吳廣成（梅河口市園藝特產(chǎn)工作站）

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馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)簡(jiǎn)介

吳廣成
（梅河口市園藝特產(chǎn)工作站）

10.16627/j.cnki.cn22-1215/s.2016.03.010

1　脫毒材料的篩選

所選植株必須是表現(xiàn)典型的本品種特性的植株，包括株型﹑葉型﹑花色等植物學(xué)性狀及成熟期等農(nóng)藝性狀；植株生長(zhǎng)健壯，無(wú)明顯的病毒性﹑真菌性﹑細(xì)菌性病害癥狀；單株產(chǎn)量和大薯率高；適時(shí)早收。

2　脫毒材料的表面消毒

塊莖通過(guò)自然休眠或用1％硫脲+5毫克/升赤霉素浸種5分鐘，以打破休眠。休眠后的塊莖用濕潤(rùn)砂覆埋，待薯塊頂芽長(zhǎng)到3～4厘米時(shí)，取芽作為外植體用于莖尖脫毒。切取2～3厘米的壯芽，去掉所有葉片，用自來(lái)水充分洗凈，并連續(xù)沖洗5～10分鐘。然后用0.1％的升汞溶液表面滅菌10分鐘，用無(wú)菌水徹底沖洗3～5次，置于封口的無(wú)菌瓶中備用（注意：無(wú)菌條件下操作）。一次消毒的芽不能太多，以免消毒后材料放置時(shí)間太長(zhǎng)，莖尖發(fā)生褐變，影響成活率；或?qū)⑼ㄟ^(guò)休眠的塊莖，用自來(lái)水洗凈后，用75％的酒精浸泡3～5秒鐘，經(jīng)自來(lái)水沖洗后用0.1％的升汞溶液滅菌10分鐘，在無(wú)菌條件下沖洗5次，最后將塊莖切成2厘米見(jiàn)方的小方塊，每塊帶一個(gè)芽眼，培養(yǎng)于三角瓶?jī)?nèi)（采用固體培養(yǎng)基）使之產(chǎn)生無(wú)菌苗，用于莖尖脫毒。

3　脫毒材料的熱處理

于10倍解剖鏡下，用尖頭手術(shù)刀，切取1～1.5毫米左右的莖尖，將取下的莖尖接種在不含任何激素的馬鈴薯快繁培養(yǎng)基上，于25℃每天光照16小時(shí)的培養(yǎng)室培養(yǎng)。待莖尖長(zhǎng)至1厘米時(shí)轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，以每天16小時(shí)光照，36℃的高溫處理6～8周。

4　莖尖剝離

在超凈工作臺(tái)上，在40倍解剖鏡下，用解剖刀小心除去莖尖周圍的小葉片和葉原基，暴露出頂端圓滑的生長(zhǎng)點(diǎn)，用解剖針細(xì)心切取所需的莖尖分生組織，最后只保留帶一個(gè)葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)，大小為0.1～0.2毫米。切取的莖尖分生組織隨即接種到馬鈴薯莖尖培養(yǎng)基上，以切面接觸瓊脂，封嚴(yán)瓶口置于培養(yǎng)室進(jìn)行離體培養(yǎng)。容器以15厘米×2厘米的試管為宜，每管盛10毫升培養(yǎng)基接種一個(gè)莖尖，同時(shí)給試管壁編號(hào)并做工作日記，注明接種的品種﹑試管數(shù)﹑日期等。

5　脫毒苗病毒檢測(cè)

經(jīng)過(guò)莖尖剝離試管培養(yǎng)后產(chǎn)生的新植株，只有經(jīng)檢測(cè)無(wú)任何病毒的脫毒苗才能保留，進(jìn)一步在試管內(nèi)大量擴(kuò)繁，獲得無(wú)毒試管苗群體，應(yīng)用于微型薯生產(chǎn)。