楊　銳,郭玉榮,魏曉紅,孔玉潔,朱麗林

(1.張掖市甘州區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,甘肅張掖 734000;2.張掖市民樂(lè)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,甘肅張掖734500)

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·論著·

86株庫(kù)克菌的鑒定與抗菌藥物敏感性試驗(yàn)

楊銳1,郭玉榮2,魏曉紅1,孔玉潔1,朱麗林2

(1.張掖市甘州區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,甘肅張掖 734000;2.張掖市民樂(lè)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,甘肅張掖734500)

摘要:目的對(duì)醫(yī)療環(huán)境中分離的庫(kù)克菌進(jìn)行鑒定與抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，為臨床經(jīng)驗(yàn)治療庫(kù)克菌感染提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。方法收集在醫(yī)院感染衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)中，采集醫(yī)務(wù)人員手、皮膚黏膜、空氣、物體表面等樣本中離的 86 株庫(kù)克菌，應(yīng)用ATB Expression半自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析儀配套ID32Staph鑒定試條和Staph 5藥敏試條，進(jìn)行菌株鑒定和藥敏試驗(yàn)。結(jié)果86株庫(kù)克菌鑒定檢出玫瑰庫(kù)克菌62株、變異庫(kù)克菌16株、克庫(kù)克菌8株。庫(kù)克菌對(duì)諾氟沙星(16.3%)和呋喃妥因(20.9%)敏感率較低，對(duì)紅霉素(69.3%)和慶大霉素(67.4%)敏感率接近70.0%，對(duì)青霉素等其他12種抗菌藥物敏感度在80.0%以上，甚至為100.0%。結(jié)論庫(kù)克菌對(duì)大多數(shù)敏感，臨床醫(yī)生和微生物檢驗(yàn)人員應(yīng)加強(qiáng)庫(kù)克菌臨床感染認(rèn)識(shí)和診治水平，合理使用抗菌藥物。

關(guān)鍵詞:庫(kù)克氏菌;鑒定;藥物敏感試驗(yàn)

庫(kù)克菌是需氧生長(zhǎng)的革蘭陽(yáng)性球菌，廣泛分布于自然界空氣、水、土壤中，一般被認(rèn)為是無(wú)害的腐生菌，寄生或污染人體皮膚、黏膜，也可累積口咽部，是重要的機(jī)會(huì)致病菌。近年來(lái)庫(kù)克氏菌引發(fā)的臨床感染數(shù)量和類(lèi)型不斷增加，可引起呼吸道感染、泌尿、生殖系感染、皮膚軟組織感染、消化道感染、血流感染等人體所有組織系統(tǒng)感染，須引起臨床醫(yī)生和微生物檢驗(yàn)人員的高度重視。研究者對(duì)常規(guī)醫(yī)院感染衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)中分離的86 株庫(kù)克氏菌進(jìn)行菌株鑒定與抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1菌株來(lái)源2013年1月至2014年6月醫(yī)院感染衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)中采集醫(yī)務(wù)人員手、皮膚黏膜、空氣、物體表面等樣本中分離的86株庫(kù)克氏菌。

1.2儀器與試劑法國(guó)梅里埃ATB Expression半自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀。ID32 Staph鑒定試條和配套試劑、ATB Staph 5藥敏試條、顯色觸酶試劑、血漿凝固酶試劑由法國(guó)生物梅里埃公司提供。試驗(yàn)用革蘭染色液、葡萄糖(OF)、乳糖、甘露糖、氧化酶、7.5%NaCl、硝酸鹽還原、明膠水解、枸櫞酸鹽、七葉苷、甘油等生化反應(yīng)管購(gòu)自杭州天和微生物公司。哥倫比亞血瓊脂平板，營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司。

1.3菌株鑒定和藥敏試驗(yàn)細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)》執(zhí)行。庫(kù)克氏菌的屬間鑒定從菌落形態(tài)、性狀、色素、生長(zhǎng)速度等做初步判定，再依據(jù)鏡下形態(tài)、排列方式、有無(wú)鞭毛、有無(wú)莢膜等特性，根據(jù)觸酶、氧化發(fā)酵試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)(改良法)、桿菌肽、紅霉素和呋喃唑酮敏感性試驗(yàn)等試驗(yàn)生化反應(yīng)做出鑒定[1]，聯(lián)合應(yīng)用ATB Expression半自動(dòng)微生物儀鑒定到種，儀器提示的種間鑒別補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)用生化反應(yīng)管完成。采用法國(guó)梅里埃ATB Staph 5藥敏試條，用ATB比濁儀調(diào)節(jié)麥?zhǔn)蠁挝痪鷳乙?，用ATB電子加樣槍精確的在每個(gè)實(shí)驗(yàn)杯中加入135 μL菌懸液，完成86株庫(kù)克氏菌對(duì)16種抗菌藥物敏感試驗(yàn)。依照廠商說(shuō)明書(shū)推薦的方法認(rèn)真操作。

1.4質(zhì)量控制細(xì)菌鑒定藥敏儀由專(zhuān)人負(fù)責(zé)保養(yǎng)、維護(hù)、校準(zhǔn)，保證儀器設(shè)備的正常運(yùn)行。質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌(ATCC29213)，對(duì)照菌株藤黃微球菌(CMCC28001)購(gòu)自杭州天和微生物公司。

2結(jié)果

2.1鑒定結(jié)果86株庫(kù)克氏菌鑒定檢出玫瑰庫(kù)克菌62株、變異庫(kù)克菌16株、克氏庫(kù)克菌8株。

2.2藥敏結(jié)果86株庫(kù)克氏菌除對(duì)諾氟沙星(16.3%)和呋喃妥因(20.9%)敏感率較低，對(duì)紅霉素(69.3%)和慶大霉素(67.4%)敏感率接近70.0%，對(duì)青霉素等其他12種抗菌藥物敏感性在80.0%以上，甚至100.0%。見(jiàn)表1。

3討論

人類(lèi)與外環(huán)境的接觸是持續(xù)的、密切的，環(huán)境中存在著很多對(duì)人致病的微生物，尤其是在醫(yī)院這個(gè)特殊的環(huán)境中，病原體種類(lèi)繁多、來(lái)源廣泛，很多細(xì)菌呈高度耐藥性，患者又往往存在著一些易感因素。因此，病原體很容易侵入機(jī)體引起感染[2]。

庫(kù)克菌以前被稱(chēng)作四聯(lián)球菌、乳葡萄球菌及微球菌等。在醫(yī)院環(huán)境分布廣泛，是人體的皮膚及呼吸道黏膜表面的正常菌群。2010年有研究報(bào)道[3]，1株玫瑰色庫(kù)克菌引發(fā)青壯年手拇指及魚(yú)際間隙感染，該菌有溶血毒素，初代培養(yǎng)菌落周?chē)霈F(xiàn)透明溶血環(huán)，對(duì)青霉素、氨芐青霉素、紅霉素、克林霉素、慶大霉素、左氧氟沙星、利福平、呋喃妥因、四環(huán)素、米諾環(huán)素、復(fù)方磺胺甲噁唑、萬(wàn)古霉素等多種抗菌藥物敏感。檢索中國(guó)知網(wǎng)，萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)，并復(fù)習(xí)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)庫(kù)克氏菌可引起呼吸道感染、泌尿生殖系感染、皮膚軟組織感染、消化道感染、血流感染等人體所有組織系統(tǒng)感染，其中血流感染報(bào)道居多。早在1985年李云珠等[4]就報(bào)道上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院兒內(nèi)科新生兒機(jī)會(huì)菌感染性敗血癥38例，其中檢出四聯(lián)球菌12株；2000年張華彬等[5]報(bào)道燒傷四聯(lián)球菌敗血癥33 例報(bào)告；2006年魏升云[6]報(bào)道新生兒玫瑰色微球菌感染8例，其中6例確診為新生兒敗血癥。以往臨床微生物試驗(yàn)室認(rèn)為庫(kù)克菌(四聯(lián)球菌或微球菌)，是自然環(huán)境及人體的非致病菌，血培養(yǎng)和傷口中分離的四聯(lián)球菌常以“污染”菌對(duì)待,在臨床上未引起重視。近年來(lái)庫(kù)克氏菌除臨床感染數(shù)量和類(lèi)型不斷增加外，對(duì)常用抗菌藥物均有不同程度耐藥，更有多重耐藥現(xiàn)象[7],已是臨床重要的機(jī)會(huì)致病菌，臨床醫(yī)生和微生物檢驗(yàn)人員要高度重視，循證、合理使用抗菌藥物,以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。目前，國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有針對(duì)庫(kù)克氏菌的藥敏方法和標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)也沒(méi)有報(bào)道過(guò)有關(guān)庫(kù)克氏菌對(duì)抗菌藥物敏感性方面的內(nèi)容。國(guó)內(nèi)外自動(dòng)化細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)一般提供革蘭陽(yáng)性球菌藥敏和革蘭陰性桿菌藥敏兩種試驗(yàn)板條，研究者考慮庫(kù)克氏菌與葡萄球菌同屬于微球菌科，生物學(xué)特性很相近，所以嘗試應(yīng)用法國(guó)梅里埃ATB Expression半自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀配套ATB Staph 5藥敏試條，對(duì)庫(kù)克氏菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果判斷準(zhǔn)確，重復(fù)性好。顯示庫(kù)克氏菌對(duì)大多數(shù)抗菌藥物敏感，除對(duì)諾氟沙星(16.3%)和呋喃妥因(20.9%)敏感率低，對(duì)紅霉素(69.3%)和慶大霉素(67.4%)敏感率在接近70.0%，對(duì)青霉素等其他12種抗菌藥物敏感性在80.0%以上，甚至100.0%。為臨床經(jīng)驗(yàn)治療庫(kù)克氏菌感染提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

多年以來(lái)，庫(kù)克氏菌(微球菌)一直被認(rèn)為是機(jī)會(huì)致病菌，當(dāng)機(jī)體患某些疾病(糖尿病、肝硬化、腫瘤等)導(dǎo)致防御機(jī)能減退時(shí)，或有侵入性的診療措施(透析、穿刺、放置導(dǎo)管等)，以及新生兒、嬰幼兒、老年人等低免疫人群才可能發(fā)生感染。2013年李世榮等[8]報(bào)道1例玫瑰色庫(kù)克菌導(dǎo)致正常免疫力成人發(fā)生敗血癥。因此，加強(qiáng)醫(yī)院臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室學(xué)科的建設(shè)，積極開(kāi)展病原學(xué)檢驗(yàn)，深入研究和監(jiān)測(cè)庫(kù)克氏菌感染特征，對(duì)抗菌藥物的敏感性特點(diǎn),協(xié)助臨床根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果合理使用抗菌藥物,從而有效地預(yù)防、控制和治療庫(kù)克氏菌感染,提高診療效果。

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86 strains of Kocuria bacteria identification and antimicrobial susceptibility test

YangRui1,GuoYurong2,WeiXiaohong1,KongYujie1,ZhuLilin2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory，ZhangyeMunicipalGanzhouDistrictPeople′sHospitalofGansu，Zhangye,Gansu734000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ZhangyeMunicipalMinleCountyPeople′sHospitalofGansu，Zhangye,Gansu734500,China)

Abstract:ObjectiveTo provide clinical experience in treatment of cook′s fungus infection of evidence-based medical evidence,separation of medical environment of cook′s bacteria identification and antimicrobial susceptibility test.MethodsCollected in the hospital infection of hygiene monitoring,collection and medical staff hands,skin and mucous membrane,air and object surface samples from 86 strains of cook,application ATB Expression semi-automatic bacteria identification of susceptibility analyzer supporting article try ID32 Staph identification and drug susceptibility test Staph 5,strain identification and drug sensitive test.Results86 strains bacteria identification cook 62 strains bacteria,mutation detection rose cook bacteria strains of 16,cook eight strains of bacteria.Cook bacterium of norfloxacin(16.3%),and with nitrofurantoin low because of the sensitive rate(20.9%),of erythromycin(69.3%) and gentamycin(67.4%),the sensitive rate at nearly 70.0%,sensitivity to penicillin and other 12 kinds of antimicrobial agents more than 80.0%,even 100.0%.ConclusionCook for most still sensitive,clinicians and microorganism inspection personnel should strengthen the cook.

Key words:Kocuria；identification；drug sensitive test

(收稿日期：2015-12-22)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.024

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1214-03

作者簡(jiǎn)介：楊銳，男，副主任檢驗(yàn)技師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)研究。