李 紅， 施嘉琛， 高文暉（北京市疾病預(yù)防控制中心， 北京 100013）

大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇直接測定與計算結(jié)果的比較

李 紅， 施嘉琛， 高文暉
（北京市疾病預(yù)防控制中心， 北京 100013）

目的 比較直接測定與公式計算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）結(jié)果是否存在差異。 方法 用直接一步法檢測大鼠血清中LDL-C； 根據(jù)Friedewald公式，通過總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量計算LDL-C，并將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。 結(jié)果 直接測定大鼠血清和公式計算LDL-C結(jié)果差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）， 兩種結(jié)果相關(guān)性良好（相關(guān)系數(shù)為0.976 0）。結(jié)論 在進(jìn)行相關(guān)動物實驗時，因血樣采集或?qū)嶒炇覚z測條件有限時，可使用Friedewald公式計算LDL-C。

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）； Friedewald公式計算法； 大鼠血清； 血脂

血脂常規(guī)檢測包括血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的測定。血脂測定結(jié)果的異常與人類健康息息相關(guān)，其中高TC血癥就是冠心病的危險因素之一，TG的升高表明體內(nèi)存在代謝異常，HDL-C水平與冠心病呈負(fù)相關(guān)，而LDL-C的異常更是造成體內(nèi)動脈硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素。

動脈粥樣硬化（AS）是指動脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的沉積，平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進(jìn)行性病理過程。AS是心腦血管系統(tǒng)中最常見的疾病，嚴(yán)重危害人類的健康。通過對實驗動物建立高血脂模型，進(jìn)行各種降脂研究來改善脂代謝異常［1-9］。提供準(zhǔn)確的血脂檢測數(shù)據(jù)是研究的基礎(chǔ)，在動物血樣采集、實驗室檢測條件以及項目經(jīng)費發(fā)生問題時，LDL-C的直接測定是否可以改為使用公式計算，本文主要是比較直接測定與公式計算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇結(jié)果是否存在差異提供支持?jǐn)?shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

全自動生化分析儀日立- 7600P模塊（日立高新技術(shù)有限公司， 日本）。

1.2 試劑、血脂復(fù)合校準(zhǔn)品和質(zhì)控血清

TC， 膽固醇氧化酶法； TG， 去游離甘油法； HDL-C 和LDL-C使用一步法，均使用雙試劑。血脂試劑、四項復(fù)合校準(zhǔn)品，以及質(zhì)控血清是由和光（和光純藥工業(yè)株式會社，日本）提供。血脂復(fù)合校準(zhǔn)品TC、TG、HDL-C和LDL-C使用計量單位mmol/L的濃度。

1.3 大鼠血樣

6～8 周齡清潔級Wistar大鼠70只（雌雄各半），由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供 ［SCXK-（軍）2012-0004］。戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈取血，室溫分離血清。

1.4 實驗方法

在日立7600生化分析儀P模塊上同時檢測70例大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C，樣品編號1、2放質(zhì)控血清，3～72編號為大鼠血樣，73、74號為質(zhì)控血清。打開通訊實時監(jiān)測將數(shù)據(jù)傳入實驗室信息管理系統(tǒng)。按照法定計量單位mmol/L，F(xiàn)riedewald公式計算法，LDL-C=TC-（HDL-C）-TG/ 2.2。在實驗室信息管理系統(tǒng)LIMS（Laboratory Information Management System，LIMS）設(shè)置計算項目直接計算LDL-C輸出結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計方法

實驗室信息管理系統(tǒng)輸出的所有實驗數(shù)據(jù)直接使用SPSS16.0軟件包進(jìn)行t檢驗和相關(guān)回歸分析統(tǒng)計處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清血脂檢測結(jié)果

TC=1.91±0.32 mmol/L， TG=0.62±0.16 mmol/L，HDL-C = 0.87±0.14 mmol/L，LDL-C = 0.77± 0.36 mmol/L。

2.2 計算結(jié)果

根據(jù)公式計算，大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇為0.761±0.311 mmol/L，與實測結(jié)果（0.77± 0.36 mmol/L）差別無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.356， P=0.179）。

2.3 測定值與計算值的相關(guān)性

大鼠血清LDL-C直接測定與公式計算的結(jié)果線性回歸方程y=0.854 4X+0.099 2，r2為0.954 6，相關(guān)系數(shù)r為0.976 0。

3 討論

大鼠血清LDL-C直接測定與公式計算兩種結(jié)果差別無統(tǒng)計學(xué)意義， 根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件的要求r≥0.975（或r2≥0.95）［10］，兩種結(jié)果有良好的相關(guān)性。這與相關(guān)文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致［11～14］。

血脂檢測中TC和TG有完整的參考系統(tǒng)、決定性方法和參考方法。TC和TG決定性方法都是用同位素稀釋-質(zhì)譜法； TC參考方法為正己烷抽提L-B反應(yīng)顯色法（ALBK法）； TG參考方法為二氯甲烷抽提，變色酸顯色法； TC常規(guī)方法為酶法（CODPAP法）； TG常規(guī)方法為酶法（GPO-PAP法）。HDL-C 和LDL-C沒有決定性方法，只有參考方法，參考方法是超速離心結(jié)合選擇性沉淀法［15］。LDL-C使用間接計算法，是Friedewald于1972年發(fā)明的一個經(jīng)驗式。運用時有一定條件， 空腹血清不含乳糜微粒， TG濃度在4.60 mmol/L以下， Ⅲ型高脂血癥除外。血清TG 含量2.26 mmol/L以下， 計算的LDL-C與其實測值符合為90%， TG在2.26～4.50 mmol/L時，符合率是72%，TG在4.50～6.80 mmol/L，符合率只有39%±10%［16］。大鼠血清TG含量通常比人血清含量（TG=0.62±0.16 mmol/L）低，正好在實際測定值與計算值符合率90%的組內(nèi)。大鼠血清LDL-C直接測定與公式計算兩種結(jié)果得到了相關(guān)性良好和差別無統(tǒng)計學(xué)意義結(jié)論。

對于檢測血脂標(biāo)本采集和處理，測定人血樣血脂時，在清晨空腹采血。因此建議采集大鼠血液時禁食采血。同時建議使用血清標(biāo)本進(jìn)行分析，肝素抗凝的血漿不影響血脂分析，EDTA抗凝血漿TC和TG含量比血清大約低3%［15］。血清密封4 ℃冰箱中可穩(wěn)定4 d，確保血脂分析前的質(zhì)量控制。

動物血樣不易采集，一方面是采血部位問題，另一方面是采血量。各實驗室采集大鼠標(biāo)本部位差異很大，采用斷頭、麻醉采集腹主動脈、眼內(nèi)眥動脈等。大鼠血樣采集部位的不同也會導(dǎo)致某些項目檢測結(jié)果的差異［17，18］，另外分析試劑和儀器也是保證質(zhì)量的關(guān)鍵［19，20］。日常工作中多使用常規(guī)方法檢測批量標(biāo)本，實驗中樣品編號1、2放質(zhì)控血清，3～72編號為大鼠血樣，73、74號為質(zhì)控血清，這樣的編號順序目的是用質(zhì)控血清監(jiān)控大鼠血樣全部檢測過程。在衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價活動中獲得合格的成績［21］，與衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所、美國疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的常規(guī)方法分析和參考物質(zhì)比對都獲得滿意結(jié)果［22］。某些動物實驗的實驗室不具有生化分析的檢測能力，可能使用手工或半自動分析設(shè)備。項目經(jīng)費緊張是另一可能遇到的困難，當(dāng)不能直接測定LDL-C時，在確保TC、TG、HDL-C檢測準(zhǔn)確的前提下，可用Friedewald公式計算低密度脂蛋白膽固醇。

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Q95-33

B

1674-5817（2016）01-0054-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.011

2015-06-23

李 紅（1968-）， 女， 主管檢驗師， 主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com