張哲明

（黑龍江省佳木斯市富錦市頭林鎮(zhèn)政府，黑龍江佳木斯 156104）

談?wù)劔F醫(yī)學(xué)中的常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)以及與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的診斷技術(shù)

張哲明

（黑龍江省佳木斯市富錦市頭林鎮(zhèn)政府，黑龍江佳木斯 156104）

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，利用獸醫(yī)學(xué)中的常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)以及與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合技術(shù)，這些結(jié)合技術(shù)具有簡單、快速、精確率高，綜合判斷可根據(jù)自身的情況選擇適合的特點。本文簡單概述了血清學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)，分析了二者的相關(guān)性，闡述了獸醫(yī)學(xué)中的常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)以及與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的診斷技術(shù)。

常規(guī)血清；分子生物學(xué)；獸醫(yī)學(xué)

侵襲性感染是導(dǎo)致畜禽發(fā)病和死亡的重要原因，過去常規(guī)的診斷方法難以滿足診斷需要，因此，一些發(fā)展敏感性、特異性高的早期快速診斷方法已成為侵襲性畜牧感染診斷研究領(lǐng)域的熱點和難點。由于各種真菌和病毒的敏感性和特異性，單純的采用一種方法均有一定程度的局限性，聯(lián)合常規(guī)血清學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)可以取得互補效果，能使檢測的敏感性達到90%。近年來，血清學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合用于獸醫(yī)學(xué)中的診斷研究取得一定的進展，為畜牧疾病的診斷帶來希望。

1 常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)

1.1 常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)

該技術(shù)是利用特異性抗原抗體反應(yīng)，檢測病原微生物并簡化了病原微生物的鑒定步驟，在免疫學(xué)領(lǐng)域利用該技術(shù)，對于檢測重要經(jīng)濟類中可遺傳的海綿狀腦病發(fā)揮重要作用。如：熒光抗體技術(shù)是在顯微鏡下檢查呈現(xiàn)熒光的特異性抗原復(fù)合物及其存在部位。因此，熒光抗體免疫技術(shù)在畜牧養(yǎng)殖病原的檢測上得到了一定的應(yīng)用；酶免疫技術(shù)，酶免疫技術(shù)對抗原、抗體以及原抗體復(fù)合物可以定位，因此，該技術(shù)在水產(chǎn)動物病原檢測中也得到了一定應(yīng)用。

1.2 分子生物學(xué)技術(shù)

分子生物學(xué)技術(shù)對環(huán)境中病原進行檢測發(fā)展非常迅速，尤其是DNA分離技術(shù)的提高、PCR技術(shù)的日益完善，核酸雜交技術(shù)核酸雜交是利用特異性標記的DNA或RNA 作為指示探針，使其進行雜交，以準確確定宿主是否攜帶有某種病原體；或者直接對病原的感染途徑進行分析。

2 獸醫(yī)學(xué)中常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)的相關(guān)性

常規(guī)血清檢測通常用來診斷某些常規(guī)方法難以診斷的地方性機會性真菌感染，如芽生菌病、球孢子菌病、組織胞漿菌病的流行病學(xué)調(diào)查，具有較高的敏感性和特異性。這種方法抗體檢測的特異性較差，不能區(qū)分是體內(nèi)定植還是感染；其次難以產(chǎn)生足夠量的抗體，易發(fā)生假陰性。而分子生物學(xué)方法的發(fā)展為早期快速診斷侵襲性真菌感染提供可能性。二者聯(lián)合聯(lián)合應(yīng)用能高效地提取出18種常見動物真菌的D N A。故應(yīng)用得最廣泛。如：PCR相關(guān)技術(shù)用于早期快速診斷侵襲性念珠菌病、曲霉病和隱球菌病已顯示出較高的應(yīng)用價值，但這些方法在檢測過程中易出現(xiàn)假陽性和假陰性，需要加強標本收集和處理中的防污染措施，同時對PCR技術(shù)操作過程和方法進行改進，可有效提高PCR用于臨床侵襲性真菌感染早期診斷的價值。

3 獸醫(yī)學(xué)中的常規(guī)血清學(xué)診斷技術(shù)以及與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的診斷技術(shù)

3.1 在狂犬病毒野毒株與基因缺失疫苗株的PCR檢測

常規(guī)血清檢測通常用來檢測狂犬病毒中的芽生菌病、球孢子菌病，具有較高的敏感性和特異性，聯(lián)合常規(guī)PCR方法借助儀器和DN A聚合酶體外大量擴增部分或全部目的片段，該法可從PRV Martha—K61疫苗株僅擴增出一條237bp的片段，通過優(yōu)化反應(yīng)條件建立了可區(qū)分豬偽，具有高特異性。

3.2 對DNA的檢測

PCR技術(shù)可以在短時間內(nèi)大量復(fù)制出原來很少的DNA。其具有靈敏、特異、簡便、快速等優(yōu)點，可以細胞中擴增出足量的DNA供分析診斷等。其中的定量PCR 技術(shù)逐漸提高了檢測的敏感性和特異性，常規(guī)血清檢測技術(shù)是一種良好的檢測HBV-DNA的方法，可用凝膠電泳進行分離后與一系列已知分子量進行比較，廣泛應(yīng)用于臨床基因診斷。

3.3 在臨床和科研的應(yīng)用

在畜群中，各個體基因的核苷酸序列存在于動物的基因組中，某一致病基因就可以用這一多態(tài)性片段來判斷畜群或幼畜是否攜帶有致病基因?；蚨鄳B(tài)性會影響對藥物的反應(yīng)和用藥效果，因而有人提出 “個體化”用藥。其中的單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析是一種簡單、有效、快捷、廉價的檢測非常少量的基因組DNA或cDNA突變的技術(shù)。根據(jù)顯示的條帶即可判斷所測DNA鏈是否有變異。DNA序列測定取代了何種核苷酸，檢測時采用分子雜交手段，用激光共聚焦顯微掃描儀檢測熒光信號即可獲得檢測結(jié)果；熒光原位雜交染色體分析，其是一種在染色體上進行基因定位的技術(shù)，不僅可用于基因在染色體上定位的研究，而且還可以對白血病的實驗室診斷。

分子生物學(xué)檢測技術(shù)有著常規(guī)診斷方法不能比擬的優(yōu)越性，具有能夠區(qū)別細菌和病毒的疫苗株和野毒株，甚至可以監(jiān)測病原體的變異和漂移，但是在短時間內(nèi)這些診斷新技術(shù)難以真正達到推廣應(yīng)用，但對于重大疫情的及時預(yù)報和準確定性都是不可或缺的。

總之，血清學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)等非傳統(tǒng)方法用于畜牧學(xué)的真菌感染診斷已經(jīng)取得較大的進展，但其操作程序的標準化方面需要取得一致，聯(lián)合應(yīng)用血清學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)等非傳統(tǒng)方法有助提高畜禽診斷的水平，為豬偽狂犬病毒病的診斷、分子流行病學(xué)調(diào)查和防控提供了技術(shù)保障。

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