韓旭陽(yáng) 曾祖平 彭 冰 王 宏 張 蒼（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京市中醫(yī)研究所，北京，100010）

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UPLC／Q-TOF-MS 方法測(cè)定黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ含量并研究水解對(duì)黃芪皂苷類(lèi)成分的影響

韓旭陽(yáng) 曾祖平 彭 冰 王 宏 張 蒼
（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京市中醫(yī)研究所，北京，100010）

摘要本實(shí)驗(yàn)采用UPLC／Q-TOF-MS方法結(jié)合多變量統(tǒng)計(jì)分析（PCA、OPLS-DA），分析不同批次黃芪飲片堿洗前后黃芪皂苷類(lèi)成分變化趨勢(shì)及原因。并對(duì)黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ進(jìn)行含量測(cè)定。為以黃芪皂苷類(lèi)成分作為指標(biāo)成分進(jìn)行黃芪飲片及含黃芪中成藥質(zhì)量研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)采用ACQUITY UPLC C18色譜柱以乙腈-甲酸（1 mL／L）水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0. 45 mL／min，柱溫40℃。使用ESI電離源在正、負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，應(yīng)用Masslynx 4. 1質(zhì)譜工作站軟件進(jìn)行分多變量統(tǒng)計(jì)分析（PCA、OPLS-DA）。明確了黃芪飲片供試品制備過(guò)程氨水洗滌步驟能夠使黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ水解脫乙?；D(zhuǎn)化為黃芪皂苷Ⅳ。同時(shí)應(yīng)用UPLC／Q-TOF-MS方法測(cè)定了黃芪飲片中黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ含量，該方法簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性較好，可用于黃芪飲片中該三個(gè)成分的含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)為以黃芪皂苷類(lèi)成分作為指標(biāo)成分進(jìn)行黃芪飲片及含黃芪中成藥質(zhì)量研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞黃芪；堿洗；UPLC／Q-TOF-MS黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ

UPLC／Q-TOF-MS-Based Chemical Profiling Approach in Studying the Effects of Amic Solution Hydrolysis on Extraction of Radix Astragali

Han Xuyang，Peng Bing，Wang Hong，Zhang Cang，Zeng Zuping
（Beijing Institute of Traditional Chinese Medicine，Beijing Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Capital Medical University，Beijing 100010，China）

Abstract In this study，UPLC／Q-TOF-MS combined with multivariate statistical analysis（PCA，OPLS-DA）were used to investigate the effects of amic solution hydrolysis to extract of Radix astragalus . The analyses revealed that astragalosideⅣis formed during sample preparation from acylated astragalosides like astragaloside I and astragaloside II when using amic solution to deal with the extract. Simultaneously，UPLC／Q-TOF-MS were used to determine the content of astragalosideⅠ，Ⅱ，Ⅳof Radix astragali. This method could evaluate the quality of Radix Astragali effectively，and it is simple，sensitive and reliable.

Key Words Radix astragali；Amic solution hydrolysis；UPLC／Q-TOF-MS astragalosideⅠ，Ⅱ，Ⅳ

黃芪，又稱(chēng)黃耆，李時(shí)珍曰：“耆，長(zhǎng)也。黃耆色黃，為補(bǔ)藥之長(zhǎng)，故名?！保?］其藥性甘溫，入脾肺經(jīng)。功能補(bǔ)氣升陽(yáng)，益衛(wèi)固表，利水消腫，托瘡生肌，享有“補(bǔ)氣之長(zhǎng)”“瘡家圣藥”以及“治療氣虛水腫尿少之要藥”等美稱(chēng)。既善補(bǔ)脾肺之氣，升舉陽(yáng)氣，用于脾肺氣虛諸證。又能托毒生肌，善治氣虛津虧之瘡癰膿成不潰等?，F(xiàn)代研究表明黃芪煎劑和黃芪多糖能促進(jìn)DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成，提高血漿和組織中cAMP和cGMP含量、增強(qiáng)免疫功能。有保肝、改善腎功能、利尿、改善血流變性，促進(jìn)造血功能、抗衰老、抗病毒、抗腫瘤等作用［2］。黃芪的主要活性成分為皂苷及黃酮類(lèi)等。中國(guó)藥典收錄黃芪為豆科多年生草本蒙古黃芪Astragalus menbranaceus（Fisch）Bge. var. mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalus menbranaceus（Fisch）Bge.的干燥根［3］。并應(yīng)用HPLC-ELSD法對(duì)黃芪藥材及飲片的黃芪甲苷、毛蕊花異黃酮葡萄糖苷進(jìn)行了含量測(cè)定。但由于黃芪甲苷含量較低，多數(shù)文獻(xiàn)在測(cè)定黃芪中黃芪甲苷含量時(shí)供試品處理過(guò)程較為復(fù)雜。

超高效液相色譜是近年發(fā)展起來(lái)的分離技術(shù)，具有超高的分離度、超高的靈敏度、超高壓力等特點(diǎn)，在中藥甚至復(fù)方等復(fù)雜體系的分析與分離上具有明顯的優(yōu)勢(shì)。四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（Q-TOFMS）是高分辨質(zhì)譜，能夠?qū)arker進(jìn)行定性與定量分析，其顯著特點(diǎn)是高選擇性、高靈敏度，不僅能得到較高質(zhì)量的一級(jí)至多級(jí)質(zhì)譜圖且精確化合物質(zhì)核比到小數(shù)點(diǎn)后四位。因此，超高效液相色譜與飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC／Q-TOF-MS）已成為目前中藥復(fù)雜體系中活性成分的快速分離和鑒定的有力手段［4-5］。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用超高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合多變量統(tǒng)計(jì)分析如主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法（OPLS-DA）探討黃芪飲片供試品溶液堿洗前后黃芪皂苷類(lèi)成分含量的變化趨勢(shì)及原因。同時(shí)對(duì)黃芪飲片中黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ進(jìn)行含量測(cè)定，該方法簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好。本實(shí)驗(yàn)為以黃芪皂苷類(lèi)成分作為指標(biāo)成分對(duì)黃芪飲片進(jìn)行質(zhì)量控制研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　資料與方法

1. 1 一般資料 ACQUITY UIPLC系統(tǒng)（Waters公司）；Xevo G2 Q-TOF質(zhì)譜儀（Waters公司），裝有Look-spray接口；離子源電噴霧（ESI）；Masslynx 4. 1軟件（Waters公司）；XS205專(zhuān)業(yè)型分析天平-超越系列（Mettler Toledo）；MilliQ水純化系統(tǒng)（Millipore）。

1. 2 實(shí)驗(yàn)試劑 甲醇、乙腈均為L(zhǎng)C-MS級(jí)，購(gòu)于美國(guó)Themo Fisher公司；甲酸購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；水為自制超純水。

1. 3 受試藥物 黃芪飲片均由實(shí)驗(yàn)室購(gòu)自北京、山西、天津、江蘇等地，經(jīng)北京市中醫(yī)研究所中藥室何薇主任藥師鑒定均豆科多年生草本蒙古黃芪Astragalus menbranaceus（Fisch）Bge. var. mongholicus （Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalus menbranaceus （Fisch）Bge.的干燥根。對(duì)照品黃芪皂苷Ⅳ（黃芪甲苷）（110781-200613）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ購(gòu)自上海同田生物科技有限公司（利用NMR等波譜技術(shù)鑒定了化學(xué)結(jié)構(gòu)，經(jīng)HPLC面積歸一化法檢測(cè)，純度均大于98%）。

2　方法

2. 1 供試品溶液的制備 黃芪飲片粉碎成粉過(guò)50目篩，備用。

2. 2 制備未堿洗供試品溶液 稱(chēng)取黃芪粉末1. 000 g于250 mL具塞三角瓶中，加100 mL甲醇，50℃超聲提取40 min，靜置至室溫，過(guò)濾，殘?jiān)?00 mL甲醇，再次50℃超聲提取40 min，靜置至室溫，過(guò)濾，合并2次濾液，定容至200 mL容量瓶中。0. 22 μm微孔濾膜過(guò)濾，作為未堿洗供試品備用。

2. 3 制備堿洗供試品溶液 取以上未堿洗供試品溶液100 mL，水浴蒸干，殘?jiān)?5 mL水溶解，水飽和正丁醇振搖提取4次，25 mL／d，合并四次正丁醇萃取液，氨水洗滌2次，40 mL／次，靜置分層，氨水層棄去，洗滌后的正丁醇層水浴蒸干，殘?jiān)?00 mL甲醇溶解定容0. 22 μm微孔濾膜過(guò)濾，作為堿洗供試品備用。

2. 4 制備對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品，加甲醇定容為濃度0. 022 6 mg／mL的溶液，作為及黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品溶液A備用，吸取一定量黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品溶液A，稀釋10倍制成濃度為0. 002 26 mg／mL的溶液，作為黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品溶液B備用；精密稱(chēng)取黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌?，加甲醇制成濃度?. 002 30 mg／mL的溶液，作為及黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤篈備用，吸取一定量黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤篈，稀釋2倍制成濃度為0. 001 15 mg／mL的溶液，作為黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤築備用；精密稱(chēng)取黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品，加甲醇制成濃度為0. 0098 mg／mL的溶液，作為及黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液A備用，吸取一定量黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液A，稀釋10倍制成濃度為0. 000 98 mg／mL的溶液，作為黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液B備用，吸取一定量黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液1，稀釋50倍制成濃度為0. 000 196 mg／mL的溶液，作為黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液C備用。

2. 5 色譜分析條件 ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2. 1 mm×100 mm，1. 7 μm）；柱溫40℃；流速0. 45 mL／min；進(jìn)樣量3 L；流動(dòng)相：（A）為乙腈，（B）為1 mL／L甲酸溶液，按以下條件進(jìn)行梯度洗脫：0-5 min：0～10%A，5～7. 5 min：10%A～100%A，7. 5～10 min：100%A～10%A，10～13 min：10%A。

2. 6 質(zhì)譜條件 ESI，分別在ESI＋、ESI-模式下掃描，Sampling Cone：40 V，Capilary：3. 0 kV和2. 5 kV，Desolvation temperatures：350℃，Source temperatures：100℃，Desolvation Gas Flow 800 L／h，Cone Gas Flow：50 L／h，質(zhì)量掃描范圍：m／z 50～1500，數(shù)據(jù)采集速率：0. 2 s／scan。采用質(zhì)量鎖定（Lock-mass）技術(shù)測(cè)定準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)，2 ng／L的亮氨酸-腦啡肽（LE，ESI＋：m／z 556. 2771，ESI-：m／z554. 2615）溶液為質(zhì)量鎖定溶液，其流速為10 μL／min，切換頻率為20 s／次。

表1黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ的在正負(fù)離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰

2. 7 線性關(guān)系考察 吸取黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品溶液1（0. 022 6 mg／mL）0. 75、1、1. 5 μL以及黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品溶液2（0. 002 26 mg／mL）1、2. 5、4 μL；黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤?（0. 002 30 mg／mL）2、3、4、5 μL以及黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤?（0. 001 15 mg／mL）0. 5、1. 5、3 μL；黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液3（0. 000 196 mg／mL）1、2、3 μL，黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液2 （0. 000 980 mg／mL）1. 5、3、5 μL黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液1（0. 009 80 mg／mL）0. 75、1、1. 5、2 μL分別應(yīng)用UPLC-QTOF／MS進(jìn)行檢測(cè)，獲得信號(hào)強(qiáng)度（及色譜峰峰面積），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。見(jiàn)下表。表明黃芪皂苷Ⅰ在0. 002 26 μg～0. 033 9 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。黃芪皂苷Ⅱ在0. 000 575 μg～0. 011 5 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。黃芪皂苷Ⅳ分別在0. 000 196 μg～0. 002 94 μg以及0. 002 94 μg～0. 019 6 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

表2　黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ的線性關(guān)系及范圍

2. 8 精密度試驗(yàn) 取同一樣品，按上述2. 1中供試品溶液制備方法，制備供試品溶液，按2. 5色譜及2. 6質(zhì)譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ的峰面積RSD%分別為2. 7%，1. 2%，1. 5%。

2. 9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品，按上述2. 1中供試品溶液制備方法，平行制備6份供試品溶液。按2. 5色譜2. 6質(zhì)譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ的峰面積RSD%分別為2. 4%，2. 6%，1. 8%。取同一樣品，按上述1. 2. 2中供試品溶液制備方法，平行制備6份供試品溶液。按2. 4色譜2. 5質(zhì)譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ的峰面積均為0；黃芪皂苷Ⅳ的峰面積RSD%2. 7%。

2. 10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品，按上述2. 1中供試品溶液制備方法，按2. 5色譜及2. 6質(zhì)譜條件在1，2，4，8，12，24 h分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ的峰面積RSD%分別為2. 6%，2. 9%，3. 1%。

2. 11 加樣回收率試驗(yàn) 取同一樣品，每份0. 500 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入黃芪皂苷Ⅰ對(duì)照品溶液A 12 mL、黃芪皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤篈 30 mL和黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品溶液A 0. 9 mL，按上述1. 2中供試品溶液制備方法，按2. 4色譜2. 5質(zhì)譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。計(jì)算回收率，見(jiàn)表3、表4。

表3　未堿洗供試品黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ加樣回收率結(jié)果

表4　堿洗供試品黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ加樣回收率結(jié)果

2. 12 樣品的含量測(cè)定 取8批黃芪樣品，按上述2. 1及2. 2中供試品溶液制備方法，制備供試品，按2. 5色譜及2. 6質(zhì)譜條件項(xiàng)下操作，測(cè)定3種成分的含量。

2. 13 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)預(yù)處理是采用Waters公司的Masslynx 4. 1軟件，通過(guò)導(dǎo)入離子峰并適當(dāng)調(diào)整積分參數(shù)的方式完成色譜峰的識(shí)別與峰匹配。兩種不同制備方法的供試品溶液樣品的分類(lèi)模式采用多變量的主成分分析法（PCA）以及偏最小二乘法（OPLSDA）進(jìn)行識(shí)別。

3　結(jié)果

3. 1 黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ的含量測(cè)定 在負(fù)離子模式下，調(diào)整適當(dāng)?shù)呐鲎材?，能夠在一?jí)質(zhì)譜圖中得到黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ穩(wěn)定的準(zhǔn)分子離子峰［M＋COOH］-，而正離子模式下以上3種化合物多以碎片離子形式存在（見(jiàn)圖2），因此選擇在負(fù)離子模式下對(duì)不同來(lái)源黃芪飲片堿洗前后供試品溶液中以上3種化合物進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果如下，見(jiàn)表6。

表5　飲片堿洗前后供試品溶液中黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ的含量

圖1　正、負(fù)離子模式下樣品總離子流圖

圖2　正、負(fù)離子模式下黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品一級(jí)質(zhì)譜圖

圖3　正、負(fù)離子模式下未堿洗供試品、堿洗供試品PCA得分圖

圖4　正、負(fù)離子模式下未堿洗供試品、堿洗供試品S-plot圖

圖5　正、負(fù)離子模式下黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ及黃芪皂苷Ⅳ在堿洗前后供試品中的量變趨勢(shì)圖

圖6　黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ結(jié)構(gòu)

4　討論

4. 1 黃芪飲片堿洗前后供試品PCA與OPLS-DA分析 采用Masslynx 4. 1軟件對(duì)正、負(fù)離子模式下不同來(lái)源黃芪飲片堿洗前與堿洗后的供試品色譜圖譜中的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分模式識(shí)別分析（PCA）。通過(guò)得分圖可以看出未堿洗供試品與堿洗供試品能夠明顯區(qū)分開(kāi)來(lái)，且正、負(fù)離子模式下分析結(jié)果一致（見(jiàn)圖3）。盡管來(lái)源的不同，黃芪的品質(zhì)有所差異，氨水洗滌對(duì)供試品的影響是較為明顯的，8批黃芪飲片的未堿洗供試品與堿洗供試品均能在第一主成分得到良好的區(qū)分。說(shuō)明氨水洗滌在很大程度上改變了黃芪飲片供試品中化學(xué)成分群。

為了進(jìn)一步挖掘2組供試品的變化，再對(duì)2組數(shù)據(jù)進(jìn)行偏最小二乘模式識(shí)別分析（OPLS-DA）。OPLS-DA分析的S-plot見(jiàn)（圖4）。圖上每個(gè)Marker代表一個(gè)變量，包含該點(diǎn)的保留時(shí)間、質(zhì)核比以及信號(hào)強(qiáng)度3方面信息。橫坐標(biāo)代表Marker對(duì)組間差異的貢獻(xiàn)程度（協(xié)方差）。縱坐標(biāo)代表Marker對(duì)組間差異的貢獻(xiàn)程度的可信度（可信度），均在-1～1之間取值。ESI＋及ESI-中-1方向均代表未堿洗供試品，1方向代表堿洗供試品。在S點(diǎn)集中離y軸越遠(yuǎn)的點(diǎn)對(duì)組間差異的貢獻(xiàn)越大，離x軸越遠(yuǎn)的點(diǎn)對(duì)組間差異貢獻(xiàn)的可信度越高。圖中可以清晰看出，S點(diǎn)集中，集中在原點(diǎn)以及Y軸的變量較少，說(shuō)明眾多變量在2組間存在較大差異。尤其遠(yuǎn)離原點(diǎn)的的變量對(duì)組間差異的貢獻(xiàn)度越高，可信度也越高。量變趨勢(shì)圖（圖5）集中了OPLS-DA分析中差異顯著的變量，即S-plot圖中遠(yuǎn)離原點(diǎn)的的變量。清晰顯示了堿洗步驟在顯著降低供試品中黃芪皂苷Ⅰ和黃芪皂苷Ⅱ含量的同時(shí)提高黃芪皂苷Ⅳ的含量。

4. 2 黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ在堿洗前后供試品中量變關(guān)系探究 黃芪皂苷為環(huán)菠蘿蜜烷型三萜皂苷，苷元多為環(huán)黃芪醇。黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ結(jié)構(gòu)相近，具有相同的苷元，都在苷元的3位連有一分子木糖，6位連有一分子葡萄糖。區(qū)別在于黃芪皂苷Ⅰ的木糖2，3位各有一個(gè)乙?；〈S芪皂苷Ⅱ的木糖2位有一個(gè)乙?；〈?，黃芪皂苷Ⅳ的木糖無(wú)取代基。乙酰基取代在堿性條件下不穩(wěn)定，容易水解脫酰基［6］。

堿洗供試品制備過(guò)程中，堿洗步驟能夠使黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ脫去酰基轉(zhuǎn)化為黃芪皂苷Ⅳ。含量測(cè)定結(jié)果顯示，堿洗供試品中黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ含量為0，黃芪皂苷Ⅳ含量與未堿洗供試品相比顯著增加近10倍（見(jiàn)表5）。說(shuō)明堿洗供試品黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ均已水解變構(gòu)，大部分轉(zhuǎn)化為黃芪皂苷Ⅳ。但是，經(jīng)比較，堿洗供試品中黃芪皂苷Ⅳ含量?jī)H占未堿洗供試品中黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ3種成分總和的60%～80%（見(jiàn)表5）。同時(shí)分析加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)表4），實(shí)測(cè)值以測(cè)得黃芪皂苷Ⅳ的含量為計(jì)，供試品所含被測(cè)成分含量以樣品中所含黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ的總量為計(jì)，加入對(duì)照品量以加入的黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ總量為計(jì)，計(jì)算加樣回收率，在43%～63%之間，RSD%值為17. 69%。表明復(fù)雜的供試品制備方法不可避免的增大了系統(tǒng)誤差，也影響方法的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性，進(jìn)而使測(cè)量值遠(yuǎn)離真實(shí)值。

綜上所述，堿洗步驟能夠使黃芪供試品中?；狞S芪皂苷如黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ脫去?；D(zhuǎn)化為黃芪皂苷Ⅳ，顯著增加黃芪皂苷Ⅳ的含量。但是該方法實(shí)驗(yàn)步驟較為繁瑣，系統(tǒng)誤差較大，測(cè)得黃芪皂苷Ⅳ含量不具代表性。

超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀是高分辨串聯(lián)質(zhì)譜，其顯著特點(diǎn)是高靈敏度、高選擇性，含量檢測(cè)限是紫外檢測(cè)器的千分之一。因此應(yīng)用UPLC／Q-TOF-MS技術(shù)，按照1. 2. 1供試品制備方法——未堿洗供試品制備方法，制備黃芪飲片供試品，進(jìn)行黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅳ的含量測(cè)定，能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)得該三種化合物在飲片中的含量。方法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好。

本實(shí)驗(yàn)希望能為以黃芪皂苷類(lèi)成分作為指標(biāo)成分進(jìn)行黃芪飲片（或含有黃芪的中成藥）質(zhì)量研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（2015 -05 -26收稿 責(zé)任編輯：張文婷）

中圖分類(lèi)號(hào)：R284. 1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10. 3969／j. issn. 1673 -7202. 2016. 03. 040

通信作者：曾祖平，女，碩士，主任藥師，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及新劑型研究，Tet：（010）52176919，E-mail：zzp600＠sohu. com

基金項(xiàng)目：北京市科委“十病十藥”研發(fā)（編號(hào)：Z141100002214015）