趙康濤， 陳冠敏，2， 林 蔚， 陳 潤， 黃宗銹， 林 健，2（. 福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 福建省疾病預(yù)防控制中心， 福州 35000；2. 福建醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院教學(xué)基地， 福州 350004）

·經(jīng)驗(yàn)交流·

輻照與高壓蒸汽滅菌飼料對(duì)SD大鼠妊娠及胎仔發(fā)育的影響

趙康濤1， 陳冠敏1，2， 林 蔚1， 陳 潤1， 黃宗銹1， 林 健1，2
（1. 福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 福建省疾病預(yù)防控制中心， 福州 350001；
2. 福建醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院教學(xué)基地， 福州 350004）

目的 了解不同滅菌處理飼料對(duì)SD大鼠妊娠及胎仔發(fā)育的影響。方法 離乳SD大鼠隨機(jī)分為輻照和高壓蒸汽滅菌飼料組，飼養(yǎng)2個(gè)月后按1∶1比例雌雄同籠交配，分別于0 d、7 d、12 d、16 d、20 d稱妊娠鼠體質(zhì)量，并于20 d時(shí)采血后處死妊娠鼠，解剖，取完整子宮稱重后取出胎仔， 對(duì)胎仔稱重， 量身長、尾長，觀察胎仔外觀、內(nèi)臟及骨骼發(fā)育； 雄性大鼠于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱體質(zhì)量，取睪丸及附睪稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，測(cè)血清睪丸酮含量。結(jié)果 兩種飼料對(duì)妊娠鼠各階段體質(zhì)量無明顯影響（P＞0.05），仔鼠活胎率， 身長、尾長無差異（P＞0.05）， 骨骼及內(nèi)臟發(fā)育亦無明顯差異（P＞0.05）； 輻照飼料組交配成功率高于高壓飼料組（P＜0.05）， 但兩組雄鼠睪酮含量無明顯差別（P＞0.05）， 雄性大鼠睪丸及附睪系數(shù)亦無差異（P＞0.05）。結(jié)論 兩種不同滅菌處理飼料對(duì)妊娠大鼠及其胎仔發(fā)育影響無明顯差異，均無明顯致畸作用，但對(duì)親代大鼠早期性興奮影響可能有區(qū)別。

SD大鼠； 高壓滅菌飼料； 輻照滅菌飼料； 子代發(fā)育

隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展， 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的要求也不斷提高， 尤其是SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的廣泛使用， 對(duì)相關(guān)的飼料、墊料， 飲水等也提出了更高的質(zhì)量要求。清潔級(jí)以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料均需消毒滅菌后方可用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼喂。目前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料的消毒多采取高溫高壓滅菌法與60Co輻照滅菌法。對(duì)于兩種滅菌法的優(yōu)劣， 雖然有一些相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道［1，2］， 但研究范圍及角度有限， 多集中于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)繁殖性能和飼料利用效價(jià)方面。 本試驗(yàn)采用兩種不同滅菌處理后的飼料分別飼喂離乳SD大鼠， 至大鼠性成熟交配、妊娠， 觀察其對(duì)母鼠和胎仔發(fā)育的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及飼養(yǎng)環(huán)境

SPF級(jí)離乳SD大鼠購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司［SCXK（滬）2012-0001］，體質(zhì)量45～55 g，雌性65只，雄性40只，飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室［SYXK（閩）2012-0008］。

1.2 儀器和試劑

儀器: G&G電子天平（T1000）， 感量 0.01 g， 桂陸電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺（0～200 mm），BIO-RAD Model 680型酶標(biāo)儀。試劑: 茜素紅染料、甘油、甲醛、冰醋酸、苦味酸均購自國藥集團(tuán)， 為分析純； 大鼠雌激素（E）酶聯(lián)免疫分析試劑盒， 大鼠睪酮（T）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 鼠用生長繁殖飼料及滅菌方法

購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司［滬飼審（2014）04001］。高壓蒸汽滅菌方法，經(jīng)115 ℃、30 min高壓蒸汽滅菌，輻照滅菌方法: 經(jīng)25 kGy60Co輻照。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

離乳SD大鼠檢疫間適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，隨機(jī)分為輻照飼料組（n=32）和高壓飼料組（n=33），苦味酸標(biāo)記，分別以相應(yīng)飼料飼養(yǎng)2個(gè)月后，按雌雄1∶1同籠交配，次日觀察陰栓，有陰栓脫落雌鼠為妊娠0 d，取出單籠飼養(yǎng)，并補(bǔ)充同組新雌鼠繼續(xù)交配，交配期間自由攝食飲水；飼料種類不變，各組雄鼠保持不變。分別于妊娠后0 d、7 d、12 d、16 d、20 d稱量妊娠鼠體質(zhì)量，并于20 d時(shí)采血并處死，解剖取完整子宮稱重后取出胎仔，并稱重，測(cè)量身長、尾長，同時(shí)觀察外觀生長發(fā)育情況；同窩仔鼠按稱重順序奇偶分兩部分，奇數(shù)部分浸泡固定液，固定一周后取出，進(jìn)行內(nèi)臟發(fā)育及畸形觀察并記錄，另一部分胎鼠剝?nèi)ネ馄?，去除?nèi)臟和脂肪后，浸入茜素紅染液中，經(jīng)甘油透明化處理后觀察，記錄第2、5胸骨發(fā)育及全身其他骨骼的發(fā)育及畸形情況。雄性大鼠交配結(jié)束后，稱體質(zhì)量（提前16 h禁食），采血后處死，解剖，取睪丸及附睪并稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，血樣取血清測(cè)睪丸酮含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)親代妊娠率及雄鼠的影響

輻照組妊娠率率高于高壓組（P＜0.05）（表1）。

表 1 不同方法滅菌飼料對(duì)大鼠妊娠的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，兩組雄性大鼠（n=20）體質(zhì)量，睪丸、附睪重量及系數(shù)，性激素水平均無明顯差異（P＞0.05）（表2）。

由表3可見，無論高壓組還是輻照組，妊娠鼠體質(zhì)量均呈相同增長趨勢(shì)，且兩組間各階段體質(zhì)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

由表4可見，兩組妊娠鼠間子宮連胎重、著床數(shù)及活胎數(shù)等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.3 對(duì)胎仔重量及形態(tài)發(fā)育的影響

胎仔體質(zhì)量、胎盤重、身長、尾長組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表5）。

各組胎仔發(fā)育畸形發(fā)生情況， 第2、5胸骨發(fā)育缺失發(fā)生情況， 囟門寬和長均無明顯差別（表6）。

表 2 不同飼料對(duì)成年雄性大鼠性器官發(fā)育及性激素的影響

表 3 不同飼料組妊娠鼠體質(zhì)量 g

表 4 不同飼料對(duì)大鼠妊娠鼠產(chǎn)仔影響

表 5 不同飼料對(duì)仔鼠發(fā)育的影響

3 討論

飼料的無菌處理是飼養(yǎng)高等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基礎(chǔ)和必要條件。60Co 輻射滅菌是利用60Co 產(chǎn)生的射線殺死微生物的一種冷滅菌方法， 能較好地保存飼料中的營養(yǎng)成分，但滅菌過程和滅菌效果不能自控。高壓蒸汽滅菌方法具有自身優(yōu)點(diǎn)，滅菌成本低廉、滅菌設(shè)備在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室配備，滅菌過程和滅菌效果可以自控。因此，飼料高壓蒸汽滅菌方法目前在各動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室被大量采用。而針對(duì)高壓蒸汽滅菌飼料經(jīng)高溫消毒后，營養(yǎng)成分破壞較多，尤其是維生素含量下降大的問題，一般均采用增加營養(yǎng)成分投料量的方式來彌補(bǔ)這部分的損失［3］。

表 6 不同飼料對(duì)大鼠子代發(fā)育影響

有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［4，5］， 不同滅菌方法的飼料對(duì)動(dòng)物的生長發(fā)育過程會(huì)產(chǎn)生不同的影響，但也有報(bào)道［6，7］，兩種飼料對(duì)大鼠的生長發(fā)育影響并無明顯差異。說明有必要對(duì)這兩種方法滅菌飼料對(duì)大鼠繁殖、發(fā)育的影響做進(jìn)一步研究。

作者使用不同方法滅菌后鼠生長繁殖顆粒飼料飼養(yǎng)大鼠，觀察妊娠及胎仔發(fā)育畸形等多方面情況，比較全面地探討了輻照顆粒料和高壓顆粒料對(duì)大鼠生殖的影響。從大鼠交配成功率看，輻照組大鼠交配成功率更高。兩組雄性大鼠睪酮水平、睪丸及附睪系數(shù)并無明顯差異。以往文獻(xiàn)［8］報(bào)道輻照飼料組妊娠鼠著床率及活胎數(shù)高于高壓飼料組，但本試驗(yàn)中，著床數(shù)，活胎數(shù)等指標(biāo)均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而通過對(duì)胎仔外形，器官、骨骼，囟門發(fā)育及第2、5胸骨缺失情況的觀察，各組仔鼠發(fā)育均無明顯差異，與前述結(jié)果表現(xiàn)一致，提示兩種飼料對(duì)大鼠胎仔發(fā)育影響無明顯差異。

［1］ 張大維， 邴國強(qiáng)， 甘振威， 等. 不同滅菌方法對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合顆粒飼料營養(yǎng)成分的影響［J］. 飼料工業(yè)， 2012， 33（2）: 40-43.

［2］ 貴有軍， 侯巖巖， 史深， 等. 不同方法的滅菌飼料飼喂清潔級(jí)KM 小鼠的效價(jià)分析［J］. 地方病通報(bào)， 2010， 25（4）:41-43.

［3］ 任春磊， 楊國山， 閆傲霜.60Co-γ射線輻照技術(shù)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料滅菌中的應(yīng)用［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 2008， 5（4）:51-54.

［4］ 孫全文， 杜建華， 常寶.60Co 輻照日糧對(duì)KM小鼠繁育情況的影響［J］. 張家口醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2003， 20（5）:30-31.

［5］ 周文江， 許蘭文， 顧兆江， 等.60Co 輻照飼料對(duì)KM 小鼠繁育情況的影響［J］. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 1998， 18（1）:33-35.

［6］ 張大維， 邴國強(qiáng)， 徐彩云， 等. 滅菌鼠全價(jià)顆粒飼料對(duì)大小鼠生長發(fā)育和繁殖性能的影響［J］， 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010， 32（4）:437-439.

［7］ 施張奎， 余強(qiáng)， 盧立群， 等. 不同方法滅菌飼料對(duì)小鼠繁殖性能的影響［J］. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 16（10）:615-616.

［8］ 姚健， 胡櫻， 夏萍， 等. 三種處理飼料飼喂BALB/c小鼠的效價(jià)分析［J］. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 2005， 25（1）:47-48.

Q95-33 R-332

B

1674-5817（2016）01-0048-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.009

2015-07-14

福建省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2013y0084）

趙康濤（1976-）， 男， 副主任技師， 研究方向: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)、毒理學(xué)。E-mail: ktzhao@sohu.com

林 健， 主任技師。E-mail: 18786381@qq.com