蔡海瑞　譚北平　楊奇慧　董曉慧　遲淑艷　劉泓宇　章　雙（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088）

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飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及非特異性免疫酶活性的影響

蔡海瑞譚北平?楊奇慧?董曉慧遲淑艷劉泓宇章雙
（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088）

摘要:本試驗(yàn)旨在研究飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及非特異性免疫酶活性的影響，探討3種鉻源在飼料中的最適添加水平。采用雙因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，鉻源分別為氯化鉻（CrCl3）、吡啶甲酸鉻（Cr-Pic）和蛋氨酸鉻（Cr-Met），鉻添加水平分別為0、0.3、0.6、0.9、1.2和2.0 mg/ kg，配制成16種試驗(yàn)飼料，投喂凡納濱對(duì)蝦幼蝦8周。挑選初始體重為（0.897±0.001）g的凡納濱對(duì)蝦幼蝦1 920尾，隨機(jī)分為16組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾。結(jié)果表明：鉻源、鉻添加水平及兩者的交互作用對(duì)凡納濱對(duì)蝦的終末體重、增重率、飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率有顯著影響（P＜0.05）。鉻添加水平為0.3～2.0 mg/ kg的各組幼蝦的終末體重、增重率顯著高于未添加鉻組（P＜0.05），以Cr-Met形式添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)上述指標(biāo)達(dá)到最大值。CrCl3和Cr-Met組在鉻添加水平為0.9 mg/ kg時(shí)飼料系數(shù)最低，但與鉻添加水平為1.2 mg/ kg時(shí)差異不顯著（P＞0.05）；Cr-Pic組在鉻添加水平為1.2 mg/ kg時(shí)飼料系數(shù)最低。3種鉻源下，蛋白質(zhì)效率均在鉻添加水平為0.9 mg/ kg時(shí)達(dá)最大值，但與鉻添加水平為1.2 mg/ kg時(shí)差異不顯著（P＞0.05）。鉻源、鉻添加水平及兩者的交互作用對(duì)全蝦粗脂肪和粗灰分含量有顯著影響（P＜0.05），但對(duì)全蝦粗蛋白質(zhì)和水分含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。鉻源、鉻添加水平及兩者的交互作用對(duì)血清總蛋白、葡萄糖、膽固醇和甘油三酯含量均有顯著影響（P＜0.05），以Cr-Met形式添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)呈現(xiàn)出最高的血清總蛋白含量和最低的血清葡萄糖含量。鉻源、鉻添加水平及兩者的交互作用對(duì)血清堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶及總超氧化物歧化酶活性有顯著影響（P＜0.05），以Cr-Met形式添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)血清酚氧化物酶和總超氧化物歧化酶活性最高。以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以CrCl3、Cr-Pic和Cr-Met為鉻源時(shí)，經(jīng)折線模型得出飼料中鉻的適宜添加水平分別為1.33、1.27、1.04 mg/ kg。通過(guò)比較可知，Cr-Met的相對(duì)生物利用率最高，Cr-Pic次之，CrCl3最低。

關(guān)鍵詞:凡納濱對(duì)蝦；鉻；生長(zhǎng)性能；血清生化指標(biāo)；非特異性免疫酶活性

鉻（Cr）是動(dòng)物的必需微量元素之一，是葡萄糖耐量因子（glucose tolerance factor，GTF）的重要活性組成成分，鉻通過(guò)葡萄糖耐量因子協(xié)同胰島素的作用，影響碳水化合物、脂類、蛋白質(zhì)和核酸代謝，進(jìn)而影響動(dòng)物的生長(zhǎng)、免疫、繁殖和胴體品質(zhì)，降低應(yīng)激，改善機(jī)體免疫機(jī)能，提高生產(chǎn)性能和繁殖力［1］。

鉻作為營(yíng)養(yǎng)素最早多在畜禽方面進(jìn)行研究，近年來(lái)，鉻在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的研究也取得了一些成果，特別是在魚(yú)類上的研究比較多。研究表明，飼料中添加鉻可促進(jìn)鯉魚(yú)（Cyprinus carpio Linnaeus）［2］、草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）［3-4］、河蟹（Eriocheir sinensis）［5］、奧尼羅非魚(yú)（Oreochoromis niloticus×O. aureus）［6］、吉富羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）［7］和團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）［8］等水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和飼料利用率，但對(duì)不同品種間的研究結(jié)果差異較大。有關(guān)凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）對(duì)飼料中鉻需求量的研究主要集中在以吡啶甲酸鉻（Cr-Pic）為鉻源上。楊奇慧等［9］報(bào)道，以Cr-Pic為鉻源時(shí)，凡納濱對(duì)蝦對(duì)飼料中鉻的需求量為1.2～1.6 mg/ kg。

鉻的吸收與其價(jià)態(tài)及化學(xué)形式有很大關(guān)系，Mertz等［10］認(rèn)為有機(jī)鉻較無(wú)機(jī)鉻容易吸收，其吸收率為25%～30%。無(wú)機(jī)鉻中的三氯化鉻（CrCl3）性質(zhì)很穩(wěn)定，不易水解，是合成其他鉻鹽的重要原料，在無(wú)機(jī)合成和有機(jī)合成中有重要作用，是合成飼料添加劑的主要成分。Cr-Pic和蛋氨酸鉻（Cr-Met）分別是吡啶甲酸和蛋氨酸與3價(jià)鉻離子（Cr3+）的螯合物，可緩解礦物元素之間的拮抗競(jìng)爭(zhēng)作用，有利于鉻的吸收。本研究擬以我國(guó)養(yǎng)殖量最大的經(jīng)濟(jì)甲殼動(dòng)物凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象，比較3種不同形式的鉻——無(wú)機(jī)鉻、有機(jī)酸鉻、氨基酸鉻及其添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和免疫的影響，為鉻在對(duì)蝦配合飼料中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)飼料

以酪蛋白、紅魚(yú)粉為蛋白質(zhì)源，魚(yú)油、玉米油、卵磷脂為脂肪源，配制基礎(chǔ)飼料（表1）。在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上，采用雙因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以CrCl3（由佛山市海納化工有限公司提供）、Cr-Pic（由綿陽(yáng)市新一美化工有限公司提供，Cr3+含量為0.1%）、Cr-Met（由廣州天科科技有限公司提供，Cr3+含量為0.1%）為鉻源，鉻添加水平分別為0、0.3、0.6、0.9、1.2和2.0 mg/ kg，共配制成16種試驗(yàn)飼料。各種飼料原料粉碎后過(guò)80目篩，按表1的配方準(zhǔn)確稱量各飼料原料，3種鉻源先分別用沸石粉作為稀釋劑，稀釋成Cr3+含量為0.1%，然后按各試驗(yàn)組的添加量進(jìn)行稱取，再和飼料配方中其他微量成分混合均勻（微量成分采取逐級(jí)擴(kuò)大法混合均勻），各飼料原料成分用V型混合機(jī)混合均勻后，添加30%左右的水用攪拌機(jī)再次混勻后，壓制成粒徑分別為1.0和1.5 mm的2種顆粒飼料，經(jīng)60℃熟化30 min后風(fēng)干，用封口袋密封，置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1　基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet（DM basis）　%

表2　試驗(yàn)飼料中鉻的測(cè)定量Table 2 The analyzed values of chromium in experimental diets　mg/ kg

1.2試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)蝦苗購(gòu)自湛江市中聯(lián)養(yǎng)殖有限公司，購(gòu)回后暫養(yǎng)一段時(shí)間，期間投喂基礎(chǔ)飼料，每天3次，飽食投喂。試驗(yàn)前，挑選大小均勻、體格健康、初重為（0.897±0.001）g的蝦苗1 920尾，隨機(jī)分為16組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾蝦，以重復(fù)為單位飼養(yǎng)于容積為0.3 m3的玻璃纖維鋼桶中。每天按體重的8%～10%投喂，分別于07：00、11：00、17：00、21：00各投喂1次，每餐以接近飽食（30 min內(nèi)攝食完畢）為限。試驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)沉淀、過(guò)濾的海水，試驗(yàn)第1～4周每2 d換水1次，第5～8周每天換水1次，換水量為總水量的30%～50%，每天觀察對(duì)蝦攝食、蛻殼、生長(zhǎng)情況并記錄投喂量。試驗(yàn)在廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行。養(yǎng)殖過(guò)程參照楊奇慧等［9］的方法進(jìn)行。試驗(yàn)期間連續(xù)充氧，水溫為28～31℃，溶解氧濃度＞7.0 mg/ L，鹽度為26～28，pH 為7.8～8.2，氨氮濃度＜0.03 mg/ L。試驗(yàn)期為8周，結(jié)束前24 h停止投喂，稱重、計(jì)數(shù)。

1.3樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)每桶蝦進(jìn)行稱重并計(jì)數(shù)，用于計(jì)算成活率、增重率、特定生長(zhǎng)率等生長(zhǎng)指標(biāo)。每桶隨機(jī)取10尾蝦，用1 mL無(wú)菌注射器從圍心腔取血，將血液置于1.5 mL離心管中，于4℃冰箱中靜置過(guò)夜后，在4℃、8 000 r/ min下離心10 min，取上清分裝后置于-80℃冰箱中保存，用于分析血清生化指標(biāo)；每桶另隨機(jī)選5尾蝦保存于-20℃冰箱內(nèi)，用于體成分分析。

1.4指標(biāo)測(cè)定

1.4.1體成分分析

參照AOAC（1995）［11］方法，分別測(cè)定飼料及全蝦樣品中的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分的含量。水分含量的測(cè)定通過(guò)恒溫烘箱在105℃下烘干至恒重測(cè)定；粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱氏定氮法（KjeltecTM8400，Sweden）；粗脂肪含量的測(cè)定采用索氏抽提法（乙醚作為提取溶劑）；粗灰分含量的測(cè)定采用550℃馬弗爐灰化法。

1.4.2血清生化指標(biāo)的測(cè)定

血清中總蛋白、葡萄糖、甘油三酯、膽固醇含量采用日立Hitachi 7020型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，所用試劑購(gòu)自威特曼（南京）生物科技有限公司。

1.4.3血清非特異性免疫酶活性的測(cè)定

血清中總超氧化物歧化酶（total-surperoxide dismutase，T-SOD）、酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）活性使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；血清中酚氧化物酶（phenoloxidase，PO）活性的測(cè)定參照王建國(guó)等［12］和Huang等［13］的方法。

1.5生長(zhǎng)性能指標(biāo)計(jì)算公式

1.6數(shù)據(jù)處理與分析

結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素方差分析（two-way ANOVA），若存在顯著性差異，再采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，檢驗(yàn)組間差異的顯著性，P＜0.05表示差異顯著。飼料中鉻的最適添加水平通過(guò)折線模型進(jìn)行回歸分析，用拐點(diǎn)以下的直線斜率比值比較凡納濱對(duì)蝦對(duì)CrCl3、Cr-Pic和Cr-Met的相對(duì)生物利用率。

2　結(jié)　果

2.1飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦的終末體重、增重率、飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率均有顯著影響（P＜0.05），且鉻源與鉻添加水平之間存在交互作用（P＜0.05）。鉻源對(duì)凡納濱對(duì)蝦的成活率有顯著影響（P＜0.05），但鉻添加水平對(duì)其無(wú)顯著影響（P＞0.05），且鉻源與鉻添加水平間無(wú)交互作用（P＞0.05）。

終末體重：以CrCl3和Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9 和1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0.3、0.6、0.9 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）；添加1.2、2.0 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著低于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

增重率：以CrCl3和Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9和1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組與2.0 mg/ kg組無(wú)顯著差異（P＞0.05），而顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0. 6、0. 9 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）；添加1.2、2.0 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著低于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

成活率：Cr-Pic組的成活率顯著高于CrCl3和Cr-Met組（P＜0.05）。

飼料系數(shù)：以CrCl3為鉻源時(shí)，0.9 mg/ kg組最低，0、0.3 mg/ kg組顯著高于0.9、1.2 mg/ kg組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組最低，0 mg/ kg組最高，除0.3、0.6 mg/ kg組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）外，其余各組間差異顯著（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9 mg/ kg組最低，0 mg/ kg組最高，0.9 mg/ kg組顯著低于除0.6、1.2 mg/ kg組外的其余各組（P＜0.05）。添加0.6、0.9 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著低于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）；添加1.2、2.0 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著高于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

蛋白質(zhì)效率：以CrCl3為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組最高，0 mg/ kg組最低，且2.0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic和Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9 mg/ kg組最高，1.2 mg/ kg組次之，0 mg/ kg組最低，0. 9和1. 2 mg/ kg組顯著高于0、0.3 mg/ kg組（P＜0. 05）。鉻的各添加水平下，CrCl3組均顯著低于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

表3　飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能的影響Table 3 Effects of dietary chromium source and supplemental level on growth performance of juvenile Litopenaeus vannamei（n＝3）

續(xù)表3　

2.2飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦體成分的影響

由表4可知，鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦全蝦的粗脂肪、粗灰分含量有顯著影響（P＜0.05），且鉻源與鉻添加水平之間存在交互作用（P ＜0.05）；鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦全蝦的水分和粗蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著影響（P＞0.05），且兩者間無(wú)交互作用（P＞0.05）。

粗脂肪含量：以CrCl3為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組顯著低于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic和Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9、1.2 mg/ kg組顯著低于其余各組（P＜0.05）。添加0.6 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著低于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）；添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著高于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

粗灰分含量：以CrCl3為鉻源時(shí)，0 mg/ kg組顯著低于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，0、0.3 mg/ kg組顯著低于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9 mg/ kg組最高，顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0.6、0.9、1.2和2.0 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Pic組顯著高于CrCl3和Cr-Met組（P＜0.05）。

表4　飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦體成分的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 4 Effects of dietary chromium source and supplemental level on body composition of juvenile Litopenaeus vannamei（DM basis，n＝3）　%

2.3飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清中總蛋白、葡萄糖、膽固醇和甘油三酯含量均有顯著影響（P＜0.05），且鉻源與鉻添加水平之間存在交互作用（P＜0.05）。

總蛋白含量：以CrCl3和Cr-Pic為鉻源時(shí)，0.9、1.2和2.0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9、1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0. 05）。添加0. 6、0. 9和1.2 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）；添加2.0 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著低于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

葡萄糖含量：以CrCl3和Cr-Pic為鉻源時(shí)，0、0.3 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。鉻的各添加水平下，Cr-Met組均顯著低于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）。

膽固醇含量：以CrCl3為鉻源時(shí)，0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，0.3 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，0、0.3 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0.3 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0. 05）；添加0. 9、2.0 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著高于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

甘油三酯含量：以CrCl3為鉻源時(shí)，0、0.3 mg/ kg組顯著低于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，2.0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，1.2、2.0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0.6 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著高于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）；添加1.2、2.0 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）。

表5　飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦血清生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary chromium source and supplemental level on serum biochemical indices of juvenile Litopenaeus vannamei（n＝3）

2.4飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦血清中非特異性免疫酶活性的影響

由表6可知，鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清中酚氧化物酶、總超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性均有顯著影響（P＜0.05），且鉻源與鉻添加水平之間存在交互作用（P＜0.05）。

酚氧化物酶活性：以CrCl3為鉻源時(shí)，0.9、1.2 和2.0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，0.9、1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0. 05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，0. 6、0.9 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。鉻的各添加水平下，Cr-Met組均顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）。

總超氧化物歧化酶活性：以CrCl3為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic和Cr-Met為鉻源時(shí)，0.9 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0.3、0.9 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Met組顯著高于CrCl3和Cr-Pic組（P＜0.05）；添加1.2 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著高于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

堿性磷酸酶活性：以CrCl3為鉻源時(shí)，0.9、1.2 和2.0 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Pic為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，1.2、2.0 mg/ kg組顯著高于除0. 9 mg/ kg組外的其余各組（P＜0.05）。添加0.3、1.2 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著低于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）；添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Pic組顯著低于CrCl3和Cr-Met組（P＜0.05）。

酸性磷酸酶活性：以CrCl3和Cr-Pic為鉻源時(shí)，0.9、1. 2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）；以Cr-Met為鉻源時(shí)，1.2 mg/ kg組顯著高于其余各組（P＜0.05）。添加0.3 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Pic組顯著高于CrCl3和Cr-Met組（P＜0.05）；添加0.6、2.0 mg/ kg鉻時(shí)，Cr-Pic組顯著低于CrCl3和Cr-Met組（P＜0.05），添加1.2 mg/ kg鉻時(shí)，CrCl3組顯著高于Cr-Pic和Cr-Met組（P＜0.05）。

表6　飼料中鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦血清中非特異性免疫酶活性的影響Table 6 Effects of dietary chromium source and supplemental level on serum non-specific immune enzyme activities of juvenile Litopenaeus vannamei（n＝3）

續(xù)表6　

2.53種鉻源相對(duì)生物利用率的比較

由表7和圖1可知，以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以CrCl3、Cr-Pic、Cr-Met為鉻源時(shí)，經(jīng)折線模型得出飼料中鉻的適宜添加水平分別為1.33、1.27、 1.04 mg/ kg。以CrCl3為標(biāo)準(zhǔn)物時(shí)，Cr-Pic和Cr-Met的相對(duì)生物利用率分別為124. 20%、184.32%。

表7　以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)吡啶甲酸鉻和蛋氨酸鉻的相對(duì)生物利用率Table 7 Relative bioavailability of Cr-Pic and Cr-Met for WGR as an evaluation index

圖1　飼料中鉻添加水平與凡納濱對(duì)蝦幼蝦增重率的關(guān)系Fig.1 Relationship of dietary chromium supplemental level and WGR of juvenile Litopenaeus vannamei

3　討　論

3.1鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能的影響

鉻是動(dòng)物必需的微量元素，在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中添加一定量的鉻鹽能增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。Cr3+作為GTF的活性成分，與胰島素之間存在協(xié)同作用［14］，共同參與體內(nèi)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝［15］，從而促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)和增重［16］。

目前，關(guān)于飼料中添加鉻對(duì)蝦類生長(zhǎng)性能影響的研究較少，但在魚(yú)類上的報(bào)道較多。研究表明，飼料中添加1.2～1.6 mg/ kg Cr-Pic時(shí)，可提高凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)和飼料利用率［9］；飼料中添加2.0%的Cr-Pic可提高奧尼羅非魚(yú)的生長(zhǎng)和飼料利用率［6］；添加1.7 mg/ kg的煙酸鉻、甘氨酸鉻和Cr-Met均可促進(jìn)奧尼羅非魚(yú)的生長(zhǎng)，并降低飼料系數(shù)［17］；飼料中以Cr-Pic的形式添加0.8 mg/ kg的鉻可顯著提高吉富羅非魚(yú)的生長(zhǎng)和飼料利用率［7］；飼料中添加Cr-Pic能提高草魚(yú)對(duì)葡萄糖的耐受量，促進(jìn)草魚(yú)生長(zhǎng)［3］；在基礎(chǔ)飼料中添加600 μg/ kg Cr-Pic，團(tuán)頭魴可獲得較好的生長(zhǎng)性能［8］。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)飼料中以CrCl3和Cr-Pic的形式添加1.2 mg/ kg鉻，以Cr-Met的形式添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)，可顯著提高凡納濱對(duì)蝦的增重率、蛋白質(zhì)效率，并顯著降低飼料系數(shù)。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，表明飼料中添加一定量的鉻可促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和飼料利用率，且不同添加形式的鉻對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能的作用效果不同。影響動(dòng)物對(duì)微量元素吸收利用效果的因素相當(dāng)復(fù)雜，除了受動(dòng)物本身消化吸收生理特點(diǎn)的影響外，可能還和不同形式微量元素的分子結(jié)構(gòu)、分子量、溶解度等有關(guān)。由于目前國(guó)內(nèi)外對(duì)甲殼動(dòng)物微量元素具體吸收機(jī)制的研究很少，對(duì)不同形式微量元素的實(shí)際應(yīng)用技術(shù)比較盲目，還需要開(kāi)展大量的研究工作，以期彌補(bǔ)有關(guān)微量元素方面的空白。

3.2鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦體成分的影響

本試驗(yàn)中，全蝦水分和粗蛋白質(zhì)含量在各組之間無(wú)顯著差異，這與在羅非魚(yú)［18］和草魚(yú)［3］上的研究結(jié)果一致。關(guān)于鉻對(duì)動(dòng)物體粗脂肪和粗灰分含量影響的研究，不同的研究所得結(jié)果有所差異。Xi等［19］報(bào)道，在生長(zhǎng)肥育豬飼糧中添加鉻，通過(guò)降低脂肪合成酶活性，從而減少了脂肪的沉積。劉太亮等［3］在草魚(yú)飼料中添加鉻后發(fā)現(xiàn)全魚(yú)的粗脂肪含量并無(wú)顯著變化，添加鉻試驗(yàn)組的全魚(yú)粗灰分含量顯著高于對(duì)照組。楊奇慧等［9］研究表明，全蝦粗脂肪含量隨Cr-Pic添加水平的增加有下降的趨勢(shì)，而粗灰分含量則有增加的趨勢(shì)。崔學(xué)升［20］研究發(fā)現(xiàn)，添加Cr-Pic可降低幼建鯉體脂肪的含量。本研究中全蝦粗脂肪含量在3種鉻源下均有隨著鉻添加水平的增加而下降的趨勢(shì)，這一結(jié)果與Xi等［19］、楊奇慧等［9］和崔學(xué)升［20］的研究結(jié)果一致。鉻作用于胰島素以及脂肪代謝有關(guān)的酶，從而調(diào)節(jié)脂肪的代謝，這可能是全蝦粗脂肪含量降低的原因。本試驗(yàn)結(jié)果表明，全蝦粗灰分含量在3種鉻源下均隨著鉻添加量的增加而增加，這與劉太亮等［3］和楊奇慧等［9］的研究結(jié)果一致。關(guān)于鉻對(duì)動(dòng)物體成分影響的研究，由于動(dòng)物品種、規(guī)格、飼料組成、養(yǎng)殖環(huán)境等因素的影響，研究結(jié)果有很大差異。因此，鉻對(duì)動(dòng)物體成分影響的研究還有待深入的研究。

3.3鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦血清生化指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)中，在3種鉻源下，隨著鉻添加水平的增加，血清葡萄糖含量呈遞減趨勢(shì)，這與楊奇慧等［7］、劉太亮等［3］和蔡春芳等［21］的報(bào)道結(jié)果一致。蔡春芳等［21］報(bào)道，在葡萄糖為糖原的飼料中添加鉻顯著地提高了異育銀鯽的糖耐量，對(duì)淀粉組的糖耐量也有一定的促進(jìn)作用；劉太亮等［3］研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加0.8 mg/ kg Cr-Pic后草魚(yú)的葡萄糖耐量顯著提高；楊奇慧等［7］研究指出，以Cr-Pic形式在飼料中添加0.8 mg/ kg的鉻可顯著降低吉富羅非魚(yú)的血清葡萄糖含量。鉻是GTF的主要組成部分，GTF能增加細(xì)胞表面胰島素受體數(shù)量以促進(jìn)胰島素與特定受體的結(jié)合，刺激組織細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，從而使血液中葡萄糖的含量降低［22］。關(guān)于鉻對(duì)血糖調(diào)節(jié)作用的研究，在人類和陸生動(dòng)物中比較深入，在水產(chǎn)動(dòng)物方面還有待進(jìn)一步研究。

血清總蛋白含量在一定程度上反映了飼養(yǎng)動(dòng)物所攝食的飼料中蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)水平以及動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收程度，其與機(jī)體自身的蛋白質(zhì)合成機(jī)能和氮的沉積效果息息相關(guān)［23］。Amoikon等［24］認(rèn)為鉻增強(qiáng)胰島素的功能后，胰島素通過(guò)促進(jìn)氨基酸進(jìn)入細(xì)胞，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。本試驗(yàn)中，在3種鉻源下，血清總蛋白含量隨著鉻添加水平的增加而增加，添加0.9、1.2 mg/ kg Cr-Met組對(duì)蝦的血清總蛋白含量最高。這可能與氨基酸螯合物的添加增加了飼料中必需氨基酸的量，優(yōu)化了必需氨基酸的比例以及促進(jìn)了Cr3+的吸收等有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果與吳永勝等［25］、楊奇慧等［9］的研究成果基本一致，但藺玉華等［26］用添加鉻的飼料喂養(yǎng)鯉，其血清中總蛋白含量低于對(duì)照組，與本試驗(yàn)的結(jié)論不一致，其原因可能是由于鉻的添加促使氨基酸向組織蛋白轉(zhuǎn)化，從而導(dǎo)致血清總蛋白含量下降，但具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

鉻對(duì)脂肪代謝的作用主要是維持血液的正常膽固醇含量［27］，影響脂肪和膽固醇在動(dòng)物肝臟中的合成與清除，促進(jìn)脂類重分配。在畜禽上的研究表明，飼料添加有機(jī)鉻可降低血清中膽固醇含量［28］，提高血清中甘油三酯含量［29］。劉太亮［30］研究表明，添加Cr-Pic和煙酸鉻能顯著降低草魚(yú)血清中膽固醇含量，提高血清中甘油三酯含量。楊奇慧等［9］研究指出，添加Cr-Pic可降低凡納濱對(duì)蝦血清中膽固醇含量，而對(duì)血清中甘油三酯含量無(wú)顯著影響。藺玉華等［26］在研究中證實(shí)鉻有降低血清甘油三酯含量的作用。本試驗(yàn)中，添加鉻能夠降低凡納濱對(duì)蝦血清中膽固醇含量，提高血清中甘油三酯含量，這一結(jié)果與劉太亮［30］的研究結(jié)果一致。血清中膽固醇含量的減少，可能是因?yàn)殂t不但降低血清中膽固醇的累積，而且可加快主動(dòng)脈內(nèi)已沉積的膽固醇的遷移［31］。有關(guān)鉻對(duì)血清甘油三酯含量的影響目前說(shuō)法不一，有研究認(rèn)為甘油三酯含量的下降可能是由于氧化反應(yīng)增強(qiáng)，尤其是β-氧化過(guò)程，從而增強(qiáng)脂肪氧化供能途徑，減少脂肪酸合成甘油三酯，從而導(dǎo)致其含量的降低［25］；Mertz等［10］亦認(rèn)為GTF是胰島素的增強(qiáng)劑，而胰島素促進(jìn)血糖進(jìn)入肝臟，骨骼肌和脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化為糖原和甘油三酯，并不是以脂肪的形式沉積下來(lái)，這也可能是本試驗(yàn)中導(dǎo)致血清甘油三酯含量升高的原因之一。因此，有關(guān)鉻對(duì)動(dòng)物血清中脂類代謝的影響仍需進(jìn)一步的探討。

3.4鉻源及鉻添加水平對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清中非特異性免疫酶活性的影響

鉻不僅可促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，還可增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中適量添加鉻可顯著提高血清堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶以及總超氧化物歧化酶的活性。

堿性磷酸酶是一種特異性較低的膜結(jié)合酶，在動(dòng)物機(jī)體中存在較為廣泛，主要功能是參與體內(nèi)物質(zhì)（如磷酸基團(tuán)）的轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝、水產(chǎn)動(dòng)物骨骼的礦化過(guò)程［32］。酸性磷酸酶是巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，和堿性磷酸酶一樣能夠催化磷酸單脂的水解，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移與代謝過(guò)程［33］。本研究表明，3種鉻源均顯著提高凡納濱對(duì)蝦血清中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶活性，隨鉻添加水平的增加逐漸趨于平穩(wěn)，與周燕等［34］、楊奇慧等［9］的報(bào)道相似。

酚氧化物酶是一種重要的防御酶，具有異物識(shí)別作用，可比較敏感地反映機(jī)體的免疫狀態(tài)［35-36］。超氧化物歧化酶具有清除自由基以及催化過(guò)氧化物自由基歧化為過(guò)氧化物和氧氣的功能［37］。本試驗(yàn)中，3種鉻源均顯著提高血清中酚氧化物酶及總超氧化物歧化酶活性。以CrCl3和Cr-Met為鉻源時(shí)，酚氧化物酶均在添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)表現(xiàn)出最高活性，以Cr-Pic為鉻源時(shí)，酚氧化物酶在添加1.2 mg/ kg鉻時(shí)表現(xiàn)出最高活性。以CrCl3為鉻源時(shí)，總超氧化物歧化酶在添加1.2 mg/ kg鉻時(shí)表現(xiàn)出最高活性，以Cr-Pic和Cr-Met為鉻源時(shí)，總超氧化物歧化酶在添加0.9 mg/ kg鉻時(shí)表現(xiàn)出最高活性。楊奇慧等［9］發(fā)現(xiàn)，以Cr-Pic的形式添加1.6 mg/ kg鉻時(shí)，血清中酚氧化物酶和總超氧化物歧化酶活性達(dá)到最高值。但楊允輝等［5］研究表明，添加鉻對(duì)河蟹血清中酚氧化物酶活性無(wú)顯著影響。可見(jiàn)，鉻對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫功能影響的結(jié)果差異較大，其原因可能與試驗(yàn)動(dòng)物的品種、大小及鉻的來(lái)源、添加形式和水平等不同有關(guān)，具體原因還有待進(jìn)一步的研究。

4　結(jié)　論

以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以CrCl3、Cr-Pic和Cr-Met為鉻源時(shí)，經(jīng)折線模型得出飼料中鉻的適宜添加水平分別為1.33、1.27、1.04 mg/ kg。通過(guò)比較可知，Cr-Met的相對(duì)生物利用率最高，Cr-Pic次之，CrCl3最低。

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（責(zé)任編輯菅景穎）

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Effects of Dietary Chromium Source and Supplemental Level on Growth Performance，Serum Biochemical Indices and Non-Specific Immune Enzyme Activities of Juvenile Litopenaeus vannamei

CAI Hairui TAN Beiping?YANG Qihui?DONG Xiaohui CHI Shuyan LIU Hongyu ZHANG Shuang
（Laboratory of Aquatic Animal Nutrition and Feed，College of Fisheries，Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088，China）

Abstract：This experiment was conducted to study the effects of dietary chromium source and supplemental level on growth performance，serum biochemical indices and non-specific immune enzyme activities of juvenile Litopenaeus vannamei，and to find the optimal supplemental levels of three chromium in the diets. Sixteen isonitrogenous and isoenergetic diets were formulated by using two-factor experimental design with three chromium sources［chromium trichloride（CrCl3），chromium picolinate（Cr-Pic）and chromium methionine （Cr-Met），respectively］and six chromium supplemental levels（0，0.3，0.6，0.9，1.2 and 2.0 mg/ kg，respectively）. A total of 1 920 juvenile Litopenaeus vannamei with an initial body weight of（0.897±0.001）g were randomly distributed into 16 groups with 3 replicates per group and 40 shrimps per replicate. The experiment lasted for 8 weeks. The results showed that final body weight（FBW），weight gain rate（WGR），feed conversion rate（FCR）and protein efficiency ratio（PER）of shrimps were significantly affected by chromium source，supplemental level and the interaction of chromium source and supplemental level，respectively（P＜0.05）. The FBW and WGR in groups supplemented with 0.3 to 2.0 mg/ kg chromium were significantly higher than those in the group without chromium（P＜0.05），and the Cr-Met group supplemented with 0.9 mg/ kg chromium had the highest FBW and WGR. The groups of CrCl3and Cr-Pic supplemented with 0.9 mg/ kg chromium had the lowest FCR，but showed no significant differences compared with 1.2 mg/ kg group（P＞0.05）. The highest PER of three chromium sources were founded in the groups supplemented with 0.9 mg/ kg chromium，but showed no significant differences compared with the groups supplemented with 1.2 mg/ kg chromium（P＞0.05）. Chromium source，supplemental level and the interaction of chromium source and sup-book=779,ebook=152plemental level had significant effects on the crude lipid and crude ash contents in whole body（P＜0.05），but had no significant effects on the moisture and crude protein contents in whole body（P＞0.05）. Serum total protein（TP），glucose，cholesterol and triglyceride contents were significantly affected by chromium source，supplemental level and the interaction of chromium source and supplemental level，respectively（P＜0.05）. The highest TP content and lowest glucose content in serum were found in the Cr-Met group supplemented with 0.9 mg/ kg chromium. The activities of phenoloxidase（PO），alkaline phosphatase（AKP），acid phosphatase （ACP）and the total superoxide dismutase（T-SOD）in serum were significantly affected by chromium source，supplemental level and the interaction of chromium source and supplemental level，respectively（P＜0.05）. The highest serum PO and T-SOD activities were found in the Cr-Met group supplemented with 0.9 mg/ kg chromium. With the WGR as an evaluation index and the CrCl3，Cr-Pic and Cr-Met as chromium sources，brokenline model shows that the optimal supplemental levels of chromium in juvenile Litopenaeus vannamei diets are 1.33，1.27 and 1.04 mg/ kg，respectively. By comparing，the Cr-Met has the highest relative bioavailability，followed by Cr-Pic，and the lowest is CrCl3.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2016，28（3）：766-779］

Key words：Litopenaeus vannamei；chromium；growth performance；serum biochemical indices；non-specific immune enzyme activities

Corresponding author?s：TAN Beiping，professor，E-mail：bptan@126.com；YANG Qihui，professor，E-mail：qihuiyang03@163.com

通信作者:?譚北平，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail：bptan@126.com；楊奇慧，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：qihuiyang03@163.com

作者簡(jiǎn)介:蔡海瑞（1989—），女，河南駐馬店人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料。E-mail：caicai830520@163.com

基金項(xiàng)目:公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201003020）；廣東省自然科學(xué)基金（2015A030313621）；廣東省產(chǎn)業(yè)技術(shù)與開(kāi)發(fā)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（2013B021100017）

收稿日期:2015-10-15

doi：10.3969/ j.issn.1006-267x.2016.03.017

中圖分類號(hào):S963

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1006-267X（2016）03-0766-14