馬長華 楊 歡 羅振中

電針對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)的影響

馬長華 楊 歡 羅振中

目的 探析電針對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)的影響。方法 選擇成年大鼠進(jìn)行篩選，選取符合條件60只按照數(shù)字隨機(jī)分配的原則進(jìn)行均分(15只/組)分為四組：對照組、模型組、電針組、假電針組，篩選出來的大鼠中進(jìn)行造模手術(shù)，在造模成功的大鼠中分為模型組、電針組、假電針組，分別在手術(shù)前后治療后觀察大鼠的行為并測定其疼痛。10天后開始進(jìn)行電針治療實(shí)驗(yàn)，通過熒光標(biāo)記方法檢測大鼠脊髓p38MAPK的表達(dá)。結(jié)果 對照組中大鼠的痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)無變化，但是模型組和假電針組降低明顯，電針組在電針治療上均顯著升高且電針治療后大鼠的運(yùn)動較模型組和假電針組低。電針組大鼠的脊髓p38MAPK表達(dá)高于模型組和假電針組。結(jié)論 電針治療有效減輕對糖尿病神經(jīng)病理性大鼠的疼痛，抑制脊髓p38MAPK表達(dá)的影響。

電針； 糖尿病神經(jīng)病理性疼痛； 脊髓p38MAPK

糖尿病神經(jīng)病理性疼痛是糖尿病患者最常見、最復(fù)雜和最嚴(yán)重的并發(fā)癥，主要是糖尿病慢性高血糖狀態(tài)及其所致各種病理生理改變而導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，可累及全身神經(jīng)系統(tǒng)，包括感覺神經(jīng)、運(yùn)動神經(jīng)和自主神經(jīng)。臨床上以肢體疼痛、感覺減退、麻木、灼熱、冰涼等，也可表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺過敏、痛覺超敏，甚至發(fā)展至糖尿病足潰瘍或需要截肢，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。電針療法是利用刺入身體穴位的毫針上，用電針機(jī)通以微量低頻脈沖電流的一種治療方法，對神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹等的治療效果良好。為了更好的探究電針對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)的影響，本組選定大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來作進(jìn)一步探討，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取的60只成年大鼠，按照數(shù)字隨機(jī)分配為原則(15只/組)分為四組，分別是對照組、模型組、假電針組、電針組。最大重量的是260 g，最小的是190 g，平均重量(221.26±3.58)g。大鼠模型的建立：將大鼠禁食24小時(shí)后，將STZ溶液按55 mg/kg的劑量一次性注射大鼠體內(nèi)。36小時(shí)候用血糖儀測量大鼠的血量指標(biāo)，>17.6 mol/L的大鼠成為糖尿病大鼠模型。再注射2%的戊巴比妥鈉給大鼠進(jìn)行麻醉，快速去脊髓，進(jìn)行熒光標(biāo)記p38MAPK。

1.2 方法

每天固定時(shí)間利用電針法對電針組大鼠進(jìn)行電針刺激治療，從建模成功后7天開始，將模型組大鼠置于自制的裝置中，盡可能將四肢以及尾部暴露在外，但大鼠安靜后，始每天刺激持續(xù)時(shí)間15min，連續(xù)電針半個(gè)月，觀察大鼠行為，記錄飲食、大便、泌尿等日常行為；并測定大鼠疼痛感以及觀察熒光標(biāo)記的p38MAPK在脊髓中的表達(dá)。

在建模前和建模后2天、4天、5天進(jìn)行行為檢測，每天固定的時(shí)間進(jìn)行觀察大鼠的行為(8：00-11:00)。

通過免疫組化方式的檢驗(yàn)，p38MAPK的陽性細(xì)胞因子。

1.3 疼痛測定運(yùn)動評分標(biāo)準(zhǔn)

運(yùn)動無障礙為0，隨著運(yùn)動障礙的提升其評定分也隨之升高。對大鼠的疼痛進(jìn)行記錄，無變化(0分)，隨著疼痛度其評定相應(yīng)增加。并記錄體重，飲食等情況，p38MAPK的陽性細(xì)胞因子。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠大鼠疼痛對比

模型組大鼠出現(xiàn)了疼痛變化，一些大鼠表現(xiàn)出煩躁和狂躁的狀態(tài)更有不能行動的大鼠出現(xiàn)；但在電針組大鼠出現(xiàn)的煩躁現(xiàn)象較少幾乎沒有出現(xiàn)不能行動的大鼠，詳見表1。

表1 大鼠疼痛評定值

2.2 各組大鼠運(yùn)動對比

對照組中大鼠沒有出現(xiàn)不適的運(yùn)動功能障礙。其余三組在建模后的2天時(shí)間內(nèi)均出現(xiàn)了明顯運(yùn)動功能受損，模型組和假電針組大鼠運(yùn)動障礙顯著升高，而電針組大鼠的運(yùn)動障礙從第3次電針過后有所改善，電針組較模型組和假電針組的運(yùn)動評分較回緩，見表2。

表2 大鼠運(yùn)動評定值

2.3 各組大鼠p38MAPK表達(dá)對比

對照組中大鼠脊髓的p38MAPK陽性細(xì)胞因子的陽性率較低(6.78%±1.23%)，模型組中的(63.23%±2.56%)，假電針組中的(68.41%±1.02%)，電針組中的(14.65%±1.88%),電針組中p38MAPK陽性細(xì)胞因子的陽性率明顯低于模型組和假電針組，詳見表3。

表3 p38MAPK表達(dá)變化 (%)

3 討論

糖尿病周圍神經(jīng)痛是以疼痛為主要表現(xiàn)的一類神經(jīng)病變，屬于神經(jīng)病理性疼痛的一種。糖尿病周圍神經(jīng)病變的患者中約有80%的患者正經(jīng)受著神經(jīng)痛的折磨。糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)生緩慢，其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚不能完全闡明。由于糖尿病周圍神經(jīng)病變是一種常見的神經(jīng)病理性疼痛類型，發(fā)病機(jī)制可能與神經(jīng)病理性疼痛相似。在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生過程中，中樞敏化發(fā)揮重要作用。為減輕患者的病痛折磨，本組針對大鼠進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)研究，利用電針的治療手段來研究本課題。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，對蛋白質(zhì)、核酸及細(xì)胞標(biāo)記的要求越來越高，傳統(tǒng)的同位素標(biāo)記方法已不能適應(yīng)當(dāng)今的發(fā)展。而發(fā)展起來的熒光探針技術(shù)已經(jīng)在蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞檢測及免疫分析等方面顯現(xiàn)出巨大的潛能。熒光探針技術(shù)具備高度靈敏性和極寬的動態(tài)響應(yīng)時(shí)間，可以使研究人員高靈敏和高選擇性地檢測復(fù)雜生物分子，包括活細(xì)胞中的特定成分。

電針療法適用于毫針刺法的主治病證，在中醫(yī)領(lǐng)域認(rèn)為其具有針灸和治療的優(yōu)點(diǎn)，其安全性和療效已經(jīng)得到認(rèn)證。電針可以提升患者痛閾，且具鎮(zhèn)痛效果，電針在治療過程中對機(jī)體產(chǎn)生電的生理效應(yīng)，維持較長時(shí)間的針感，為大部分患者所接受。針刺鎮(zhèn)痛能提高了痛閾，增加了疼痛的耐受力，降低疼痛的敏感性。

本研究以大鼠為研究對象，成功將正常大鼠進(jìn)行建模，電針組大鼠的疼痛評定和運(yùn)動障礙評估呈顯著下降趨勢，通過免疫組檢測的熒光標(biāo)記p38MAPK陽性因子陽性率將其他兩組低，本研究試驗(yàn)結(jié)果與某些專家的研究具有一致性。

分析得出MAPK信號傳輸是從細(xì)胞表面通過細(xì)胞壁到細(xì)胞質(zhì)在到細(xì)胞核的傳導(dǎo)者，通過免疫組化方法對熒光標(biāo)記的追蹤，p38MAPK完成細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成以及受體表達(dá)的調(diào)整，在整個(gè)細(xì)胞中扮演著傳遞者的身份。在模型組中觀察到熒光標(biāo)記的因子和蛋白質(zhì)合成水平顯著提升，p38MAPK在刺激下對細(xì)胞的能量活性其直接作用。p38MAPK的表達(dá)隨著疼痛程度的提升表達(dá)變得強(qiáng)烈，與一些專家研究的結(jié)果一致，深度證明p38MAPK在糖尿病神經(jīng)性疼痛中的發(fā)展具有至關(guān)重要意義。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)使用的模型組采取對大鼠影響小為主要原則，更貼近臨床醫(yī)學(xué)需求，電針治療有效減輕對糖尿病神經(jīng)病理性大鼠的疼痛，抑制脊髓p38MAPK表達(dá)的影響。

[1] 蔡振華.電針減輕神經(jīng)病理性疼痛大鼠p-p38MAPK表達(dá)[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2012.

[2] 蔡振華，劉金鋒，孫天小，等.電針對大鼠神經(jīng)病理性疼痛及背根神經(jīng)節(jié)中p38MAPK蛋白表達(dá)的影響[J].中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志,2013,19(5):259-264.

[3] 李翠賢，閆麗萍，易建良，等.電針對神經(jīng)病理性疼痛大鼠的干預(yù)作用及其脊髓EAAs含量的影響[J].上海針灸雜志,2008,27(1):45-48.

[4] 趙 聰，余劍波.電針對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受體表達(dá)的影響[J].國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志,2013,34(1).

[5] 王志福，俞向梅，龔德貴，等.身痛逐瘀湯對大鼠神經(jīng)病理性疼痛及脊髓p38MAPK蛋白表達(dá)的影響[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015(2):87-90.

[6] 陳丁生，朱麗霞.電針治療對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)Na^+-K^+/ATPase活性的影響[J].針刺研究,1999(3):202-205.

[7] 范順意，李亦梅，席 鵬.糖尿病大鼠神經(jīng)病理性疼痛的相關(guān)危險(xiǎn)因素的分析中國糖尿病雜志[J].2015(5):456-458.

[8] 劉國成，袁曉蘭，趙莉娜，等.P38MAPK、Nox1ROSmRNA在早發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2014,14(1):16-19.

江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號：2015A024)

楊 歡

R365

A

10.3969/j.issn.1671-332X.2016.10.008

馬長華 楊 歡 羅振中 ： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 江西南昌 330006