鄭昱鄭建芳(.河南省人民醫(yī)院 河南鄭州 450003;.新鄉(xiāng)市常樂制藥有限責(zé)任公司 河南新鄉(xiāng) 45363)

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大蒜油對(duì)小鼠免疫功能影響的研究

鄭昱1鄭建芳2
(1.河南省人民醫(yī)院 河南鄭州 450003;2.新鄉(xiāng)市常樂制藥有限責(zé)任公司 河南新鄉(xiāng) 453613)

【摘要】目的 探討不同劑量大蒜油對(duì)正常小鼠免疫功能的影響?方法 160只健康雌小鼠隨機(jī)分為4批,每批分為4籠,分別編號(hào)1～4號(hào),每籠10只;4批小鼠中每批1號(hào)籠為空白對(duì)照,2?3?4號(hào)籠分別按照2.0 mg/kg?4.0 mg/kg?8.0 mg/kg低?中?高3個(gè)劑量大蒜油進(jìn)行喂養(yǎng)31 d,第1批4籠小鼠進(jìn)行臟器/體質(zhì)量比值測(cè)定;第2批實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn);第3批實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn);第4批小鼠進(jìn)行小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)?結(jié)果2?3?4號(hào)籠小鼠臟器/體質(zhì)量比值與1號(hào)籠比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高劑量大蒜油組小鼠的吞噬指數(shù)明顯高于其他兩組,碳廓清能力提高(P＜0.05);食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1號(hào)籠(P＜0.05),并且隨著食用劑量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油小鼠光密度差值均高于對(duì)照1籠小鼠(P＜0.05)?結(jié)論 大蒜油具有提高小鼠免疫功能的效果?

【關(guān)鍵詞】大蒜油;碳廓清能力;巨噬細(xì)胞;淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

大蒜油,又叫大蒜素,是從大蒜中提取的一類與水不相混溶的油狀成分的總稱,具有大蒜特有的辛辣味?大蒜油是大蒜的主要活性成分,具有抗菌消炎?提高機(jī)體免疫能力?預(yù)防和治療心血管系統(tǒng)疾病?降血脂?保護(hù)肝臟?防癌抗癌和抗衰老等多種作用[1-4]?本研究旨在探討大蒜油對(duì)小鼠免疫功能的影響作用,為大蒜保健功能的開發(fā)利用提供參考?

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 大蒜油,由許昌元化生物科技有限公司生產(chǎn),批號(hào)20141120,避光,置陰涼干燥處保存?實(shí)驗(yàn)時(shí)使用大豆油配制成相應(yīng)劑量?

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇清潔級(jí)健康昆明種雌性小鼠160只[北京華阜康生物科技股份有限公司,許可證號(hào):SCXK(京2014-0004)],體質(zhì)量為(20±2)g,隨機(jī)分為4批,每批40只小鼠,隨機(jī)分為4籠,分別編號(hào)1?2?3?4,每籠10只,所有小鼠統(tǒng)一進(jìn)行基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng)?

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 電子天平?UV1700紫外分光光度計(jì)?二氧化碳培養(yǎng)箱?低速離心機(jī)?顯微鏡?無菌手術(shù)器械?微量注射器(25μl)?細(xì)胞計(jì)數(shù)器?24孔細(xì)胞培養(yǎng)板?玻璃平皿?200目篩網(wǎng)?計(jì)時(shí)器?血色素吸管?載玻片?紗布?試管等?生理鹽水?Hank's液?RPMⅠ1640培養(yǎng)液?小牛血清?酸性異丙酮?MTT?PBS緩沖液?印度墨汁?0.1%Na2CO3溶液?雞紅細(xì)胞?甲醇?Giemsa染液等?

1.4 給藥劑量 4批小鼠中每批1號(hào)籠為空白對(duì)照,2?3?4號(hào)籠分別按照2.0 mg/kg?4.0 mg/kg?8.0 mg/kg低?中?高3個(gè)劑量進(jìn)行喂養(yǎng),連續(xù)喂養(yǎng)31 d?

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 臟器/體質(zhì)量比值測(cè)定 喂養(yǎng)31 d后將第1 批4籠小鼠稱重,脫頸椎處死,取小鼠胸腺及脾臟,用濾紙將臟器表面血污吸干,去除筋膜,稱重,計(jì)算胸腺/體質(zhì)量?脾臟/體質(zhì)量比值,統(tǒng)計(jì)胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)?

1.5.2 碳廓清實(shí)驗(yàn) 第2批實(shí)驗(yàn)小鼠喂養(yǎng)31 d后稱重,印度墨汁以生理鹽水稀釋4倍,按照小鼠每10 g體質(zhì)量0.1 ml計(jì)算,進(jìn)行小鼠尾靜脈注射,立即計(jì)時(shí),在注射2?10 min分別小鼠內(nèi)眥靜脈叢取血20μl,迅速注入2 ml的0.1%Na2CO3溶液內(nèi),搖勻,以0.1% Na2CO3溶液為空白對(duì)照,于紫外分光光度計(jì)(酶標(biāo)儀)中在600 nm波長(zhǎng)處測(cè)量光密度值(OD)?脫頸椎處死小鼠,取肝臟和脾臟,吸凈臟器表面污血,稱重,以吞噬指數(shù)(a)表示小鼠碳廓清的能力,計(jì)算公式:

K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)

a=體質(zhì)量/(肝重+脾重)×K1/3

注:K:廓清指數(shù);t1:注射墨汁第1次取血時(shí)間;t2:注射墨汁第2次取血時(shí)間;OD1:t1時(shí)的血液標(biāo)本的吸光光度值;OD2:t2時(shí)的血液標(biāo)本的吸光光度值?

1.5.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 第3批實(shí)驗(yàn)小鼠喂養(yǎng)31 d,小鼠腹腔注射20%的雞紅細(xì)胞懸濁液1 ml,輕揉小鼠腹部,加速懸濁液分散,計(jì)時(shí)30 min,脫頸椎處死,將小鼠仰位置于鼠板上,腹腔注射生理鹽水2 ml,繼續(xù)輕揉腹部20次,吸取腹腔巨噬細(xì)胞洗液1 ml,滴于2片載玻片上,放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi),放入37℃孵箱內(nèi)溫育30 min,用生理鹽水沖洗,除去未貼片細(xì)胞,自然晾干,加入1∶1的丙酮-甲醇溶液固定,10 min后,再使用Giemsa-磷酸緩沖染色10 min,用蒸餾水漂洗后,吹干,進(jìn)行鏡檢?油鏡下計(jì)數(shù),每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞,計(jì)算100個(gè)腹腔巨噬細(xì)胞中吞有雞紅細(xì)胞的吞噬數(shù),計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù),計(jì)算公式:

吞噬百分率(P%)=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)×100%

吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)

X=sin-1√p

1.5.4 小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 第4批小鼠喂養(yǎng)31 d,脫頸椎處死,無菌環(huán)境下取脾臟,置于含有Hank's液的無菌培養(yǎng)皿中,用鑷子將脾臟磨碎,制成單個(gè)細(xì)胞懸液,過200目篩過濾,制成細(xì)胞懸液,繼續(xù)使用Hank's液洗2次,每次使用離心機(jī)以1 000 r/min離心5 min,將細(xì)胞懸浮于1 ml的完全培養(yǎng)液中,鏡檢計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度到3×106個(gè)/ml,然后將脾細(xì)胞懸液分2孔加入24孔培養(yǎng)板中,每孔1 ml,其中1孔中加入75μl的ConA液,另1孔不做處理,為空白對(duì)照,將培養(yǎng)板置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h,箱中二氧化碳濃度為5%,恒溫37℃,培養(yǎng)到68 h時(shí),吸取兩孔中的上清液0.7 ml,加入0.7 ml不含小牛血清的RPMⅠ1640培養(yǎng)液,以及50μl的MTT,繼續(xù)培養(yǎng)至72 h?從培養(yǎng)箱中拿出,兩孔均加入1ml酸性異丙酮,進(jìn)行吹打混勻,至紫色結(jié)晶完全溶解,將溶液移入比色杯中,用紫外-可見分光光度計(jì)進(jìn)行比色測(cè)定,測(cè)定波長(zhǎng)為570 nm,光密度差值越大,淋巴細(xì)胞增殖能力越強(qiáng),計(jì)算方法:

光密度差值=ODConA-OD無ConA

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)資料使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,定量資料以(±s)表示,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?

2 結(jié)果

2.1 大蒜油對(duì)小鼠臟器/體質(zhì)量比值的影響 3籠小鼠以不同劑量大蒜油喂養(yǎng)31 d后,與未食用大蒜油的1號(hào)籠小鼠相比,臟器/體質(zhì)量比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?見表1?

表1 大蒜油對(duì)小鼠臟器/體質(zhì)量比值的比較(n=10,±s)

表1 大蒜油對(duì)小鼠臟器/體質(zhì)量比值的比較(n=10,±s)

組別 1號(hào)籠 2號(hào)籠 3號(hào)籠 4號(hào)籠P大蒜油劑量/(mg/kg)2.0 4.0 8.0胸腺指數(shù) 3.61±0.30 3.45±0.47 3.44±0.38 3.52±0.51 >0.05脾臟指數(shù) 4.25±0.64 4.50±0.22 4.52±0.43 4.40±0.48 >0.05 0

2.2 大蒜油對(duì)小鼠碳廓清能力的影響 喂食大蒜油的3籠小鼠吞噬指數(shù)均高于1號(hào)籠,并且高劑量組小鼠的吞噬指數(shù)明顯高于其他兩組(P＜0.05)?見表2?

2.3 大蒜油對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響

食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1號(hào)籠(P＜0.05),并且隨著食用劑量的增加,吞噬率也成正比增高?見表3?

表2 大蒜油對(duì)小鼠碳廓清能力吞噬指數(shù)的比較(n=10,±s)

表2 大蒜油對(duì)小鼠碳廓清能力吞噬指數(shù)的比較(n=10,±s)

組別 大蒜油劑量/(mg/kg) 吞噬指數(shù)/aP 1號(hào)籠6.08±0.71 2號(hào)籠 2.0 6.32±0.51 >0.05 3號(hào)籠 4.0 6.44±0.48 >0.05 4號(hào)籠0 8.0 7.15±0.39 ＜0.05

表3 大蒜油對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的比較(n=10±s)

表3 大蒜油對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的比較(n=10±s)

組別 大蒜油劑量/(mg/kg)吞噬率/P%吞噬率平方根反正弦轉(zhuǎn)換值/XP 1號(hào)籠0 15±8 0.39±0.18 2號(hào)籠 2.0 26±7 0.47±0.14 ＜0.05 3號(hào)籠 4.0 30±5 0.53±0.11 ＜0.05 4號(hào)籠8.0 37±8 0.66±0.09 ＜0.01

2.4 大蒜油對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的影響 食用大蒜油小鼠光密度差值均高于對(duì)照1籠小鼠(P＜0.05)?見表4?

表4 大蒜油對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的比較(n=10,±s)

表4 大蒜油對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的比較(n=10,±s)

組別 大蒜油劑量/(mg/kg) 光密度差值P 1號(hào)籠0.11±0.03 2號(hào)籠 2.0 0.13±0.03 ＜0.05 3號(hào)籠 4.0 0.16±0.02 ＜0.05 4號(hào)籠0 8.0 0.17±0.04 ＜0.05

3 討論

大蒜為百合科蔥屬植物蒜的鱗莖,自古大蒜就為醫(yī)食同源,一方面能夠促進(jìn)消化?增強(qiáng)食欲?分解動(dòng)物性蛋白質(zhì)利于人體吸收;另一方面,其被譽(yù)為“天然廣譜抗生素",具有抗菌?抗病毒?抗原蟲?抗炎等作用?近年來研究顯示,大蒜越來越多的藥效如預(yù)防動(dòng)脈硬化?降血脂?抗癌等被人們認(rèn)識(shí)?接受,大蒜主要化學(xué)成分有揮發(fā)油?氨基酸?硫胺等,揮發(fā)油中大蒜辣素為主要有效成分[5]?

本研究結(jié)果顯示,2?3?4號(hào)籠小鼠臟器/體質(zhì)量比值與1號(hào)籠比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高劑量大蒜油組小鼠的吞噬指數(shù)明顯高于其他兩組,碳廓清能力提高(P＜0.05);食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1號(hào)籠(P＜0.05),并且隨著食用劑量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油小鼠光密度差值均高于1號(hào)籠小鼠(P＜0.05)?由此說明,大蒜油對(duì)小鼠臟器?體質(zhì)量無明顯影響,可提高小鼠的碳廓清能力?巨噬細(xì)胞的吞噬能力,增加淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力,增強(qiáng)小鼠免疫功能?

參考文獻(xiàn)

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[2] 付強(qiáng)強(qiáng),曾濤,李陽.大蒜油對(duì)小鼠酒精性脂肪肝預(yù)防作用[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2010,26(11):1408-1409.

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[5] 張靜,孔德.大蒜油活性成分?制劑制備和配伍應(yīng)用[J].世界臨床藥物,2010,1(10):611-615.

A study of the effects of garlic oil on the immune function ofm ice

Zheng Yu1,Zheng Jianfang2
(1.People's Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450003,China;2.Xinxiang Changle Pharmaceutical Co.,Ltd,Xinxiang 453613,China)

【Abstract】Objective To study the efects of diferent doses of garlic oil on the immune function ofmice.Methods 160 healthy femalemice were random ly divided into 4 groups,each group was divided into 4 cages respectively,no.1～4,10 per cage.No.1 cage in each group was selected as ck,2,3,4 cageswere fed with 2.0 mg/kg,4.0 mg/kg,8.0mg/kg(low,me-dium and high)three doses of garlic oil respectively for 31 d.The viscera/weight ratio was determined in the first4 cages;car-bon clearance testwas carried out in the second batch;the experiments thatmacrophages in abdominal cavity ofmice swalowed up chicken red blood cels was carried out in the third batch;the lymphocyte transformation test was carried out in the fouth batch.Resu lts There was no significant diference in viscera/weight ratio between no.1 cage and no.2～4 cages(P>0.05).The phagocytic index in high-dose garlic oil group was significantly higher than the other two groups(P＜0.05),and the car-bon clearance ability was improved.The phagocytic ratio ofmice eating garlic oilwas higher than that in no.1 cage(P＜0.05),and with the increase of consumption of dosage,the phagocytic ratio was increased.Optical density diference ofmice eating gar-lic oilwas higher than that in no.1 cage(P＜0.05).Conclusion Garlic oil could improve the immune function ofmice.

【Key words】garlic oil;carbon clearance ability;macrophages;lymphocyte transformation test

(收稿日期:2015-09-20)

【中圖分類號(hào)】R 285

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.003