宋躍　張含國　李淑娟　　　　　李樹久

(林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業(yè)大學(xué))，哈爾濱，150040)　　　(肇州縣林業(yè)局)

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落葉松胚性愈傷組織誘導(dǎo)與未成熟胚形態(tài)的關(guān)系1)

宋躍張含國李淑娟李樹久

(林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業(yè)大學(xué))，哈爾濱，150040)(肇州縣林業(yè)局)

摘要以13落葉松未成熟胚為材料進行胚性愈傷組織的誘導(dǎo)，其中，長73-44、日5*、日5、日5×長77-1、日5×興9、日12×興9等6個家系誘導(dǎo)出胚性愈傷組織，7月1日采集的日5×長77-1未成熟胚的胚性愈傷誘導(dǎo)率最高，達13.93%。研究結(jié)果表明，不同采集時間的落葉松合子胚形態(tài)存在一定區(qū)別，誘導(dǎo)出的愈傷組織形態(tài)也有所不同，其胚性愈傷組織誘導(dǎo)明顯受到取材時間及家系的影響。落葉松胚胎發(fā)育存在多胚現(xiàn)象，胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率與散粉后時間及胚胎長度呈負相關(guān)，而與多胚發(fā)生率呈顯著正相關(guān)(p=0.028)。

關(guān)鍵詞落葉松；日本落葉松；長白落葉松；雜種落葉松；未成熟合子胚；胚性愈傷組織

分類號Q943.1；S791.22

Relationship between the Induction of Embryogenic Callus of Larch and the Morphology of Immature Embryos

Song Yue, Zhang Hanguo, Li Shujuan

(State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding, Northeast Forestry University, Harbin 150040, P. R. China); Li Shujiu(Forestry bureau of Zhaozhou)//Journal of Northeast Forestry University，2016,44(4)：25-30.

With immature embryos for embryogenic callus induction, we induced embryogenic callus from zygotic embryos ofLarixolgensis73-44,L.kaempfer5*,L.kaempferi5,L.kaempferi5×L.olgensis77-1,L.kaempferi5×L.gmelinii9 andL.kaempferi12×L.gmelinii9. The embryogenic callus induction of immature embryos ofL.kaempferi5×L.olgensis77-1 was the highest in July 1 st, which was 13.93%. There was a certain difference in the morphology of the different acquisition time of the larch, and the callus formation was different and the callus induction was significantly influenced by the time and the family. Polyembryonic phenomenon was in the development of larch embryos. The embryogenic callus induction rate was negatively correlated with loose powder after days and embryo length, and was a significant positively correlated with polyembryonic occurrence rate (P=0.028).

KeywordsLarix;Larixkaempferi;Larixolgensis; Hybrix larch; Immature zygotic embryos; Embryogenic callus

落葉松(Larixssp.)屬于松科(Pinaceae)中的落葉松亞科(Laricoideae)落葉松屬(Larixmill)，具有分布廣、抗逆性強及早期速生等優(yōu)點，為北半球溫帶山區(qū)與寒帶氣候條件下重要的速生用材樹種，具有很高的生態(tài)價值與經(jīng)濟價值。但是落葉松生長周期長，扦插等無性繁殖存在生根率較低等問題，且落葉松具有雜合度高的特點，有性生殖產(chǎn)生的子代存在變異，很多優(yōu)良性狀難以維持[1]，通過傳統(tǒng)的繁育方法并不能很好的滿足良種生產(chǎn)的需求，所以利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段，建立穩(wěn)定且高效的落葉松再生體系如體胚發(fā)生體系對于落葉松優(yōu)良種質(zhì)的繁育有積極意義，而胚性愈傷組織的誘導(dǎo)是體細胞胚發(fā)生體系建立的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

目前，有關(guān)于胚性愈傷組織的報導(dǎo)主要集中于胚性愈傷組織誘導(dǎo)過程中的影響因素[2-3]，影響胚性愈傷組織增殖的因素[4]及如何通過胚性愈傷組織誘導(dǎo)體細胞胚胎[5-13]等幾個方面，而對于落葉松種間及其雜種的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率的差異，以及胚性愈傷組織誘導(dǎo)率與未成熟胚形態(tài)發(fā)育間的關(guān)系則鮮見報道。因此，本研究以13個自由授粉家系的6種落葉松的未成熟胚作為外植體進行胚性愈傷組織的誘導(dǎo)，并對其中胚胎發(fā)育過程具有代表性的兩個家系，即同步性較好的日5及同步性較差的日12×興9各時期未成熟胚進行形態(tài)的觀察及對比，試圖揭示落葉松未成熟胚的形態(tài)發(fā)育與胚性愈傷組織誘導(dǎo)間的關(guān)系，為落葉松的體胚研究提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗材料

采種母樹為選自黑龍江省林口縣青山種子園13個家系的14株優(yōu)良單株，分別是興12、興5×興9、日5、日5*、長73-44、日5×長77-1、日5×長77-1 CA-1、日5×長77-1 CA-2、日5×長77-3 CA-2、日5×長77-3 CA-3、日3×長75-5 CB-A、日5×興9、日12×興9及興9×日76-2。上述各母樹的生長坡度均為24°～25°，其中包括興5×興9及日×長雜種落葉松在內(nèi)的7個家系的生長坡向朝北，而其余各家系坡向朝東。

2015年春季對青山種子園落葉松散粉規(guī)律的調(diào)查結(jié)果顯示，落葉松種間散粉期不同，但各種間雜種的散粉期卻趨于一致。其中，興安落葉松散粉期最早，為4月21—22日；雜種落葉松和長白落葉松的散粉期較之稍晚，為4月24—25日；而日本落葉松的散粉期更晚，為4月27—28日。

供試材料分別于2015年6月24日、7月1日、7月8日及7月15日采集。采下的大孢子葉球用塑料密封袋密封后，放入冰盒內(nèi)保存并運輸至實驗室，儲藏于冰箱內(nèi)4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2試驗方法

1.2.1未成熟胚的形態(tài)學(xué)觀察

將不同時間采集的日5、日12×興9兩個家系大孢子葉球的種鱗去除，選擇飽滿的種子，剝除外皮后，分別隨機選取其中10粒未成熟的種子進行稱重，重復(fù)3次。然后用鑷子將胚挑出，顯微鏡下觀察胚的發(fā)育狀態(tài)、測量胚的長度、統(tǒng)計每粒種子中胚的數(shù)量并計算多胚發(fā)生的概率。上述數(shù)據(jù)均采用PASW Statistics 18軟件進行統(tǒng)計分析。

1.2.2外植體的消毒及接種

超凈工作臺內(nèi)，將剝好的種子先經(jīng)無菌水漂洗3次，轉(zhuǎn)入75%酒精處理1 min；再用無菌水漂洗3次，3%的NaClO處理10 min；最后無菌水漂洗3次，接種備用。

接種前，外植體表面水分用無菌濾紙吸干。接種方法有2種，一種為縱向劃破胚乳至胚，不將種胚單獨挑出而直接接種于培養(yǎng)基中；另一種為縱向劃破胚乳至胚，并挑其種胚，但不使其與胚乳完全分離，將胚與胚乳一同接入培養(yǎng)基中(圖1)。兩種方法處理的胚乳切口均向下朝向培養(yǎng)基。6月24日及7月1日采集的材料，其胚不易挑出所以選用第一種方法接種；7月15日采集的外植體已發(fā)育至形態(tài)學(xué)成熟故選用第二種方法接種；而7月8日采集材料的發(fā)育狀況介于上述兩者之間，接種時根據(jù)胚的發(fā)育情況，酌情選擇接種的方式。

方法1(縱向劃破胚乳至胚，不將種胚單獨挑出而直接接種于培養(yǎng)基中)；方法2(縱向劃破胚乳至胚，并挑其種胚，但不使其與胚乳完全分離，將胚與胚乳一同接入培養(yǎng)基中)。

圖1外植體的接種

1.2.3胚性愈傷組織的誘導(dǎo)

將不同處理的外植體分別接種于含有1.5 mg/L 2,4-D、0.5 mg/L 6-BA、0.5 mg/L KT的BM培養(yǎng)基上，每個處理重復(fù)3次，每次重復(fù)接種15個外植體，并分別進行標記。(25±1)℃條件下進行暗培養(yǎng)。接種后觀察外植體變化，4～8周后分別進行愈傷誘導(dǎo)率及胚性愈傷誘導(dǎo)率的統(tǒng)計。

2結(jié)果與分析

2.1未成熟胚的形態(tài)學(xué)觀察

賈桂霞等[14]認為，落葉松胚胎的發(fā)育要經(jīng)過原胚階段，胚胎選擇及發(fā)育階段和成熟階段。因為落葉松胚胎的形態(tài)結(jié)構(gòu)在發(fā)育過程中變化明顯，所以根據(jù)胚在發(fā)育和分化階段形態(tài)的變化，本研究將試驗中觀察到的合子胚分為5個階段(圖2)：1、子葉前期Ⅰ，即已形成次生胚柄，但幼胚僅由少量的十幾個細胞組成；2、子葉前期Ⅱ，幼胚細胞不斷分裂增殖，已成為一圓柱體；3、子葉前期Ⅲ，幼胚繼續(xù)發(fā)育，其形狀近似與棒槌狀，并且此時淀粉等物質(zhì)在胚內(nèi)開始大量的積累；4、子葉期Ⅰ，苗端開始分化，胚體頂端稍凸起形成苗端，在苗端周圍分化產(chǎn)生子葉；5、子葉期Ⅱ，胚的各部分組織分化幾乎完成，形態(tài)已接近成熟胚，較上一階段相比其胚胎長度增加明顯。

1、多胚現(xiàn)象；2、子葉前期Ⅰ；3、子葉前期Ⅱ；4、子葉前期Ⅲ；5、子葉期Ⅰ；6、子葉期Ⅱ。

觀察結(jié)果(表1)表明，日5、日12×興9兩個落葉松家系的合子胚發(fā)育模式并不相同。在對日5家系落葉松胚胎發(fā)育過程進行的觀察中發(fā)現(xiàn)，6月24日時，該家系胚胎多為多重胚，并且此時的胚多處于子葉前期Ⅱ，而少數(shù)則處于子葉前期Ⅰ及Ⅲ階段；7月1日時，其胚胎多處于子葉前期Ⅲ，少數(shù)處于Ⅱ階段，而未觀察到多胚現(xiàn)象，也未發(fā)現(xiàn)有胚胎處于子葉前期Ⅰ；7月8日的材料中，未成熟胚多處于子葉期Ⅰ；7月15日時，除極少數(shù)處于子葉期Ⅰ和子葉前期Ⅲ的胚胎外，絕大多數(shù)胚的形態(tài)已接近成熟。

相較而言，日12×興9家系胚胎的發(fā)育并不完全同步，7月1日采集的材料中即有形態(tài)學(xué)上成熟的胚胎出現(xiàn)；而7月15日采集的材料，仍可觀察到早期原胚；并且該家系除7月8日采集的材料外，其余3次采集的材料中均觀察到多胚現(xiàn)象；同時，4次采集的材料都未觀察到處于子葉期Ⅰ的胚。此外，通過對比觀察還發(fā)現(xiàn)日12×興9的合子胚較日5而言其形態(tài)成熟更早，這可能是由于日5的雌球花進入可授粉期或受精期更早，也可能是由立地條件的差異致使發(fā)育基礎(chǔ)不一致而引起的。

表1　不同時期采集的2個落葉松家系各發(fā)育階段合子胚的百分率比較　%

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標準差；同行不同字母表示在0.05水平上差異顯著。

2.2種子質(zhì)量的變化

對不同時期采集的日5、日12×興9兩個家系的10粒種子的質(zhì)量進行測量，其結(jié)果(表2)表明，兩個落葉松家系種子的質(zhì)量均隨生長周期的延長而增加，但兩者種子質(zhì)量增加的過程區(qū)別明顯。

日5落葉松家系種子的質(zhì)量在6月24至7月8日這14天內(nèi)增加并不明顯，而7月15日與之前采集的種子的質(zhì)量則表現(xiàn)出明顯差異，其質(zhì)量較7月8日的種子迅速增加了81.45%。日12×興9落葉松家系種子的質(zhì)量變化則相對較為連續(xù)，在6月24至7月8日這14 d內(nèi)，該家系種子的質(zhì)量持續(xù)增加，至7月8日時其種子質(zhì)量與15日采集的日5種子質(zhì)量并無顯著差別，且其質(zhì)量在7 d后無明顯變化，這與鏡檢結(jié)果相吻合。

2.3未成熟胚長度的變化

不同時期采集的日5、日12×興9兩個家系落葉松的未成熟胚長度的變化明顯(表2)，其長度均隨生長周期增加而增加。其中日5落葉松前3次采集的未成熟胚長度增加較緩，而在7月8日至15日的一周內(nèi)其長度迅速增長至成熟胚長度。日12×興9前3次采集的未成熟胚的長度均高于日5，且7月8日時該家系胚胎就已接近成熟胚的長度。這與種子質(zhì)量的變化趨勢相似，也與二者間散粉期的差異及胚胎發(fā)育的鏡檢結(jié)果相一致。

表2　不同時期采集的2個落葉松家系的種子質(zhì)量、多胚率及胚胎長度變化比較

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標準差；同列不同字母表示在0.05水平上差異顯著。

2.4多胚現(xiàn)象的發(fā)生

種子植物通常只有一個胚，而在胚珠中含有兩個或兩個以上胚的現(xiàn)象被稱為多胚現(xiàn)象。因為大多數(shù)裸子植物的卵細胞含有2個以上可同時受精的頸卵器，也有部分松柏類植株的胚珠內(nèi)會同時存在幾個可受精的卵細胞，故多胚現(xiàn)象在裸子植物胚胎發(fā)育過程中是普遍存在的。但這些多胚由于在胚胎發(fā)育的過程中彼此間競爭生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，所以大部分的胚胎會敗育或被吸收，最后僅有1個幼胚能夠正常分化并發(fā)育至成熟，很少有2個或更多的胚胎能夠同時發(fā)育成熟。

本研究中，我們發(fā)現(xiàn)落葉松胚胎發(fā)育的過程中也存在多胚現(xiàn)象，其多胚一般為“一大一小”或“一大幾小”形式存在，且很少有發(fā)育程度相似的胚胎成對或同時出現(xiàn)。測量發(fā)生多胚現(xiàn)象的胚胎長度為130.15～673.62 μm，平均長度為(341.49±144.91)μm。進一步對多胚間胚長的極差進行分析，其最小極差為5.99 μm，最大為420.46 μm，平均為(183.74±117.40)μm。

不同落葉松家系能夠觀測到多胚現(xiàn)象發(fā)生的時間不同(表2)，對日5落葉松而言多胚現(xiàn)象集中發(fā)生在7月24日采集的材料中，其發(fā)生率高達69.67%；而對于日12×興9，發(fā)生多胚現(xiàn)象的時間范圍更廣泛，分析表明其多胚率雖然隨采集時間延后而在25%～12.5%之間略微降低，但不同采集時間對其多胚率影響并不顯著(p=0.621)。結(jié)合鏡檢結(jié)果，分析造成二者間這種差異的原因可能是由于雜種落葉松胚胎發(fā)育不同步造成的。

2.5胚性愈傷組織的誘導(dǎo)

對接種的外植體進行觀察，發(fā)現(xiàn)不同時間采集的外植體在誘導(dǎo)胚性愈傷組織的過程中所誘導(dǎo)出的愈傷組織在形態(tài)上是不同的。

6月24日及7月1日采集的材料多處于子葉前期，接種時未將胚與胚乳分離。接種后4周內(nèi)多數(shù)外植體無明顯變化，僅少數(shù)外植體的胚乳會形成一端凸起、質(zhì)地較硬的白色愈傷或膨大的黃色愈傷，這種黃色愈傷在隨后的培養(yǎng)中會迅速褐化。接種6周左右部分外植體的胚乳切口處會有無色透明、似晶體且表面有絲狀凸起物的愈傷伸出，這種愈傷組織通過鏡檢可以觀察到ESM結(jié)構(gòu)，說明該種愈傷有繼續(xù)分化形成體胚的潛在能力，故為胚性愈傷組織。

7月8日及15日采集的胚發(fā)育相對成熟，接種時胚與胚乳是相對分離的。接種后7 d左右，部分外植體即有變化發(fā)生，其胚胎頂端有白色、米黃色或淺綠色、表面松軟而內(nèi)部質(zhì)地較硬的愈傷組織形成，鏡檢發(fā)現(xiàn)這種愈傷細胞排列松散且無胚性細胞存在，是典型的非胚性愈傷組織。伴隨頂部的變化，部分胚的下胚軸也會形成一種透明或白色半透明、極難分離的愈傷組織，這種愈傷組織在鏡檢的幾個樣品中僅發(fā)現(xiàn)含有排列整齊的類似胚柄細胞的細胞團，而并未發(fā)現(xiàn)有胚性細胞存在，并且這種愈傷在連續(xù)的繼代中會逐漸褐化死亡或轉(zhuǎn)變成白色不透明的愈傷，根據(jù)該愈傷形成的位置，推測其可能是由于下胚軸內(nèi)部細胞在外源激素的刺激下快速生長而突破表層細胞束縛而形成的細胞團結(jié)構(gòu)，是一種非胚性愈傷組織。

本次試驗的13個家系中，共有6個家獲得了胚性愈傷組織(表3)，但其誘導(dǎo)率均較低，其中7月1日采集的日5×長77-1未成熟胚的胚性愈傷誘導(dǎo)率最高，達到13.93%。

未成熟胚的胚性愈傷誘導(dǎo)率與取材時間相關(guān)，能夠誘導(dǎo)出胚性愈傷的未成熟胚主要是在7月1日及以前采集的。運用PASW Statistics 18軟件對采集時間與13個落葉松家系胚性愈傷誘導(dǎo)率進行相關(guān)性分析。結(jié)果表明，不同采集時間的未成熟胚其胚性愈傷誘導(dǎo)率在0.01水平差異顯著(p=0)，并且胚性愈傷的誘導(dǎo)率與取材時間呈負相關(guān)，即材料的采集時間越晚胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率就越低。

對相同時間取材的6個落葉松家系的胚性愈傷誘導(dǎo)率進行比較(表3)發(fā)現(xiàn)，不同家系未成熟胚的胚性愈傷的誘導(dǎo)率除7月8日外均表現(xiàn)出差異。6月24日的材料中，有4個家系誘導(dǎo)出胚性愈傷組織，其誘導(dǎo)率日5×興9>日5×長77-1>日5>長73-44；7月1日有3個家系誘導(dǎo)出胚性愈傷，誘導(dǎo)率日5×長77-1>日5×興9>日5；7月8日未有家系誘導(dǎo)出胚性愈傷；而7月15日僅有日12×興9形成胚性愈傷。

1.胚性愈傷組織；2.非胚性愈傷組織；3.EMS結(jié)構(gòu)；4.非胚性細胞。

表3不同采集時間對落葉松胚性愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

%

注：同列不同字母表示在0.05水平上差異顯著。

2.6形態(tài)學(xué)變化與胚性愈傷誘導(dǎo)率的相關(guān)性

對不同時間采集的日5、日12×興9兩個家系落葉松材料的形態(tài)學(xué)特征，即種子質(zhì)量、胚胎長度及多重胚率與胚性愈傷誘導(dǎo)率之間進行相關(guān)性分析(表4)。結(jié)果表明：1、胚胎長度和種子質(zhì)量與其散粉后發(fā)育的時間呈現(xiàn)出極顯著(p=0.008)和顯著(p=0.023)的正相關(guān)，且胚胎的長度與種子質(zhì)量呈極顯著正相關(guān)(p=0.001)；2、多重胚發(fā)生的概率與其散粉后發(fā)育的天數(shù)、長度及種子質(zhì)量呈負相關(guān)；3、胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率與散粉后天數(shù)及胚胎長度呈負相關(guān)，而與多胚發(fā)生率呈顯著的正相關(guān)(p=0.028)。

表4不同發(fā)育天數(shù)的種子形態(tài)特征及胚性愈傷誘導(dǎo)率間的相關(guān)性

相關(guān)性多重胚率種子質(zhì)量胚胎長度散粉后發(fā)育天數(shù)種子質(zhì)量-0.370胚胎長度-0.5310.927**散粉后發(fā)育天數(shù)-0.0880.777*0.845**胚性愈傷誘導(dǎo)率0.761*0.142-0.078-0.085

注：表中** 表示在0.01水平上差異顯著；*表示在0.05水平上差異顯著。

3結(jié)論與討論

在先前對落葉松胚性愈傷組織誘導(dǎo)的研究中，前人針對不同的問題分別進行了深入研究。其中，齊力旺等[3]對華北落葉松未成熟胚的胚性愈傷誘導(dǎo)與2,4-D、BA、KT質(zhì)量濃度的關(guān)系進行分析；韓登媛等[2]則對影響華北落葉松成熟胚的胚性愈傷組織誘導(dǎo)因素進行研究；而李旦等[15]則以華北落葉松及日本落葉松為材料對球果的各種特征和胚性愈傷組織誘導(dǎo)率的關(guān)系進行了分析。

本研究以13個家系不同時間采集的未成熟胚作為材料進行胚性愈傷的誘導(dǎo)，其中長73-44、日5、日5*、日5×長77-1、日5×興9、日12×興9等6個家系誘導(dǎo)出了胚性愈傷組織。落葉松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)存在種間差異，本試驗中供試的3種落葉松，即日本落葉松(日5)、長白落葉松(長73-44)、興安落葉松(興12、興5×興9)在相同條件下的誘導(dǎo)率分別為5.63%,5.34%及0%。不同家系間胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率也存在差異，日5×長77-1家系的胚性愈傷誘導(dǎo)率可達13.93%，而在相同條件下日5×長77-3 CA-1等幾個家系的雜種落葉松卻未獲得胚性愈傷組織。這與王偉達等[1]在對5個雜種落葉松家系進行胚性愈傷的誘導(dǎo)中發(fā)現(xiàn)不同家系的雜種落葉松誘導(dǎo)胚性愈傷組織的能力并不相同的結(jié)論相一致。此外，未成熟胚個體的基因型也是影響胚性愈傷組織導(dǎo)的因素，日5和日5*是同一立地條件下相同無性系的不同單株，但其自由授粉形成的胚胎在相同的培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)率并不相同。通常認為，造成誘導(dǎo)率的差異除遺傳因素的影響外還有培養(yǎng)條件的影響，如相同基因型個體在不同培養(yǎng)基條件下的差異。綜上所述，在特定的培養(yǎng)條件下，對誘導(dǎo)材料種質(zhì)(基因型)的選擇會影響胚性愈傷誘導(dǎo)的結(jié)果。

齊力旺[16]認為華北落葉松合子胚愈傷組織的發(fā)生能力與發(fā)育時期、狀態(tài)有關(guān)。本研究也得到了相似結(jié)果，即的不同采集時間的合子胚發(fā)育狀況不同，誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織形態(tài)也不盡相同。胚性愈傷的誘導(dǎo)率也與取材時間相關(guān)，Klimaszewska[5]認為落葉松受精后2～3周的未成熟合子胚最適宜用于胚性愈傷組織誘導(dǎo)。在對其他針葉樹的研究中[17-18]，也發(fā)現(xiàn)胚性愈傷的誘導(dǎo)存在窗口期，并與胚的發(fā)育階段相關(guān)。本研究中未成熟胚的最佳取材時間各落葉松家系間不同，但獲得胚性愈傷的未成熟胚材料主要是在7月1日及以前采集的。同時，對日5、日12×興9兩個家系未成熟胚的形態(tài)學(xué)指標與胚性愈傷誘導(dǎo)率之間的相關(guān)性分析表明，胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率與散粉天數(shù)及胚胎長度呈負相關(guān)，而與多胚發(fā)生率呈現(xiàn)顯著正相關(guān)。此外，在本研究中還觀察到原胚團的表面存在大量的裂生多胚。因此推測，落葉松胚性愈傷組織的形成可能與多胚現(xiàn)象(特別是裂生多胚)之間存在一定關(guān)聯(lián)，其誘導(dǎo)率可能受誘導(dǎo)材料發(fā)育狀態(tài)的影響。而在實際操作過程中如以易發(fā)生多胚現(xiàn)象的家系為材料，或者選擇發(fā)育程度較低、多胚尚處于共存時期(即處于裂生多胚期)的未成熟胚進行誘導(dǎo)可能更易獲得胚性愈傷組織。

參考文獻

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收稿日期：2015年10月16日。

作者簡介：第一宋躍，男，1991年6月生，林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業(yè)大學(xué))，碩士研究生。E-mail：songyuenefu@163.com。通信作者：李淑娟，林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業(yè)大學(xué)),高級工程師。E-mail：lishujuan@126.com。

1)國家“863”計劃項目(2013AA102704-04-03);東北林業(yè)大學(xué)林木遺傳育種國家重點實驗室創(chuàng)新項目(2015B03)。

責(zé)任編輯：潘華。