劉亞敏，石玉琳，陳 健，湯琛琛，蘇式兵，陳啟龍

（上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)復(fù)雜系統(tǒng)研究中心 上海 201203）

慢性乙型肝炎后肝硬化證候的生物物質(zhì)基礎(chǔ)研究進(jìn)展＊

劉亞敏，石玉琳，陳 健，湯琛琛，蘇式兵，陳啟龍＊＊

（上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)復(fù)雜系統(tǒng)研究中心 上海 201203）

慢性乙型肝炎（乙肝）后肝硬化是慢性乙型肝炎進(jìn)展至終末期的常見表現(xiàn)，臨床治療一直收效甚微。中醫(yī)辨證治療乙肝后肝硬化具有獨(dú)特作用。近年來，中醫(yī)藥在臨床辨證及對(duì)證治療慢性病已經(jīng)有了大量的探索，但復(fù)雜的“病”、“證”關(guān)系依然制約了中醫(yī)藥治療乙肝后肝硬化的發(fā)展。本文從乙肝后肝硬化病證機(jī)制出發(fā)，分別從基因、蛋白、代謝及表觀遺傳學(xué)水平闡述了乙肝后肝硬化“病”的分子機(jī)制及“證”的生物物質(zhì)基礎(chǔ)。并展望了基于病證結(jié)合的中醫(yī)精準(zhǔn)醫(yī)療在乙肝后肝硬化個(gè)性化治療上的應(yīng)用前景，以期為乙肝后肝硬化中醫(yī)精確治療的發(fā)展提供參考。

中醫(yī)藥 乙肝后肝硬化 病與證 生物物質(zhì)基礎(chǔ)

慢性乙型肝炎（慢乙肝）后肝硬化（Hepatitis B-Caused Cirrhosis，HBC）是由乙肝病毒（Hepatitis B Virus，HBV）引起的慢性、進(jìn)行性、彌漫性肝纖維化以及假小葉的形成為特點(diǎn)的慢性疾病。中國(guó)的HBV感染及慢乙肝患者眾多，其中有超過30%的患者在未來15年內(nèi)會(huì)發(fā)展成肝硬化[1]。在乙肝肝硬化的失代償期，會(huì)出現(xiàn)腹水、門靜脈高壓及肝性腦病、上消化道出血等并發(fā)癥，嚴(yán)重危害患者的生命安全，每年死亡人數(shù)可高達(dá)100萬[2]。由于乙肝后肝硬化的分子機(jī)制十分復(fù)雜，臨床治療依然面臨諸多困難，而中醫(yī)辨證治療認(rèn)為是乙肝后肝硬化治療的一種獨(dú)特方法。一般而言，中醫(yī)治療會(huì)根據(jù)患者體質(zhì)、發(fā)病原因、具體表象以及病程進(jìn)展等進(jìn)行綜合判斷、辨證施治[3，4]。然而，由于現(xiàn)今符合中醫(yī)藥特點(diǎn)的療效評(píng)價(jià)方法及其體系還不夠完善，導(dǎo)致中醫(yī)治療乙肝后肝硬化的臨床效價(jià)難以體現(xiàn)[5]，究其原因是因?yàn)橐腋魏蟾斡不谥嗅t(yī)證型間的動(dòng)態(tài)變化[6，7]及病證關(guān)系機(jī)制還有待深入研究。

1 病、證的一般內(nèi)涵

病與證是相互聯(lián)系的，但二者又具有不同的內(nèi)涵。病以病理學(xué)內(nèi)容為核心，具有一定發(fā)展規(guī)律且表現(xiàn)出若干特定癥狀的演變過程；證以病機(jī)為核心，是對(duì)疾病所處一定階段的病因、性質(zhì)、位置等所做的概括[8]。辨病即是從微觀角度出發(fā)，借助實(shí)驗(yàn)手段來認(rèn)識(shí)疾病的全過程，探求致病因子作用于不同機(jī)體表現(xiàn)出來的共同病理變化[9]；而辨證是從宏觀角度，注重根據(jù)病情某一發(fā)展階段的病理特點(diǎn)而做出階段性的判斷[10]。此外，疾病在不同時(shí)點(diǎn)、階段可表現(xiàn)為不同的證候，體現(xiàn)出一定的證候演變[11]。因此，疾病是決定證候的內(nèi)在穩(wěn)定的因素，證候是疾病的外在綜合表現(xiàn)[12]。從疾病發(fā)展時(shí)間上看，病包含多個(gè)證，體現(xiàn)了其動(dòng)態(tài)變化的過程。在空間上，疾病發(fā)生又可表現(xiàn)為一證包含多病的情況[13]。病與證具有一定的時(shí)空效應(yīng)，反映出病、證在時(shí)間與空間上復(fù)雜的交叉網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。

2 乙肝后肝硬化的“病”與“證”

目前，乙肝后肝硬化“病”、“證”的內(nèi)在關(guān)聯(lián)研究依然面臨諸多困難。主要體現(xiàn)在微觀的生物學(xué)指標(biāo)與宏觀的證候表型之間關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜，缺乏一個(gè)闡釋證候內(nèi)在整體性的研究方法[14]。因此，乙肝后肝硬化“病”的分子機(jī)制及“證”的分型與演化就成為系統(tǒng)闡述乙肝后肝硬化中醫(yī)病證關(guān)系機(jī)制的重要切入口。

2.1 乙肝后肝硬化“病”的分子機(jī)制

2.1.1 基因水平

在乙肝后肝硬化“病”的動(dòng)態(tài)變化中，發(fā)現(xiàn)CASP1、TGF-β1、IFI30、HLA-DMA、PAG1可能是慢乙肝-肝硬化過程的重要分子標(biāo)志物[15]。Liu N等[16]證實(shí)，HBV可以通過下調(diào)miR-15a的表達(dá)導(dǎo)致SMAD7的水平上升，而SMAD7的高表達(dá)又會(huì)抑制TGF-β1引起的細(xì)胞凋亡，促發(fā)肝臟纖維化甚至腫瘤的發(fā)生。Luo S M等[17]通過對(duì)比不同基因的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，IGF1和IGFBP3基因表達(dá)失衡可能是影響乙肝后肝硬化預(yù)后的重要因素。在肝硬化病人血清及外周血單核細(xì)胞中，IL17基因的表達(dá)水平升高，提示IL17不僅是導(dǎo)致炎癥發(fā)生的重要基因，還可能是肝硬化惡化的重要因素之一[18]。Cheong J Y等[19]發(fā)現(xiàn)，miR-604的rs2368392 CC基因型多見于慢乙肝、肝硬化及肝癌患者中，有趣的是，miR-604的T等位基因雖然是慢乙肝的易感基因，但卻是阻止慢乙肝向肝硬化、肝癌發(fā)展的保護(hù)型基因。郭琳瑯[20]發(fā)現(xiàn)，凋亡基因BAX和FAS過表達(dá)可能參與乙肝病毒致肝細(xì)胞損傷過程，通過引起感染細(xì)胞的凋亡而導(dǎo)致肝組織損傷。同時(shí)，在NF-κB和TGF-β信號(hào)通路中，上調(diào)miR-29的表達(dá)能夠抑制肝星狀細(xì)胞中膠原的分泌，從而延緩肝炎患者進(jìn)展成肝硬化[21，22]。而miR-222/miR-221的上調(diào)表達(dá)可激活肝星狀細(xì)胞膠原的分泌[23]，加速了患者肝纖維化及肝硬化的進(jìn)程。此外，miR-181b、miR-214-5p、miR-133a、miR-199等也認(rèn)為可能是乙肝后肝硬化發(fā)展過程中的生物標(biāo)志物[24]，其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步探索。

2.1.2 蛋白質(zhì)水平

研究證明，慢性肝病患者持續(xù)的HBV復(fù)制和表達(dá)可觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）[25]，而ERS可以上調(diào)MANF基因的表達(dá)及其編碼蛋白的分泌。潘高峰等[26]對(duì)不同炎癥和纖維化分級(jí)的肝臟穿刺組織進(jìn)行ITRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)MANF蛋白隨著炎癥和纖維化的加重而表達(dá)逐步增加。張超等[27]運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)GRIM-19蛋白在不同組織中的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)該蛋白在乙肝后肝硬化組織中的表達(dá)水平明顯高于肝癌組織、癌旁組織以及正常肝組織。之前也有文獻(xiàn)報(bào)道GRIM-19在一些癌組織中的表達(dá)顯著降低或缺失，這可能是肝細(xì)胞發(fā)生癌變后啟動(dòng)了抗凋亡因子抑制GRIM-19表達(dá)[28，29]。因此，GRIM-19在肝硬化組織表達(dá)量一旦降低，則可能是肝細(xì)胞發(fā)生癌變的一個(gè)重要判斷指標(biāo)。盧小玲等[30]發(fā)現(xiàn)DNA損傷修復(fù)基因所編碼的ERCC1蛋白會(huì)隨著HBV-DNA的復(fù)制活躍而降低，并且其表達(dá)是隨著乙肝患者的炎癥程度及纖維化程度的加重而呈現(xiàn)出一種先升高后降低的趨勢(shì)，提示ERCC1蛋白與慢乙肝和肝硬化的演變可能存在一定關(guān)系。此外，作為TLR3信號(hào)通路中重要的銜接蛋白TRIF常常會(huì)被感染的HBV所劫持而發(fā)展為免疫逃逸[31]。換而言之，通過人為上調(diào)肝細(xì)胞內(nèi)TRIF蛋白的表達(dá)，促進(jìn)了NF-κB、ISRE和IFN-β基因啟動(dòng)子的活化，誘導(dǎo)了具有抗病毒作用的炎癥因子、ISGs和IFN-β的表達(dá)，有助于肝細(xì)胞內(nèi)抗病毒狀態(tài)的建立。

2.1.3 代謝水平

機(jī)體內(nèi)代謝物是基因表達(dá)的最終產(chǎn)物，在代謝酶的作用下，其水平變化會(huì)受到機(jī)體內(nèi)、外環(huán)境等多種因素的綜合影響。由于肝臟是體內(nèi)最重要的代謝器官，一旦肝臟受到損害，那么機(jī)體的最終代謝產(chǎn)物必將會(huì)發(fā)生變化[32]。陸強(qiáng)等[33]利用核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）對(duì)肝癌、肝硬化患者和健康人血清中的代謝物分別進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)肝硬化、肝癌患者的血清中乙酰乙酸的含量降低，顯示肝細(xì)胞中脂肪酸的分解代謝可能被抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抗氧化物質(zhì)?；撬嵩诟斡不颊哐逯泻吭黾?，在肝癌患者的血清中卻沒有改變，表明肝硬化患者的肝細(xì)胞還可以通過增加合成?；撬醽淼种谱杂苫奈：?，但肝細(xì)胞癌變后會(huì)導(dǎo)致肝臟內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)遭受嚴(yán)重破壞，喪失了自我保護(hù)功能。與代償期相比，肝硬化失代償期患者血清中極低密度脂蛋白（Very Low-Density Lipoprotein，VLDL）和低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，LDL）的水平降低[34]，可能是由于肝組織脂質(zhì)合成的能力降低所導(dǎo)致。此外，由于肝臟同時(shí)還是人體內(nèi)葡萄糖代謝的重要場(chǎng)所，許多肝硬化患者的空腹血糖高于健康人群，但又明顯低于糖尿病患者，且其C肽及胰島素水平比健康人群及糖尿病患者都高，說明肝硬化患者很可能存在胰島素抵抗[35，36]。

2.1.4 表觀遺傳學(xué)水平

表觀遺傳學(xué)研究顯示DNA甲基化狀態(tài)可能為進(jìn)一步明確慢性肝病發(fā)病機(jī)制提供線索[37]。Mann J等[38]首次發(fā)現(xiàn)了DNA甲基化在肝星狀細(xì)胞激活過程中的作用。該研究用去甲基化藥物處理肝星狀細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)PPARγ及核轉(zhuǎn)錄因子kappa B的表達(dá)上調(diào)，從而可抑制肝星狀細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，延緩肝硬化的進(jìn)程。Zhang Y等[39]也通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CpG島的甲基化可以顯著減少cccDNA的轉(zhuǎn)錄及隨后核心病毒DNA的復(fù)制；并且在基因P16啟動(dòng)子甲基化陽性的肝癌、肝硬化和慢性肝炎樣本中沒有發(fā)現(xiàn)P16蛋白的表達(dá)[40]。在外周血單核細(xì)胞中，XPO4基因的甲基化狀態(tài)往往是一種非入侵的生物標(biāo)志物，可用來預(yù)測(cè)乙型肝炎病毒感染的進(jìn)程。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，XPO4 mRNA在乙肝及其肝硬化患者中的表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組，而XPO4啟動(dòng)子的甲基化率在肝癌患者中較正常組則高出很多[41]。腫瘤抑制基因CDO1，通常會(huì)在發(fā)生癌變時(shí)被其啟動(dòng)子的甲基化作用所沉默，導(dǎo)致表達(dá)下降，Yang等[42]分別選取了慢乙肝、肝硬化、肝癌及健康人群的血清進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CDO1啟動(dòng)子甲基化作用肝硬化及肝癌患者中是明顯高于正常對(duì)照組的，且在疾病的晚期，其甲基化也顯著高于疾病早期。

2.2 乙肝后肝硬化“證”的分型與演化

2.2.1 中醫(yī)證候分型

在乙肝后肝硬化中醫(yī)證型分類研究中，李毅等[43]應(yīng)用系統(tǒng)聚類方法對(duì)276例乙肝后肝硬化患者的癥狀、體征進(jìn)行研究，認(rèn)為HBC基本中醫(yī)證型分為7類：濕熱內(nèi)蘊(yùn)證、肝腎陰虛證、肝郁脾虛證、脾虛濕盛證、脾腎陽虛證、血瘀證、氣（陽）虛證。同時(shí)，李毅等[44]還運(yùn)用卡方檢驗(yàn)方法對(duì)近30年來國(guó)內(nèi)公開報(bào)道的肝硬化辨證分型文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，所得結(jié)論也與應(yīng)用系統(tǒng)聚類方法獲得的結(jié)果十分接近。來麗群等[45]發(fā)現(xiàn)TGF-β1、肝纖維化指標(biāo)及肝功能分級(jí)與中醫(yī)辨證分型密切相關(guān)，并認(rèn)為TGF-β1、肝纖維化指標(biāo)可以作為HBC的中醫(yī)辨證中證型的量化指標(biāo)。龔向京等[46]發(fā)現(xiàn)凋亡相關(guān)蛋白TFAR19的表達(dá)水平與HBC臨床證候分型密切相關(guān)。乙肝后肝硬化患者血清TFAR19的表達(dá)水平從實(shí)證到虛證過程中呈現(xiàn)由高到低的趨勢(shì)，且在偏實(shí)、虛實(shí)夾雜、偏虛的不同證型之間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但TFAR19表達(dá)在瘀血內(nèi)結(jié)證型的不同嚴(yán)重程度患者之間無顯著差異，提示該階段有可能是乙肝后肝硬化治療的重要節(jié)點(diǎn)。楊新莉等[47，48]對(duì)中醫(yī)體質(zhì)類型與乙肝后肝硬化預(yù)后相關(guān)性進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，陰虛質(zhì)和濕熱質(zhì)是乙肝后肝硬化患者的主要體質(zhì)類型，其中陰虛質(zhì)病情最重，預(yù)后最差。

2.2.2 中醫(yī)證候演化

辨證論治是中醫(yī)診治乙肝后肝硬化的主要特色。臨床上乙肝后肝硬化的變證、并證繁多，證型復(fù)雜。《內(nèi)經(jīng)》曰：“正氣存內(nèi)，邪不可干；邪之所湊，其氣必虛”。機(jī)體發(fā)病，多是由于“兩虛相得，外內(nèi)合邪”。外邪侵襲人體，必然引起體內(nèi)邪正交爭(zhēng)，而正邪的勝負(fù)變化[49]，最終會(huì)導(dǎo)致如實(shí)證、虛證等不同證候間的動(dòng)態(tài)演變。有研究表明，通過中醫(yī)的辨證治療，可有效降低慢乙肝患者肝硬化的發(fā)生率或是延長(zhǎng)其發(fā)展成為肝硬化的病程時(shí)間[50]。因此，通過辨證分析乙肝后肝硬化的病證關(guān)系，有利于對(duì)不同“證”的患者設(shè)計(jì)個(gè)體化的“病”的治療方式。

隨著乙肝后肝硬化患者病情進(jìn)展，機(jī)體的免疫狀態(tài)發(fā)生改變，中醫(yī)證型也隨之發(fā)生動(dòng)態(tài)變化[51]，早期由于濕熱疫毒侵犯肝膽、肝失疏泄、彌漫三焦，表現(xiàn)出肝膽濕熱證；中期邪毒留戀，困阻脾胃中焦，出現(xiàn)脾胃濕熱證；后期則因濕熱久羈，郁而化熱，氣血不足，可見肝腎陰虛證。單純虛證或單純實(shí)證減少，虛實(shí)夾雜證增多[52]，表明乙肝后肝硬化的證候在“病”的發(fā)展過程中會(huì)隨時(shí)間、空間的推移發(fā)生動(dòng)態(tài)演化，顯示了乙肝后肝硬化的復(fù)雜多變的病證關(guān)系。此外，乙肝后肝硬化患者體內(nèi)HBV病毒復(fù)制也與中醫(yī)證型的演變一定相關(guān)性，HBV-DNA在濕熱蘊(yùn)結(jié)證中復(fù)制最為活躍，之后隨著證型在“由實(shí)轉(zhuǎn)虛”的演化過程中，HBV復(fù)制逐漸趨于平緩，并在脾虛濕盛證及肝氣郁結(jié)證中復(fù)制量最低[53]。這種HBV-DNA復(fù)制的差異不僅反映了乙肝后肝硬化證候的演變趨勢(shì)，也為其辨證治療提供了依據(jù)。

3 乙肝后肝硬化“證”的物質(zhì)基礎(chǔ)

中醫(yī)病證在分子水平的物質(zhì)基礎(chǔ)可能是由相關(guān)的基因群或蛋白群體表達(dá)異常及特異代謝組分等共同形成[54]，這些分子的變化及其分子間的相互關(guān)系是研究中醫(yī)病證分子機(jī)制的前提。因此，證候的生物物質(zhì)基礎(chǔ)研究就成為系統(tǒng)闡述乙肝后肝硬化“病”、“證”分子機(jī)制的基礎(chǔ)。

3.1 基于基因組學(xué)研究的證候物質(zhì)基礎(chǔ)

基因表達(dá)譜研究顯示，乙肝后肝硬化實(shí)證主要涉及脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)、免疫與炎癥反應(yīng)及氨基酸代謝，虛證主要涉及過氧化物酶活性、干細(xì)胞維持等功能，并參與色氨酸代謝、細(xì)胞周期磷酸化調(diào)節(jié)等信號(hào)通路[55]。在對(duì)慢乙肝及乙肝后肝硬化“同病異證”、“異病同證”分子機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)[55]，細(xì)胞膜G蛋白受體信號(hào)通路相關(guān)基因在慢乙肝兩種證型均表達(dá)下調(diào)，但在乙肝后肝硬化兩種證型中則顯示既有下調(diào)又有上調(diào)的狀態(tài)。進(jìn)一步對(duì)在慢乙肝及乙肝后肝硬化中共表達(dá)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究發(fā)現(xiàn)，共表達(dá)基因與兩種病的肝膽濕熱證均呈低相關(guān)，而與肝郁脾虛證均呈高相關(guān)，顯示這些基因可能作為證候判別的重要生物物質(zhì)基礎(chǔ)[56]。在探討乙肝后肝硬化中醫(yī)證候分類與基因表達(dá)之間關(guān)聯(lián)時(shí)發(fā)現(xiàn)，濕熱蘊(yùn)結(jié)證和肝郁脾虛證間的基因網(wǎng)絡(luò)表達(dá)模式差異較大[15]。此外，姜在來等[57]通過對(duì)慢性乙型肝炎后肝硬化患者中白細(xì)胞介素10（Interleukin-10，IL-10）基因單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)乙肝后肝硬化患者的脾虛濕盛證與IL-10基因819位點(diǎn)C等位基因相關(guān)，而其TT基因型則可能是肝硬化患者形成肝氣郁結(jié)證的主要原因。而在乙肝后肝硬化肝氣郁結(jié)證患者中，與人體情緒調(diào)節(jié)相關(guān)的GNB3基因C825T位點(diǎn)的CC基因型、C等位基因被認(rèn)為可能是該證候的保護(hù)基因，而T等位基因可能是其易感基因[58]。

3.2 基于蛋白質(zhì)組學(xué)研究的證候物質(zhì)基礎(chǔ)

利用蛋白組技術(shù)，周迪等[59]對(duì)103例肝硬化患者、29例健康人群及29例慢乙肝患者的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)了典型肝硬化中醫(yī)證候群血清蛋白質(zhì)組的差異，并由此建立肝硬化各中醫(yī)證候血清蛋白質(zhì)診斷模型。Song Y N等[60]運(yùn)用SELDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)乙肝后肝硬化3種證型的血清蛋白進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)肝硬化患者肝膽濕熱證、肝郁脾虛證、肝腎陰虛證的血清蛋白表達(dá)譜具有特征性差異峰，且證候之間有明顯分離的趨勢(shì)。安海燕等[61]對(duì)乙肝后肝硬化的肝氣郁結(jié)證、肝腎陰虛證患者的血清蛋白組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)相關(guān)差異表達(dá)蛋白主要涉及機(jī)體代謝、免疫、凝血、內(nèi)分泌以及腫瘤細(xì)胞增殖代謝等多個(gè)方面。

3.3 基于代謝組學(xué)研究的證候物質(zhì)基礎(chǔ)

代謝組學(xué)一直是證候研究的重要方法之一，郭孜等[62]等對(duì)乙肝后肝硬化證候的尿代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，不同證型的肝硬化患者的尿代謝物均與健康人群存在較大差異，這些差異代謝物大多與能量代謝和氨基酸代謝等通路密切相關(guān)，其中在濕熱蘊(yùn)結(jié)證與肝腎陰虛證之間存在支鏈氨基酸的差異，顯示肝硬化患者不同證候間存在不同的尿代謝模式。楊永霞等[63]利用核磁共振技術(shù)對(duì)乙肝后肝硬化患者血清中代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，與對(duì)照組相比，患者血清中葡萄糖、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽和肌酸等的含量增高，低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、不飽和脂肪酸類和膽堿等水平下降。提示肝臟損傷引起糖酵解、脂質(zhì)代謝、三羧酸循環(huán)紊亂，進(jìn)而引起能量代謝異常。

此外，呼雪慶等[64]運(yùn)用全基因組甲基化芯片技術(shù)，進(jìn)行了乙肝后肝硬化典型證候生物學(xué)基礎(chǔ)觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照比較，濕熱內(nèi)蘊(yùn)證、脾虛濕盛證和肝腎陰虛證各有57、68和94個(gè)差異DNA甲基化位點(diǎn)。其中，HLA-DRB1和ADAMTS9、NUDT1和YES1、APOA5和PRKCZ等基因的差異DNA甲基化可能分別與濕熱內(nèi)蘊(yùn)證、脾虛濕盛證和肝腎陰虛證證候形成有關(guān)。研究提示DNA甲基化可能為乙肝后肝硬化證候分類的生物學(xué)依據(jù)之一。

4 展望

基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)以及表觀遺傳組學(xué)是研究中醫(yī)病證分子物質(zhì)基礎(chǔ)的主要內(nèi)容，其分子的動(dòng)態(tài)變化及其相互關(guān)系是研究中醫(yī)病證分子機(jī)制的重要切入點(diǎn)。疾病是受到基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)和表觀遺傳組學(xué)的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)“干擾”偏離常態(tài)而致，證候可能是疾病過程中基因、蛋白質(zhì)、代謝和表觀遺傳水平受到“干擾”失衡后所發(fā)生的一種階段性狀態(tài)變化[65]，基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和表觀遺傳學(xué)組學(xué)能夠說明可能發(fā)生的事件，而代謝組學(xué)則反映確實(shí)已經(jīng)發(fā)生了的事情。因此，通過這些分子水平的組學(xué)研究，可能區(qū)分同種不同個(gè)體之間的“病證”表型差異，揭示“同病異證”、“異病同證”的分子機(jī)制。

盡管迄今中醫(yī)病證的分子物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制研究取得一定進(jìn)展，但缺乏基因、蛋白質(zhì)、代謝水平和表觀遺傳水平各分子群之間相互關(guān)系的研究，尤其缺少基因、細(xì)胞、組織、器官和整體從低層次到高層次關(guān)聯(lián)研究，這可能是今后乙肝后肝硬化的病證關(guān)系的重要研究方向。

乙肝后肝硬化的病證關(guān)系十分復(fù)雜，盡管中醫(yī)對(duì)乙肝后肝硬化臨床辨證及對(duì)癥治療等已經(jīng)有了大量探索工作，但系統(tǒng)闡述其中醫(yī)病證關(guān)系機(jī)制依然是中醫(yī)藥治療乙肝后肝硬化的重要突破口。特別是隨著系統(tǒng)生物學(xué)及生物大數(shù)據(jù)的快速發(fā)展，精準(zhǔn)醫(yī)療已成為目前預(yù)防和治療疾病的一種新方法。由于中醫(yī)藥精準(zhǔn)醫(yī)療是以基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等技術(shù)為基礎(chǔ)，通過大樣本人群與特定疾病類型進(jìn)行生物標(biāo)志物的分析、鑒定、驗(yàn)證，從而精確尋找病證的致病原因及治療靶點(diǎn)等[66]。因此，以病證結(jié)合為基礎(chǔ)實(shí)現(xiàn)對(duì)乙肝后肝硬化患者進(jìn)行個(gè)性化精準(zhǔn)治療必然越來越得到人們的認(rèn)同和應(yīng)用，從在提高乙肝后肝硬化診治效率及預(yù)防等方面產(chǎn)生重要的作用。

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A Study on the Biological Substances of Traditional Chinese Medicine (TCM) Syndrome in Hepatitis B-Caused Cirrhosis

Liu Yamin, Shi Yulin, Chen Jian, Tang Chenchen, Su Shibing, Chen Qilong
(Research Center for TCM Complexity System, Shanghai University of TCM, Shanghai 201203, China)

Hepatitis B-caused cirrhosis (HBC) is a common pathological consequence of chronic hepatitis B at its final stage， which therapeutic efficacy has been challenging in its clinical treatment incredibly. Among the treatments of HBC traditional Chinese medicine (TCM) worked a special therapeutic efficacy. In the past decades，TCM forged the prospect of many chronic disease treatments. However， because of the indistinct relationship between “disease” and “syndrome”， TCM still encountered heaps of challenges in the treatment of HBC. In this study， underlying to the “disease” and “TCM syndrome” of HBC， we summarized the molecular mechanism of “disease” and the biological substances related to “TCM syndrome” from the aspects of genes， proteins， and metabolic and epigenetic levels， respectively. The application and prospects of the personalized TCM treatment of HBC was synopsized based on “disease-TCM syndrome” and TCM precision medicine， for the provision of a theoretical reference for the development of TCM precision treatment for HBC.

Traditional Chinese medicine， Hepatitis B-caused cirrhosis， disease-TCM syndrome， biological substances

10.11842/wst.2016.09.011

R2-031

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2016-04-18

修回日期：2016-06-13

＊ 國(guó)家自然科學(xué)基金委面上項(xiàng)目（81473443）：基于動(dòng)態(tài)生物網(wǎng)絡(luò)的慢性乙型肝炎典型證候病證關(guān)系分子機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：陳啟龍；上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（14ZR1438800）：基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)的慢性乙型肝炎“同病異證”分子機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：陳啟龍。

＊＊ 通訊作者：陳啟龍，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中醫(yī)系統(tǒng)生物學(xué)及病證機(jī)制。