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院護(hù)理科研專項(xiàng)基金立項(xiàng)項(xiàng)目(編號(hào)：2013406)

黃海玲(1974-)，女，廣東羅定，本科，副主任護(hù)師，從事臨床護(hù)理工作

劉宏偉，E-mail：liuhongwei0521@hotmail.com

R472

B

10.16821/j.cnki.hsjx.2016.23.028

2016-05-12)

國(guó)家專利：國(guó)家實(shí)用新型專利(編號(hào)：ZL 201320451668.9)；國(guó)家實(shí)用新型專利(編號(hào)：ZL 201320452277.9)