陳俊臣 綜述,劉恩令 審校

(1.華北理工大學(xué)研究生學(xué)院，河北唐山 063000；2.河北省唐山市工人醫(yī)院婦產(chǎn)科 063000)

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卵巢癌靶向治療藥物偶聯(lián)靶點(diǎn)的研究進(jìn)展

陳俊臣1,2綜述,劉恩令2審校

(1.華北理工大學(xué)研究生學(xué)院，河北唐山 063000；2.河北省唐山市工人醫(yī)院婦產(chǎn)科 063000)

卵巢癌；靶向治療；藥物靶點(diǎn)；單克隆抗體；偶聯(lián)；非抗體偶聯(lián)

女性生殖器官惡性腫瘤中，卵巢癌病死率位居首位[1]，且發(fā)病率逐年增加。靶向治療指針對(duì)已明確的致癌位點(diǎn)(蛋白分子或基因片段)設(shè)計(jì)相應(yīng)治療藥物，藥物在體內(nèi)特異性結(jié)合致癌位點(diǎn)并發(fā)生作用，使癌細(xì)胞特異性死亡。這就要求靶向治療藥物同時(shí)具有殺傷作用和靶向作用，卵巢癌靶向治療中多種藥物對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用顯著，但因其靶向作用差導(dǎo)致的對(duì)正常組織的損傷限制了藥物的用量及最終的殺傷效能。因此，提高卵巢癌靶向治療藥物的靶向作用就成了有力的解決措施。找到卵巢癌細(xì)胞表面的特異性結(jié)合位點(diǎn)及其配體，將配體偶聯(lián)藥物形成復(fù)合物，通過復(fù)合物中的配體與癌細(xì)胞上的相應(yīng)位點(diǎn)特異性結(jié)合，進(jìn)而將藥物輸送至卵巢癌細(xì)胞內(nèi)，這就增加了藥物的靶向性?，F(xiàn)將已投入研究的可與藥物偶聯(lián)的配體及其對(duì)應(yīng)的卵巢癌細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行綜述。

1 單克隆抗體偶聯(lián)的卵巢癌靶向治療

單克隆抗體具有特異性識(shí)別抗原的能力。以抗體為載體，通過交聯(lián)劑連接上藥物，將藥物選擇性地運(yùn)送入靶細(xì)胞，形成抗體藥物偶聯(lián)物(antibody drug conjugates，ADCs)[2]。通過抗體藥物偶聯(lián)物與卵巢癌抗原結(jié)合，可以大大提高偶聯(lián)藥物的特異性。

1.1 人精子蛋白17(sperm protein 17，Sp17)單克隆抗體3C12與Sp17抗原介導(dǎo)的卵巢癌靶向治療 Sp17具有以下屬性：(1)是高度保守的睪丸組織特異性蛋白；(2)在某些婦科腫瘤組織，尤其是卵巢癌組織中特異性高表達(dá)，是潛在的卵巢癌靶向治療的靶點(diǎn)之一[3]。近年來相關(guān)研究報(bào)道，利用高表達(dá)Sp17的腫瘤細(xì)胞和動(dòng)物模型，以Sp17單克隆抗體(3C12)為靶向載體，將“彈頭”藥物阿霉素(doxorubicin，DOX)與抗體偶聯(lián)，形成3C12-DOX抗體藥物免疫偶聯(lián)物(antibody-drug conjugate，ADC)特異性結(jié)合卵巢癌組織中的Sp17。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在效應(yīng)因子的作用下3C12對(duì)Sp17+的細(xì)胞具有明顯殺傷作用，尤其是3C12-DOX偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物不僅在體內(nèi)外均具有明顯的抑制腫瘤的作用，而且安全性優(yōu)于單用化療藥物(DOX)[4]。Sp17為靶點(diǎn)的腫瘤靶向治療為進(jìn)一步開發(fā)卵巢癌靶向藥物奠定了理論基礎(chǔ)。

1.2 EpCAM單克隆抗體MOC31與EpCAM抗原介導(dǎo)的卵巢癌靶向治療 上皮細(xì)胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule，EpCAM)屬性為跨膜糖蛋白，它高表達(dá)于包括卵巢癌在內(nèi)的多種癌細(xì)胞表面[5]，90%以上的上皮性卵巢癌中有EpCAM的表達(dá)[6]。EpCAM單克隆抗體MOC31可與EpCAM特異性結(jié)合，共同夠成卵巢癌靶向治療的又一靶點(diǎn)。研究現(xiàn)狀：據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，將EpCAM單克隆抗體MOC31與假單胞菌外毒素A(pseudomonas exotoxin A，PE)偶聯(lián)形成免疫毒素MOC31PE，在卵巢癌B76和HOC7細(xì)胞系中加入免疫毒素MOC31PE。結(jié)果顯示：免疫毒素MOC31PE能抑制卵巢癌細(xì)胞蛋白合成，減弱細(xì)胞活力，減少癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。MOC31PE為復(fù)發(fā)性卵巢癌的治療及卵巢癌的耐藥性提供了一條新的解決途徑[7]。

1.3 糖類抗原125(CA125)單克隆抗體3A5與CA125抗原介導(dǎo)的卵巢癌靶向治療 CA125抗原為細(xì)胞表面的黏液樣糖蛋白，由體內(nèi)MUC16基因編碼。CA125抗原表達(dá)于多種婦科腫瘤，其在晚期上皮性卵巢癌中陽性率高達(dá)95%[7]。同時(shí)，CA125也是卵巢癌最常用的血清腫瘤標(biāo)記物。研究現(xiàn)狀：Chen等[8]將靶向CA125的單克隆抗體3A5與多拉司他汀衍生物(auristatin)偶聯(lián)形成3A5多拉司他汀偶聯(lián)物(3A5-vc-auristatin)，每周注射2.5 mg/kg的3A5-vc-auristatin于異種移植OVCAR-3人卵巢癌細(xì)胞的裸鼠，連續(xù)注射4周，荷瘤裸鼠的壽命平均由60 d延長至250 d以上，這表明該偶聯(lián)物具有很強(qiáng)的抗腫瘤生長作用。對(duì)于卵巢癌藥物偶聯(lián)靶向治療的抗體偶聯(lián)物而言，由于在卵巢癌細(xì)胞表面的高表達(dá)，CA125成為了潛在的高靶向性靶點(diǎn)。

1.4 黏蛋白1(MUC1)單克隆抗體C595與MUC1抗原介導(dǎo)的卵巢癌靶向治療 MUC1屬性為一種高糖基化大分子跨膜蛋白，它在腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移等方面起到重要作用。MUC1在腫瘤組織中異常表達(dá)，使其成為一種重要的腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物。約90%的上皮性卵巢癌患者的腫瘤細(xì)胞表面過量表達(dá)MUC1抗原。C595是抗MUC1的鼠源單克隆抗體，多用于對(duì)卵巢癌的臨床診斷。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，將放射性物質(zhì)(213Bi)與鼠源單抗C595偶聯(lián)作用于卵巢癌細(xì)胞，結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞凋亡。隨后，該研究組將單抗偶聯(lián)物213Bi-C595經(jīng)腹腔注射至荷瘤裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)單一注射355 MBq/kg的單抗偶聯(lián)物213Bi-C595能延長裸鼠的壽命[9]。這使MUC1成為卵巢癌靶向治療的又一潛在藥物偶聯(lián)靶點(diǎn)。

1.5 HER2單克隆抗體Sc7301與人類表皮生長因子受體2(HER2)抗原介導(dǎo)的卵巢癌靶向治療 HER2屬性為c-erbB-2編碼跨膜糖蛋白，它是HER家族之一。HER2在包括卵巢癌的多種腫瘤組織中過表達(dá)。研究現(xiàn)狀：將紫杉醇與HER2單克隆抗體Sc7301偶聯(lián)作用于人卵巢癌SKOV3細(xì)胞系，結(jié)果顯示，其產(chǎn)生的抑制作用為同劑量紫杉醇與Sc7301混合物的2～3倍，而且細(xì)胞的凋亡現(xiàn)象隨著偶聯(lián)物濃度的升高而更加明顯[10]。另外，除Sc7301外，HER2另一單克隆抗體曲妥珠單抗與含二硫鍵的美登醇衍生物DM1偶聯(lián)，偶聯(lián)物對(duì)大部分高表達(dá)HER2的腫瘤細(xì)胞都具有活性，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有更高的選擇性，該偶聯(lián)物可治療對(duì)曲妥珠單抗耐藥的患者，目前正處于Ⅲ期臨床試驗(yàn)階段[11]。卵巢癌的單克隆抗體還有很多，但靶向作用最強(qiáng)的特異性抗原抗體有待進(jìn)一步遴選。另外，已明確的特異性抗原抗體的藥物偶聯(lián)方式及效果也有待進(jìn)一步研究。

2 非抗體偶聯(lián)的卵巢癌靶向治療

2.1 激素相關(guān)受體

2.1.1 促黃體生成素釋放激素(LHRH)及其受體(LHRH-R)介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù) 促性腺激素釋放激素LHRH為下丘腦分泌的一種肽類物質(zhì)，作用于垂體產(chǎn)生黃體生成素(LH)。在卵巢癌細(xì)胞表面有70%～80%高親和力LHRH-R表達(dá)，而在正常卵巢組織或細(xì)胞表面幾乎檢測(cè)不到。LHRH-R作為一種卵巢癌細(xì)胞表面標(biāo)志物，已成為卵巢癌治療研究的新靶點(diǎn)。LHRH能靶向結(jié)合卵巢癌表面的LHRH-R。通過LHRH偶聯(lián)藥物、靶向輸送，為卵巢癌靶向藥物治療提供新的手段。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，LHRH多肽偶聯(lián)的順鉑納米右旋糖酐能夠抑制乳腺癌的生長和轉(zhuǎn)移[12]。另有研究顯示，LHRH偶聯(lián)的順鉑納米凝膠是LHRH-R陽性的卵巢癌的一種非常有前景的治療方式[13]。LHRH及LHRH-R介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù)有望成為一種有效的卵巢癌靶向治療新方法。

2.1.2 人絨毛膜促性腺激素(hCG)與hCG受體介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù) hCG屬性為胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，由α和β二聚體的糖蛋白組成。有研究者檢測(cè)了臨床62例卵巢腫瘤患者的hCG受體mRNA，發(fā)現(xiàn)40%的卵巢癌表達(dá)hCG受體[14]。研究現(xiàn)狀：有學(xué)者將hCG與DOX通過戊二醛偶聯(lián)成靶向化療制劑，經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靶向復(fù)合物的細(xì)胞毒性比非靶向的DOX增加8倍，且這種細(xì)胞毒性作用并不局限于瞬間殺傷，它能表現(xiàn)出長效的抗增殖活性[15]。所以hCG與hCG受體介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù)可以作為卵巢癌的一種輔助治療選擇。另外，由于LH和hCG與同一受體結(jié)合，LH受體也是hCG受體，即LH/CG受體。Bodek等[16]合成了細(xì)胞溶解肽和hCG β鏈第81～95個(gè)氨基酸片段的融合蛋白，通過動(dòng)物模型證實(shí)，該融合蛋白能夠特異性殺傷LH受體陽性的腫瘤細(xì)胞，可作為特異性的抗腫瘤藥物。

2.1.3 促卵泡激素(FSH)多肽及其受體(FSHR)介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù) FSH為垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種激素，成分為糖蛋白。卵巢表面生發(fā)上皮、多數(shù)卵巢癌組織均有FSHR表達(dá)。其中，50%～60%卵巢癌組織中有FSHR的表達(dá)。FSHR在機(jī)體分布相對(duì)局限，集中于生殖系統(tǒng)，在肝臟等其他重要組織器官幾乎未見分布。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，將合成的FSH多肽與具有雙功能基團(tuán)的聚乙二醇(NHS-PEG-MAL)連接，利用不同比例的連接產(chǎn)物與多聚陽離子共聚物聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)反應(yīng)形成基因藥物遞送系統(tǒng)，即FHS多肽修飾的F-NP納米復(fù)合物(F-PEG-PEI/DNA納米復(fù)合物)[17]。結(jié)果顯示，該復(fù)合物特異性地沉默帶有FSHR陽性細(xì)胞中的趨化因子1(CXCL1)表達(dá)，可充分發(fā)揮該基因藥物的作用。通過FSH多肽與ES-2細(xì)胞表面的FSHR結(jié)合并被細(xì)胞內(nèi)吞，大大增加了基因藥物進(jìn)入細(xì)胞的含量，增強(qiáng)了其抑制腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的效果[17]。

2.2 其他

2.2.1 CD44與透明質(zhì)酸(HA)介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù) CD44屬性為一種糖蛋白，是一類重要的細(xì)胞表面黏附分子，其基因位于人的第11號(hào)染色體短臂上[18]。腫瘤細(xì)胞表面CD44處于高度活化的過表達(dá)狀態(tài)，而許多正常細(xì)胞表面CD44則處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)。CD44與癌癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[19]。腫瘤細(xì)胞表面CD44的最主要配體為HA，偶聯(lián)藥物的HA與CD44結(jié)合形成復(fù)合物，遇溶酶體，在酸水解酶作用下使HA降解進(jìn)而釋放藥物。HA骨架充滿大量羧基和羥基，在氫鍵作用力的作用下，HA可以吸附在含有親水表面的抗腫瘤藥物上。研究現(xiàn)狀：Xin等[20]將苯丙氨酸、亮氨酸等多種不同氨基酸作為HA的連接臂，制得的藥物共軛物擁有更快的體外釋藥速度。因此，HA與CD44相互作用的靶向給藥也可作為目前卵巢癌有效靶向給藥的研究方向。

2.2.2 葉酸和葉酸受體介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥技術(shù) 葉酸為一種低相對(duì)分子質(zhì)量的微量營養(yǎng)素，它在預(yù)防胚胎發(fā)育缺陷和癌癥中發(fā)揮著重要作用[21]。葉酸受體高表達(dá)于90%以上的卵巢癌細(xì)胞，而在正常組織中，葉酸受體無過表達(dá)，這就使葉酸受體成為了卵巢癌絕好的腫瘤相關(guān)抗原[22]。偶聯(lián)藥物的葉酸與卵巢癌細(xì)胞表面葉酸受體相結(jié)合成為一種卵巢癌治療的新策略。研究現(xiàn)狀：葉酸可以偶聯(lián)多種低相對(duì)分子質(zhì)量的化療藥物，它通過自身的γ-羧基團(tuán)與其他藥物分子結(jié)合，具有可控性。作為低相對(duì)分子質(zhì)量藥物的偶聯(lián)體，葉酸不具有免疫原性，且容易衍生[23]。根據(jù)葉酸偶聯(lián)藥物的這些特點(diǎn)，幾種葉酸偶聯(lián)的小分子藥物已被研發(fā)，如鉑類、氟脫氧尿苷酸低聚物、紫杉醇、美登木素生物堿類、絲裂霉素C、長春花堿、組蛋白脫乙?；虼家种苿┣绑w藥物等[24]。葉酸偶聯(lián)多西他賽是目前最有研究及應(yīng)用價(jià)值的創(chuàng)新藥物之一。

3 問題與展望

卵巢癌靶向治療前景廣闊，但也存在許多尚未解決的問題。靶向偶聯(lián)藥物遞藥系統(tǒng)從給藥到發(fā)揮藥效的整個(gè)體內(nèi)過程面臨多重屏障：(1)循環(huán)系統(tǒng)中的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬、酶降解等；(2)腫瘤血管壁、腫瘤基質(zhì)、高間質(zhì)液壓等屏障在腫瘤組織傳遞過程中的阻礙；(3)藥物到達(dá)靶細(xì)胞后面臨的細(xì)胞攝取、溶酶體逃逸、藥物適時(shí)釋放等屏障。目前絕大部分研究均只致力于解決其中一種或幾種屏障。而腫瘤靶向治療的最終實(shí)現(xiàn)需要同時(shí)解決遞藥過程中所遇到的所有屏障。但是，這并不能阻擋卵巢癌靶向治療的研究和發(fā)展步伐。靶向治療在減少藥物對(duì)身體正常組織的毒副作用的同時(shí)，也增加了藥物的最大安全給藥劑量，使其對(duì)腫瘤組織產(chǎn)生更強(qiáng)的殺傷力。

另外，為克服卵巢癌對(duì)許多化療藥物的耐藥性，學(xué)者們嘗試?yán)酶鞣N殺傷性的溶細(xì)胞毒素直接作用于卵巢癌細(xì)胞膜，從而避免在藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的過程中，其各種耐藥機(jī)制對(duì)藥物濃度與藥物效能的影響。由于此類毒素往往對(duì)全身組織都具有很強(qiáng)的毒性，而且不能自發(fā)躲避正常組織，這就對(duì)殺傷性毒素的腫瘤組織靶向定位提出了更加嚴(yán)格的要求。因此，尋找卵巢癌的最佳藥物偶聯(lián)靶點(diǎn)成為亟待解決的問題。

[1]Isobe A,Sawada K,Kinose Y,et al.Interleukin 6 receptor is an Independent prognostic factor and a potential therapeutic target of ovarian cancer[J].PLoS One,2015,10(2)：e0118080.

[2]Sadekar S,Figueroa I,Tabrizi M.Antibody drug conjugates:application of quantitative pharmacology in modality design and target selection[J].AAPS J,2015,17(4)：828-836.

[3]Straughn JJ,Shaw DR,Guerrero A,et al.Expression of sperm protein 17(Spl7)in ovarian cancer[J].Int J Cancer,2004,108(6):805-811.

[4]Song JX,Li FQ,Cao WL,et al.Anti-Sp17 monoclonal antibody-doxorubicin conjugates as molecularly targeted chemotherapy for ovarian carcinoma[J].Target Oncol,2014,9(3):263-272.

[5]Nunna S,Reinhardt R,Ragozin S,et al.Targeted methylation of the epithelial cell adhesion molecule (EpCAM) promoter to silence its expression in ovarian cancer cells[J].PLoS One,2014,9(1):e87703.

[6]Wiiger MT,Bideli H,Fodstad ?,et al.The MOC31PE immunotoxin reduces cell migration and induces gene expression and cell death in ovarian cancer cells[J].J Ovarian Res,2014(7):23.

[7]曹王麗，宋佳希．單克隆抗體靶向治療卵巢癌研究進(jìn)展[J]．醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2013，26(5)：536-540．

[8]Chen Y,Clark S,Wong T,et al.Armed antibodies targeting the mucin repeats of the ovarian cancer antigen,MUC16,are highly efficacious in animal tumor models[J].Cancer Res,2007,67(10):4924-4932.

[9]Song YJ,Qu CF,Rizvi SM,et al.Cytotoxicity of PAI2,C595 and herceptin vectors labeled with the alpha-emitting radioisotope bismuth-213 for ovarian cancer cell monolayers and clusters[J].Cancer Lett,2006,234(2):176-183.

[10]劉東，饒子超，陳兆聰．紫杉醇與抗HER2單抗Sc7301偶聯(lián)物對(duì)腫瘤細(xì)胞株的體外殺傷效應(yīng)[J]．中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(1)：10-13．

[11]Lewis Phillips GD,Li G,Dugger DL,et al.Targeting HER2-positive breast cancer with trastuzumab-DM1,an antibody-cytotoxic drug conjugate[J].Cancer Res,2008,68(22):9280-9290.

[12]Li M,Tang Z,Zhang Y,et al.Targeted delivery of cisplatin by LHRH-peptide conjugated dextran nanoparticles suppresses breast cancer growth and metastasis[J].Acta Biomater,2015(18):132-143.

[13]Nukolova NV,Oberoi HS,Zhao Y,et al.LHRH-Targeted nanogels as a delivery system for cisplatin to ovarian cancer[J].Mol Pharm,2013,10(10):3913-3921.

[14]Krebs LJ,Wang X,Pudavar HE,et al.Regulation of targeted chemotherapy with cytotoxic lutenizing hormone-releasing hormone analogue by epidermal growth factor[J].Cancer Res,2000,60(15):4194-4199.

[15]Beck EP,Vincenti D,Licht P,et al.In vitro activity of human chorionic gonadotropin (hCG)-doxorubicin conjugates against ovarian cancer cells[J].Anticancer Res,2000,20(5A):3001-3006.

[16]Bodek G,Vierre S,Rivero-Müller A,et al.A novel targeted therapy of Leydig and granulosa cell tumors through the luteinizing hormone receptor using a hecate-chorionic gonadotropin beta conjugate in transgenic mice[J].Neoplasia,2005,7(5):497-508.

[17]張曉燕．卵泡刺激素受體靶向的卵巢癌納米化療給藥系統(tǒng)的研制[D]．上海：復(fù)旦大學(xué)，2008．

[18]Hertweck MK,Erdfelder F,Kreuzer KA.CD44 in hematological neoplasias[J].Ann Hematol,2011,90(5):493-508.

[19]Du YR,Chen Y,Gao Y,et al.Effects and mechanisms of anti-CD44 monoclonal antibody A3D8 on proliferation and apoptosis of sphere-forming cells with stemness from human ovarian cancer[J].Int J Gynecol Cancer,2013,23(8):1367-1375.

[20]Xin D,Wang Y,Xiang J.The use of amino acid linkers in the conjugation of paclitaxel with hyaluronic acid as drug delivery system:synthesis,self-assembled property,drug release,and in vitro efficiency[J].Pharm Res,2010,27(2):380-389.[21]Kaur G,Shukla A,Sivakumar S,et al.Soft structure formation and cancer cell transport mechanisms of a folic acid-dipeptide conjugate[J].J Pept Sci,2015,21(3):248-55.

[22]Armstrong DK,White AJ,Weil SC,et al.Farletuzumab (a monoclonal antibody against folate receptor alpha) in relapsed platinum-sensitive ovarian cancer[J].Gynecol Oncol,2013,129(3):452-458.

[23]Marchetti C,Palaia I,Giorgini M,et al.Targeted drug delivery via folate receptors in recurrent ovarian cancer:a review[J].Onco Targets herapy,2014(7):1223-1236.

[24]Suzuki T,Hisakawa S,Itoh Y,et al.Design,synthesis,andbiological activity of folate receptor-targeted prodrugs of thiolate histone deacetylase inhibitors[J].Bioorg Med Chem Lett,2007,17(15):4208-4212.

陳俊臣(1990-)，在讀碩士，主要從事卵巢癌治療研究。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.30.044

R737.31

A

1671-8348(2016)30-4305-03

2016-03-28

2016-07-12)