李天立鄭 麗徐明波

（1.吉林省通榆縣動(dòng)物檢疫站，吉林通榆 137200；2.吉林省通榆縣新華鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，吉林通榆 137200）

豬丹毒的實(shí)驗(yàn)室診斷及防制

李天立1鄭 麗2徐明波2

（1.吉林省通榆縣動(dòng)物檢疫站，吉林通榆 137200；2.吉林省通榆縣新華鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，吉林通榆 137200）

豬丹毒是由紅斑丹毒絲菌感染引起的豬的一種急性熱性傳染病。該傳染病廣泛流行于全世界所有養(yǎng)豬國家，我國也存在。

豬丹毒；防制；診斷

1 病原特征

豬丹毒的病原體為紅斑丹毒菌絲，習(xí)慣上又稱為豬丹毒桿菌，是一種革蘭氏染色陽性的纖細(xì)的小桿菌。本菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h，在45°折射光下用實(shí)體顯微鏡觀察生長的菌落，有光滑型、粗糙型和介于兩者之間的中間型之分。光滑型菌落表面光滑細(xì)致，菌落較小，邊緣整齊，有微藍(lán)色虹光；粗糙型，菌落較大，表面粗糙，邊緣不整，呈土黃色。中間型菌落呈金黃色，毒力介于光滑型和粗糙型之間。

2 病理性特征

豬感染紅斑丹毒菌絲的特征性病理變化為急性型的敗血癥全身變化，亞急性型的特征性疹塊變化及慢性型關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎和皮膚壞死等。

3 病原學(xué)診斷

病原學(xué)檢查是診斷豬丹毒較為可靠的方法，可用于病豬的生前和死后檢查。

3.1 病料的采集及處理

無菌采取發(fā)病豬的耳靜脈血和切開疹塊擠壓出的血液或滲出液，或者病死豬的心血、肝、脾、腎及淋巴結(jié)，慢性病例的心瓣膜增生部和關(guān)節(jié)液，作為病原檢查的材料，可現(xiàn)地涂片或?qū)⒉×嫌诒恐兴偷綄?shí)驗(yàn)室做細(xì)菌學(xué)檢查。

3.2 細(xì)菌學(xué)檢查

涂片鏡檢：制成的涂片，用瑞特氏或革蘭氏染色法染色，鏡檢。紅斑丹毒絲菌是一種纖細(xì)的革蘭氏陽性小桿菌，菌體平直或稍彎，陳舊的培養(yǎng)物可出現(xiàn)革蘭氏染色陰性。在血涂片上，可見到散在于紅細(xì)胞之間的菌體，有的出現(xiàn)叢集，還能見到被白細(xì)胞吞噬的現(xiàn)象。在臟器的抹片中，菌體常單獨(dú)、成對或叢狀排列。在瓣膜增生的纖維組織和關(guān)節(jié)液涂片中，見到的紅斑丹毒絲菌呈長絲狀，構(gòu)成絲狀菌團(tuán)。本菌所表現(xiàn)的絲狀形態(tài)與霉菌不同，不分枝。

3.3 細(xì)菌分離與鑒定

（1）培養(yǎng)檢查：將上述病料接種于pH 7.6～7.8含有5%健康馬血清的馬丁肉湯培養(yǎng)液、馬丁瓊脂培養(yǎng)基或血液瓊脂培養(yǎng)基，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。紅斑丹毒絲菌在液體培養(yǎng)基中生長，使培養(yǎng)液變混濁，在4℃冰箱中放置2～3d后，在管底部有乳白色沉淀，輕輕將試管振動(dòng)，沉淀物似絮狀懸浮于液體中，有絲綢光澤。在馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，形成直徑約為0.8～1.0mm的透明呈露滴狀的小菌落，繼續(xù)培養(yǎng)至4d以后，少數(shù)菌落發(fā)生變異，菌落邊緣呈現(xiàn)不規(guī)則狀。在血液瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h可形成直徑約為1～2mm邊緣整齊的菌落，稍帶藍(lán)色光澤，初代分離的菌落呈現(xiàn)輕度的α-溶血。（2）生化特性：將分離到的可疑菌落進(jìn)行純培養(yǎng)后，做進(jìn)一步的生化特性等檢查。明膠穿刺培養(yǎng)2～3d后，可沿穿刺線橫向生長，看似試管刷狀，不能液化明膠。接種含1%蛋白胨水和5%馬血清的各種糖類培養(yǎng)基，培養(yǎng)48～96h后觀察結(jié)果?？砂l(fā)酵葡萄糖、乳糖、半乳糖和果糖，產(chǎn)酸而不產(chǎn)氣；木糖和蜜二糖可能產(chǎn)酸；一般不發(fā)酵蜜三糖、蔗糖、海藻糖、松三糖、鼠李糖、山梨醇、甘露醇、肌醇、甘油、棉子糖、淀粉、菊糖、水楊苷等；能產(chǎn)生硫化氫，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不分解尿素，石蕊牛乳不發(fā)生變化，MR和VP試驗(yàn)陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)亦呈陰性。（3）動(dòng)物試驗(yàn)：當(dāng)細(xì)菌學(xué)檢查做診斷有困難時(shí)，可做動(dòng)物接種試驗(yàn)做出診斷。小鼠和鴿子對紅斑丹毒絲菌最敏感，而豚鼠頓感。取血液、脾、肝、腎等臟器或病變組織，用生理鹽水制成1：5或1：10的懸液，或用24h肉湯培養(yǎng)物做接種材料。分別以0.2ml經(jīng)皮下接種小鼠、以1ml的劑量經(jīng)胸肌接種鴿子，同時(shí)以1ml量皮下接種豚鼠作為對照。在接種后2～5d，如果被接種的小鼠和鴿子發(fā)生死亡，并從其心血和實(shí)質(zhì)臟器中檢出大量紅斑丹毒絲菌，而同樣接種的豚鼠則不死，也不反應(yīng)，則證明被檢材料為紅斑丹毒絲菌感染，可做出確診。

5 血清學(xué)診斷

用于豬丹毒診斷的血清學(xué)方法有多種，如平板、試管、微量凝集試驗(yàn)和生長凝集試驗(yàn)，間接血凝、血凝抑制試驗(yàn)、ELISA和免疫熒光試驗(yàn)，但現(xiàn)在還沒有一種有效的血清學(xué)試驗(yàn)可用于急性豬丹毒和區(qū)別野毒感染和疫苗免疫豬的診斷。這里只就生長凝集試驗(yàn)和免疫熒光試驗(yàn)作一概略介紹。

（1）生長凝集試驗(yàn) 用生長培養(yǎng)物作為凝集原的試驗(yàn)，其具體作法是在培養(yǎng)豬丹毒液體培養(yǎng)基中按1：40～1：80加入豬丹毒高免血清，再加入卡那霉素400μg/ml及萬古霉素25μg/ml（亦可用0.05%疊氮鈉及0.005%結(jié)晶紫代替）作為豬丹毒血清診斷液。取病豬耳尖血1滴或病死豬肝、脾、心血少許，接種其中，37℃培養(yǎng)14～24h。當(dāng)發(fā)現(xiàn)管底出現(xiàn)凝集顆粒或團(tuán)塊即為陽性反應(yīng)。

（2）免疫熒光試驗(yàn) 用異硫氰酸熒光黃標(biāo)記豬丹毒免疫球蛋白制成熒光抗本，可與病料涂片中的本菌發(fā)生特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察可見呈亮綠色的菌體。

6 防控措施

預(yù)防。疫苗接種：在高發(fā)區(qū)域及高發(fā)季節(jié)時(shí)，在肉豬斷奶后接種豬丹毒弱毒凍干苗或滅活苗，間隔一個(gè)月再接種一次。加強(qiáng)飲水消毒和管理，防止病從口入，特別是使用自然水和淺表水的養(yǎng)殖戶，以及喀斯特地貌的區(qū)域也要注意水源的消毒，包括沖欄用水。注意飼料的清潔和衛(wèi)生，確保飼料無丹毒污染，平時(shí)盡量不用濕料。加強(qiáng)舍內(nèi)衛(wèi)生的清理，減少?zèng)_欄，做好防暑降溫工作，避免出現(xiàn)高溫高濕。加強(qiáng)豬舍周邊雜草及雜物的清理以及消毒，做好滅蠅滅蚊工作，減少吸血昆蟲的傳播。注意病豬和病死豬的處理，防止傳播病原。高危地區(qū)適當(dāng)增加青霉素類藥物的保健。提高警惕，平時(shí)仔細(xì)巡欄，及時(shí)發(fā)現(xiàn)及時(shí)處理。對豬場的種豬或養(yǎng)戶中大豬突然出現(xiàn)發(fā)燒、減料等癥狀的，可直接肌注青霉素400萬單位/頭做治療性診斷。

治療。首選治療藥物為青霉素，藥效快。如果發(fā)病豬為急性型，應(yīng)采用短效青霉素大劑量注射，400～600萬單位/頭（即3～4支/頭），每日注射兩次，持續(xù)四天。如非急性發(fā)病，可采用注射長效青霉素，兩天一次，連續(xù)三次，豬群可全群用1000～1200PPM阿莫西林飲水或拌料。四環(huán)素對本病也有一定的效果，500ppm的劑量拌料可用于預(yù)防保健。

［1］ 王曉虎，范秀波，袁寶.豬丹毒的診斷及防制［J］.吉林畜牧獸醫(yī)，2006，27（11）：36-37.