鄔秀娣，湯亞微，孫曉彤，王　冰，王苗苗，李　霞

(大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，遼寧大連 116044)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是體液和細(xì)胞免疫功能異常所造成的多器官受累的自身免疫性疾病，其主要特征為淋巴細(xì)胞異?；罨?，免疫調(diào)節(jié)功能紊亂及多種自身抗體產(chǎn)生[1]。其發(fā)病機(jī)制尚不明確，但大量研究表明，細(xì)胞因子在SLE發(fā)病過程中起著重要作用。

白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-1家族主要包括IL-α、IL-β、IL-Ra(receptor antagonist，受體拮抗劑)、IL-18、IL-36Ra、IL-36α、IL-37、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33，其中致炎性細(xì)胞因子有IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ，抑炎性細(xì)胞因子有IL-Ra、IL-36Ra、IL-37、IL-38。IL-34是一類新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，可促進(jìn)破骨細(xì)胞分化，也可促進(jìn)人全血細(xì)胞分泌IL- 6以及趨化因子[2]。本研究通過檢測SLE患者與正常對照者血清IL-1家族成員及IL-34水平，初步探討細(xì)胞因子異常分泌對SLE疾病的影響。

對象與方法

對象

選取2014年2月至8月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院及寧波市第二醫(yī)院就診的SLE患者，診斷均符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會(American College of Rheumatology，ACR)制定的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)[1]，排除感染、腫瘤及其他自身免疫性疾病。正常對照組均來自醫(yī)院體檢中心的健康人群，無風(fēng)濕病史和風(fēng)濕病家族史。

方法

所有受檢者晨起抽取靜脈血4 ml，離心后取上清，標(biāo)本放置-20 ℃保存待測。采用蛋白芯片AAH-CYT G1000試劑盒(美國Raybiotech公司)檢測SLE組及正常對照組血清IL-1家族成員水平，具體操作按說明書進(jìn)行。用激光掃描儀InnoScan300 Microarray Scanner(31390Carbonne-France)進(jìn)行信號掃描，并采用AAH-CYT-G6，AAH-CYT-G7數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清IL-34水平(美國Bio-Legend公司，試劑盒靈敏度為33.4 pg/ml)，酶標(biāo)分析儀為BioTek ELX-800。具體操作按說明書進(jìn)行。

統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié)　　果

一般資料

選取6例女性SLE患者均為初發(fā)或復(fù)發(fā)患者，年齡23～42歲，平均年齡(31.67±6.53)歲；所有患者近3個月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素劑量均≤10 mg/d，除2例患者使用硫酸羥氯喹0.2 g/d，余均未使用其他免疫抑制類藥物(表1)。同時選取6名女性正常對照組，年齡20～38歲，平均年齡(28.25±6.23)歲，進(jìn)行血清IL-1家族成員水平檢測，兩組年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。選取67例SLE患者，其中女61例，男6例；年齡14～52歲，平均年齡(35.1±10.6)歲；病程1～241個月，平均42.3個月。正常對照組86名，女78名，男8名，年齡20～57歲，平均年齡(39.8±13.2)歲；進(jìn)行血清IL-34水平的檢測，兩組年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。本研究得到大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院及寧波市第二醫(yī)院倫理委員會支持，所有參與者均簽訂知情同意書。

SLE組血清IL-1家族成員水平

利用蛋白芯片技術(shù)檢測6例SLE患者和6名正常對照者血清IL-1家族成員水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比，SLE組血清IL-18、IL-36β水平明顯增高，IL-36Ra水平降低，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)(表2，圖1)。

SLE組血清IL-34水平

采用ELISA方法測定67例SLE患者和86名正常對照者血清IL-34水平，結(jié)果顯示SLE組血清IL-34水平明顯高于正常對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義[(100.36±70.38) pg/mlvs.(41.90±6.89) pg/ml，t=6.774,P<0.000 1](圖2)。

表1　6例檢測IL-1家族細(xì)胞因子的SLE患者臨床資料Table 1　Baseline characteristics of the 6SLE patients with IL-1 family deteetion

SLE:系統(tǒng)性紅斑狼瘡； CRP:C反應(yīng)蛋白

表2　SLE組與正常對照組血清IL-1家族成員水平比較Table 2　Comparison of the serum IL-1 level between SLE group and control group　ml)

SLE:系統(tǒng)性紅斑狼瘡； *與正常對照組相比，P<0.05

圖2SLE組與正常對照組血清IL-34水平分析

Fig2Compavsion of the serum IL-34 level betwrrn SLE group and control group

SLE：系統(tǒng)性紅斑狼瘡;IL-34：白細(xì)胞介素-34

討　　論

細(xì)胞因子具有多種免疫調(diào)節(jié)功能，當(dāng)其分泌異常時，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能失調(diào)，誘發(fā)自身免疫性疾病。近年來大量研究表明，SLE發(fā)病過程中可能有復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)參與其中，很多細(xì)胞因子促進(jìn)自身反應(yīng)性T、B細(xì)胞活化、產(chǎn)生大量的自身抗體，使免疫穩(wěn)態(tài)遭到破壞，最終導(dǎo)致細(xì)胞和組織損傷[1]。

IL-1家族包括IL-1、IL-18和IL-36三個亞家族，IL-1α、IL-1β、IL-Ra是IL-1家族中最早發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子。IL-1α、IL-1β主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞分泌，對炎性部位的持續(xù)性細(xì)胞浸潤和誘導(dǎo)組織破壞起著直接的作用，是骨質(zhì)吸收和骨質(zhì)破壞的主要細(xì)胞因子[3]。IL-Ra是IL-1受體拮抗劑，主要由單核細(xì)胞產(chǎn)生，通過競爭性與IL-1受體結(jié)合抑制IL-1功能[4]。IL-18是IL-1家族另一細(xì)胞因子，主要由巨噬細(xì)胞、T、B淋巴細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生?？烧T導(dǎo)IFN-γ分泌，選擇性刺激Th1細(xì)胞的分化[5]。Novick等[6]發(fā)現(xiàn)，SLE患者血清結(jié)合IL-18和游離IL-18水平均升高；與本研究結(jié)果相一致。然而本研究沒有檢測到SLE患者血清IL-1α、IL-1β、IL-Ra水平變化。

IL-36是IL-1家族新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，包括IL-36α、IL-36β、IL-36γ，可由單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生。IL-36通過與其受體相互結(jié)合，促進(jìn)樹突狀細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞的活化及促炎因子的分泌等。Debets等[7]研究顯示，在銀屑病受損的皮膚中，IL-36α、IL-36β、IL-36γ mRNA表達(dá)增加；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)滑膜成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞均表達(dá)IL-36受體，IL-36β通過與IL-36受體結(jié)合誘導(dǎo)炎性分子產(chǎn)生，參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病[8]。本研究，發(fā)現(xiàn)SLE組血清IL-36β水平明顯增加，進(jìn)一步證實(shí)IL-36在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。IL-36Ra是IL-36受體拮抗劑，可由單核細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等產(chǎn)生，能夠與IL-36受體結(jié)合，抑制IL-36功能[9]。本試驗檢測到SLE組血清IL-36Ra水平下降，提示其在SLE中可能發(fā)揮抑炎作用。

IL-33、IL-37、IL-38是IL-1家族中另外三個細(xì)胞因子。IL-33表達(dá)于上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞，在炎癥因子刺激下表達(dá)增多[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-33能使肥大細(xì)胞表達(dá)IL-1、IL- 6、IL-11等炎性因子，促進(jìn)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠的滑膜炎癥[11]。IL-37主要由中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等表達(dá)，是一種具有抑制炎癥作用的細(xì)胞因子[12]。研究表明，SLE患者血清IL-37水平升高，IL-37作為炎癥反應(yīng)的抑制劑，可能通過負(fù)反饋機(jī)制抑制SLE患者炎癥的過度表達(dá)[13]。IL-38主要表達(dá)于B細(xì)胞，與IL-36Ra相似，通過特異性結(jié)合細(xì)胞表面特定的IL-36受體而抑制IL-17和IL-22的產(chǎn)生，從而在炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮抑制性作用[9]。然而，本試驗結(jié)果未顯示SLE患者血清IL-33、IL-37、IL-38這三種細(xì)胞因子水平的變化。

IL-34是2008年發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，主要表達(dá)于單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞[14]。IL-34能促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞增殖與分化，誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子和趨化因子表達(dá)，具有促炎、促進(jìn)破骨細(xì)胞形成以及神經(jīng)保護(hù)的作用[15-16]。有研究表明，RA患者滑膜成纖維細(xì)胞可表達(dá)IL-34，并與滑膜炎的嚴(yán)重程度相關(guān)，而TNF-α和IL-1β可通過NF-κB和JNK通路進(jìn)一步上調(diào)IL-34基因表達(dá)水平，提示IL-34在RA發(fā)病中起到一定的作用，并與免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，SLE組血清IL-34水平明顯升高，進(jìn)一步提示與免疫炎癥反應(yīng)有關(guān)。

綜上，本研究初步分析了SLE患者血清IL-1家族成員和IL-34的水平變化，但本研究存在不足：(1)由于用于IL-1家族細(xì)胞因子檢測的標(biāo)本數(shù)量較少，試驗數(shù)據(jù)有限，部分結(jié)果未測出差異或者與文獻(xiàn)不一致，今后需要大樣本數(shù)據(jù)的驗證。(2)用于檢測IL-34的SLE患者并非都是初發(fā)患者，患者病情變化和用藥情況可能會影響試驗結(jié)果，在后續(xù)研究中，應(yīng)詳細(xì)分析SLE血清IL-34水平與臨床和實(shí)驗室指標(biāo)的關(guān)系。另外，對這些細(xì)胞因子在SLE發(fā)病中的具體作用機(jī)制仍需更深入的研究與探討。

(本文圖1見插頁Ⅱ)

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