黃艷平，黃錦雄，楊飛燕，韋　夙

(柳州市人民醫(yī)院血液科，廣西柳州 545006)

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探討suPAR與IL-27對多發(fā)性骨髓瘤總體生存時間的預測效能*

黃艷平，黃錦雄，楊飛燕，韋夙

(柳州市人民醫(yī)院血液科，廣西柳州 545006)

[摘要]目的探討可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體(suPAR)與白細胞介素27(IL-27)對多發(fā)性骨髓瘤(MM)總體生存時間(OS)的預測效能。方法通過ELISA法檢測41例初治MM患者(觀察組)和40例健康體檢者(對照組)血漿suPAR及IL-27的表達，并進行比較；隨訪MM患者的OS，分析suPAR及IL-27與OS的關系。結果觀察組suPAR、IL-27水平為(23.30±5.25)ng/mL、(11.23±2.55)ng/L，對照組suPAR、IL-27水平為(14.99±4.97)ng/mL、(18.32±6.70)ng/L，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。suPAR與年齡、血紅蛋白、清蛋白、血肌酐、乳酸脫氫酶、β2微球蛋白均無明顯相關性，而IL-27只與血紅蛋白呈正相關(P<0.05)。隨訪時間15(7～40)個月，在OS<15個月組與OS≥15個月組，suPAR、IL-27在兩組中比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。suPAR<23 ng/mL組與≥23 ng/mL組OS比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，IL-27<11 ng/L組與≥11 ng/L組OS比較差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論在初治MM中，suPAR表達上升而IL-27表達下降，未發(fā)現(xiàn)二者對OS有預測效能。

[關鍵詞]多發(fā)性骨髓瘤；尿纖溶酶原激活物；受體，細胞表面；白細胞介素27；總體生存時間

可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體(serum urokinase plasminogen activation receptor，suPAR)是尿激酶型纖溶酶原激活物受體(urokinase plasminogen activation receptor，uPAR)的可溶形式[1]，白細胞介素27(interleukin-27)是一種新的IL-6/IL-12細胞因子家族成員[2]，二者抗腫瘤作用逐漸受到關注，本實驗通過檢測初治多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)患者suPAR及IL-27的表達，探討二者對MM患者總體生存時間(overall survival，OS)的預測效能。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2012年3月至2014年3月本院初治的MM患者共41例(觀察組)，其中男23例，女18例；年齡37～79歲，中位62歲。MM患者中Ⅰ期3例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例；IgG型20例、IgA型13例、輕鏈型5例、未分泌型3例。合并高血壓者18例、糖尿病的6例、冠心病者10例、乙型肝炎病毒攜帶者2例、陳舊性腦梗死7例(包括腔隙性腦梗死)、腎功能不全13例。入組標準：(1)MM患者的診斷的療效評定均符合2011年MM診治指南[3]；(2)確診后應用MP(美法侖+醋酸潑尼松)、M2(美法侖+醋酸潑尼松+環(huán)磷酰胺+司莫司汀+長春新堿)、VAD(長春新堿+多柔比星+地塞米松)、BD(利妥昔單抗+地塞米松)聯(lián)合沙利度胺，或使用來那度胺聯(lián)合地塞米松治療，并配合改善骨質疏松等輔助支持治療；(3)患者均規(guī)律化療4個療程以上，排除化療期間出現(xiàn)嚴重感染而導致不能按時化療者；(4)患者入院時均完善肺部CT檢查，在無肺部、腸道等其他部位感染情況下采血；(5)MM中合并高血壓、糖尿病的患者，血壓、血糖均穩(wěn)定在正常范圍。排除標準：采血時無嚴重感染及合并自身免疫性疾病的患者，無孕產(chǎn)婦。另選同期來本院健康體檢者40例(對照組)，其中男24例，女16例；年齡44～72歲，中位60歲。

1.2方法清晨采集初治MM患者化療前空腹靜脈全血及體檢者的空腹靜脈全血，用檸檬酸抗凝管，于2 h內(nèi)離心，4 000 r/min離心5min，分離血漿，分裝后至-80 ℃低溫冰箱保存，應用ELISA檢測血漿suPAR及IL-27的水平，ELISA試劑盒購自上海勁馬生物有限公司。按照試劑盒中說明書的步驟進行操作：在待測樣本孔中加入樣品稀釋液40 μL及待測樣品10 μL，在37 ℃溫育30 min，重復洗滌5次，加入酶標試劑50 μL，再次溫育洗滌，加入顯色劑，避光顯色10 min，加入終止液，用酶標儀檢測450 nm處的吸光度(A)值，建立標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣本suPAR、IL-27水平。根據(jù)OS情況將MM患者分為OS<15個月與OS≥15個月組，根據(jù)suPAR水平將MM患者分為suPAR<23 ng/mL及suPAR≥23 ng/mL組，根據(jù)IL-27水平將MM患者分為IL-27<11 ng/L與IL-27≥11 ng/L組。比較各組對象suPAR、IL-27水平。

2結果

2.1觀察組與對照組suPAR、IL-27水平比較觀察組suPAR、IL-27水平為(23.30±5.25)ng/mL、(11.23±2.55)ng/L，對照組suPAR、IL-27水平為(14.99±4.97)ng/mL、(18.32±6.70)ng/L，二者比較差異均有統(tǒng)計學意義(t=0.825,P=0.032；t=25.87,P=0.000)。

2.2MM患者suPAR、IL-27水平與各臨床特征的相關性在治療前，suPAR與患者年齡、血紅蛋白、清蛋白、血肌酐、乳酸脫氫酶及β2 微球蛋白均無相關性(P>0.05)。而IL-27只與血紅蛋白呈正相關(P<0.05)，見表1。

2.3OS<15個月與OS≥15個月患者suPAR、IL-27水平比較病例隨訪至2015年3月31日，隨訪時間7～40個月，中位隨訪時間15個月，死亡17例，存活24例，總生存率58.54%。suPAR在OS<15個月組為(22.60±4.18)ng/mL；OS≥15個月組為(24.68±5.90)ng/mL，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(t=3.283,P=0.078)。IL-27在OS<15個月組為(11.17±2.84)ng/L，OS≥15個月組為(10.75±0.97)ng/L，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(t=2.211,P=0.145)。

2.4MM患者不同suPAR、IL-27亞組的OS比較在初治MM患者，suPAR平均值為23.30 ng/L,將suPAR分為<23 ng/mL及≥23 ng/mL組。suPAR<23 ng/mL組24例，生存時間為(16.63±2.21)個月；≥23 ng/mL組17例，生存時間為(22.09±4.86)個月，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.244，P=0.621)。IL-27的平均值為11.12 ng/L，將IL-27分為<11 ng/L與≥11 ng/L組，IL-27<11 ng/L組11例，生存時間為(13.27±2.54)個月；≥11 ng/L組為30例，生存時間為(21.74±3.35)個月，二者比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.036，P=0.154)。

3討論

MM是一種漿細胞異常增生的惡性腫瘤，臨床表現(xiàn)復雜，影響因素眾多。年齡、腎功能、血紅蛋白、乳酸脫氫酶，β2微球蛋白、骨髓漿細胞浸潤程度及疾病分期，療效等均可作為MM預后的影響因子[4]。尿激酶型纖溶酶原復合物(urokinase plasminogen activation，uPA)與uPAR蛋白水解系統(tǒng)在腫瘤的浸潤及轉移中發(fā)揮著重要作用[5]。suPAR在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中明顯升高，與疾病的總體生存時間有關[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，suPAR在MM患者中明顯升高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，和國內(nèi)外相關研究一致[6-7]。既往研究表明，suPAR主要通過降解細胞外基質成分或活化其他的蛋白酶原而促使腫瘤細胞的擴散，suPAR與uPA結合，使血漿纖維蛋白溶解酶原活化為纖維蛋白溶解酶，其進一步降解纖維蛋白，從而促進腫瘤細胞的浸潤及遠處轉移[1]。在MM中，uPA系統(tǒng)還可參與肝細胞生長因子轉化成活性形式，活化的肝細胞生長因子又可誘導IL-11的分泌，從而刺激破骨細胞的增殖，進一步參與骨髓組織的重構，影響骨髓基質的降解、漿細胞的轉移與歸巢[8]。由于suPAR在MM中高表達，因此，評價其對患者遠期預后有無影響則尤為重要。Rigolin等[6]發(fā)現(xiàn)在多發(fā)性骨髓瘤中，suPAR與sCD138、血肌酐、β2微球蛋白、疾病分期、髓外浸潤明顯相關，而與C反應蛋白和第13號染色體長臂缺失無關，多因素分析顯示第13號染色體長臂缺失與血漿suPAR、sCD138均可作為疾病預后的獨立危險因素。國內(nèi)沈杰等[7]通過檢測40例初治MM患者suPAR，發(fā)現(xiàn)其與疾病分期、腎功能、C反映蛋白、β2微球蛋白呈正相關，生存期大于2年的患者suPAR均值顯著低于生存期小于2年者，suPAR表達高是導致患者生存期小于2年的獨立因素，而且高suPAR表達還能早期預測髓外轉移。而本研究并未發(fā)現(xiàn)suPAR與年齡、血紅蛋白、白蛋白、血肌酐、乳酸脫氫酶及β2微球蛋白有明顯相關性。suPAR在OS<15個月組與OS≥15個月組間差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，初治MM患者suPAR不同濃度組OS差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究隨訪MM患者中，總生存率只有58.54%，而沈杰等[7]研究中患者總生存率可達85%，可能與本資料患者年齡較大，合并癥多，化療耐受性差有關，也可能與本研究隨訪時間短有關，故還需進一步擴大樣本量及延長隨訪時間。

IL-27是一種新的IL-6/IL-12細胞因子家族成員由抗原提呈細胞產(chǎn)生，包括細胞因子p28與EBI3亞單位[2]。在抗感染[9]、抗腫瘤[10-11]及自身免疫性疾病[12]中發(fā)揮著重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)IL-27在MM患者中明顯下降，與Song等[13]研究一致，提示其具有抗MM的作用。既往研究證實IL-27可顯著抑制原代MM細胞和MM細胞系生長，同時原代MM細胞表面可表達IL-27受體，從MM患者分選出來的破骨祖細胞亦顯著表達IL-27受體，IL-27可直接抑制破骨細胞分化和溶骨活性[14]，同時還可下調IL-6、血管內(nèi)皮生長因子D和趨化因子CCL的活性，并且可上調抗血管活性因子CXCL9、CXCL10的活性，從而抑制血管新生[15]，故可推測，因IL-27抑制MM細胞增殖及抗血管新生的能力受到破壞，再者IL-27對IL-17的抑制作用減弱，亦可導致MM細胞的增殖，從而導致MM的進展。而夏天等[16]研究有不同的結果，其通過檢測20例初治MM患者血漿中IL-27、IL-6的水平，發(fā)現(xiàn)在MM患者二者的表達均高于對照組，但其不能解釋為何IL-27與IL-6既然共享受體亞單位gp130，而在MM中二者卻均升高，故IL-27在初治MM患者中是否升高有待進一步探討。本研究進一步分析IL-27與臨床指標的關系，發(fā)現(xiàn)IL-27與血紅蛋白呈正相關，而與年齡、腎功能、血紅蛋白、乳酸脫氫酶、β2微球蛋白無明顯相關性。血紅蛋白作為MM預后不良因素之一，貧血越重，MM愈后越差[4]，IL-27與血紅蛋白的相關性提示IL-27可作為預后不良指標。從而本實驗進一步分析IL-27與OS的關系，發(fā)現(xiàn)在OS<15個月組與OS≥15個月組間IL-27差異不明顯，IL-27不同水平組OS比較亦無明顯差異，故本研究尚不能證明IL-27與OS有關。Song等[13]也發(fā)現(xiàn)雖然IL-27/IL-17的比值與疾病無進展生存時間有關，比值越高疾病無進展時間越長，但也未發(fā)現(xiàn)單獨IL-27及IL-17與OS和疾病無進展生存時間有明確的關系，故IL-27與MM的OS是否有關還需大樣本量的研究。

綜上所述，suPAR在初治MM患者升高，而IL-27反而下降，提示IL-27有抗腫瘤的作用，為開發(fā)新的抗MM治療藥物提供了理論依據(jù)，但suPAR與IL-27是否與患者的OS有關有待更大樣本量及更長時間的隨訪研究。

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Study on prediction efficiency of suPAR and IL-27 to overall survival time in multiple myeloma*

HuangYanping,HuangJinxiong,YangFeiyan,WeiSu

(DepartmentofHematology,LiuzhouMunicipalPeople′sHospital,Liuzhou,Guangxi545006,China)

[Abstract]ObjectiveTo explore the prediction efficiency of serum urokinase plasminogen activation receptor(suPAR) and interleukin-27(IL-27) to the overall survival(OS) time in the patients with multiple myeloma(MM).MethodsThe ELISA method was adopted to detect the plasma suPAR and IL-27 expressions in 41 newly diagnosed patients with MM(observation group) and 40 persons undergoing the physical examination.The detection results were compared between the two groups.OS of MM patients were followed up and its relation with suPAR and IL-27 was analyzed.ResultsThe levels of suPAR and IL-27 in the observation group were (23.30±5.25)ng/mL and (11.23±2.55)ng/L,which in the control group were(14.99±4.97)ng/mL and (18.32±6.70)ng/L respectively,there were statistically significant differences between the two groups (P<0.05).suPAR had no significant correlation with age,hemoglobin,albumin,serum creatinie,lactate dehydrogenase and β2 microglobulin(β2-MG),while IL-27 had only positive correlation with hemoglobin(P<0.05).The follow-up time was 15(7-40) months,the levels of suPAR and IL-27 had no statistical difference between the OS<15 months group and the OS≥15 months group (P>0.05).OS had no statistical difference between the suPAR<23 ng/mL group and the suPAR ≥23 ng/mL group,so did OS between the IL-27<11ng/L group and the IL-27 ≥11ng/L group(P>0.05).ConclusionThe suPAR expression is elevated and the IL-27 expression is decreased in the newly diagnosed MM patients,their prediction efficiency to OS is not found.

[Key words]multiple myeloma;urinary plasminogen activator;receptors,cell surface;interleukin-27;overall survival

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.06.012

基金項目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科研資助項目(Z-2012578)。

作者簡介：黃艷平(1982-)，主治醫(yī)師，碩士研究生，主要從事血液病的診治研究。

[中圖分類號]R552

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)06-0760-03

(收稿日期：2015-09-18修回日期：2015-11-25)