顧華芬　張麗文　梅小會(huì)　陳亞萍

200240　上海市，復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科

?

·論著·

FS、ENA-78和RANTES在子宮內(nèi)膜異位癥患者早期檢測(cè)中的意義

顧華芬張麗文梅小會(huì)陳亞萍

200240上海市，復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科

【摘要】目的觀察卵泡抑素(FS)、上皮來(lái)源的中性粒細(xì)胞活化肽(ENA-78)和T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)性激活因子(RANTES)在子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)患者檢測(cè)中的意義。方法EMs患者120例為EMs組。根據(jù)美國(guó)生育協(xié)會(huì)修正分期法(r-AFS)分期分為Ⅰ期19例，Ⅱ期36例，Ⅲ期39例和Ⅳ期26例，根據(jù)痛經(jīng)評(píng)分分為0分26例，1分48例，2分31例和3分15例。另選擇同期在確診為良性腫瘤的患者30例為在位組。選擇同期在我院行健康體檢的正常女性30例為對(duì)照組。觀察3組的FS，ENA-78和RANTES水平變化，EMs患者血清FS，ENA-78和RANTES水平與痛經(jīng)分期和評(píng)分的關(guān)系及各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析。結(jié)果EMs組的FS，ENA-78和RANTES水平明顯高于在位組和對(duì)照組(P<0.01)，在位組明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。機(jī)體的FS，ENA-78和RANTES水平隨著EMs分期和痛經(jīng)評(píng)分的升高而升高(P<0.01)。EMs組的FS水平與ENA-78和RANTES水平呈正相關(guān)(r值分別為0.658、0.568，P<0.05)ENA-78水平與RANTES水平呈正相關(guān)(r=0.725，P<0.05)。結(jié)論FS、ENA-78和RANTES參與了EMs發(fā)生發(fā)展的過(guò)程，各指標(biāo)之間相互協(xié)同，對(duì)于早期診斷EMs具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜異位癥；早期診斷；痛經(jīng)；卵泡抑素

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是常見(jiàn)病，多發(fā)病，常常導(dǎo)致盆腔炎癥和纖維化，嚴(yán)重影響女性生理、心理和社會(huì)的健康狀態(tài)，由于發(fā)病機(jī)制尚不明確，EMs的治療仍然十分困難。研究表明，EMs的發(fā)病與機(jī)體的炎癥、免疫和盆腔的微環(huán)境改變等具有明顯的聯(lián)系[1]。卵泡抑素(FS)是對(duì)垂體卵泡刺激素具有抑制功能的蛋白質(zhì)，受多種細(xì)胞因子的調(diào)控，有研究證實(shí)血清FS水平對(duì)EMs具有臨床診斷價(jià)值，其靈敏度高于CA125[2]。上皮來(lái)源的中性粒細(xì)胞活化肽(ENA-78)是一種重要的炎性介質(zhì)，具有重要趨化和激活中性粒細(xì)胞的趨化因子，作為炎癥網(wǎng)絡(luò)中的重要環(huán)節(jié)，對(duì)新生血管的形成具有重要的調(diào)節(jié)作用[3]。T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)性激活因子(RANTES)是一種對(duì)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)和淋巴細(xì)胞具有選擇性的趨化因子，可以活化巨噬細(xì)胞，參與集體的免疫反應(yīng)[4]。本研究通過(guò)對(duì)EMs患者機(jī)體的FS、ENA-78和RANTES水平的研究，觀察FS、ENA-78和RANTES水平與EMs發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2014年1月至2015年6月在我院就診的EMs的患者120例為EMs組，均未經(jīng)激素和藥物治療，年齡18～40歲，平均年齡(35±4)歲；平均體重(56±5)kg；月經(jīng)周期(32±3)d。根據(jù)美國(guó)生育協(xié)會(huì)修正分期法(r-AFS)分期分為Ⅰ期19例，Ⅱ期36例，Ⅲ期39例和Ⅳ期26例，根據(jù)痛經(jīng)評(píng)分0分26例，1分48例，2分31例和3分15例。另選擇同期在我院確診為良性腫瘤的患者30例為在位組，年齡18～40歲，平均年齡(35±3)歲；平均體重(56±6)kg；月經(jīng)周期(31±3)d；術(shù)后病理分別為卵巢漿液性囊腺瘤12例，卵巢黏液性囊腺瘤7例，卵巢成熟畸胎瘤6例和輸卵管中腎管囊腫5例。選擇同期我院行健康體檢的正常女性30例為對(duì)照組，平均年齡(36±3)歲；平均體重(56±6)kg；月經(jīng)周期(31±4)d。所有入組者均知情同意，并排除：(1)有肝炎，結(jié)核和急性肺炎等急性感染；(2)心肝腎等重要臟器功能不全；(3)高血壓，糖尿病和惡性腫瘤等慢性疾??；(4)生殖器官發(fā)育不良。3組年齡、體重和月經(jīng)周期等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1血液標(biāo)本的儲(chǔ)備:EMs組和在位組入院第1天和健康體檢者當(dāng)天抽取空腹血液2～3 ml，以轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，離心半徑為10 cm，離心20 min，分離血清，并保存于-70℃的冰箱中待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定FS、ENA-78和RANTES，采用Freedom Evolyzer 2150 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，操作按照試劑盒進(jìn)行操作。試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R&D 公司。

1.2.2痛經(jīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：入院時(shí)進(jìn)行痛經(jīng)評(píng)分：無(wú)痛經(jīng)為0分；有痛經(jīng)，但無(wú)需服藥，不影響正常的工作和生活為1分；痛經(jīng)需要口服藥物才能緩解，對(duì)日常的生活和工作有影響為2分；痛經(jīng)需要服藥，影響正常生活，不能進(jìn)行正常的工作。

1.2.3觀察指標(biāo)：觀察EMs組，在位組和對(duì)照組的FS，ENA-78和RANTES水平變化，EMs患者血清FS，ENA-78和RANTES水平與痛經(jīng)分期和評(píng)分的關(guān)系，各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.13組FS、ENA-78和RANTES水平的變化EMs組的FS、ENA-78和RANTES水平明顯高于在位組和對(duì)照組(P<0.01)，在位組明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表13組FS、ENA-78和RANTES水平比較

組別FS(ng/L)ENA-78(mg/L)RANTES(ng/L)對(duì)照組(n=30)55±9 0.87±0.1527±10 在位組(n=30)134±12*1.49±0.38*44±10*EMs組(n=120)758±24*#2.84±0.79*#128±28*# F值32179.205190.367455.535 P值0.0000.0000.000

注：與對(duì)照組比較，*P<0.01；與在位組比較，#P<0.01

2.2FS、ENA-78和RANTES水平與EMs分期的關(guān)系機(jī)體的FS、ENA-78和RANTES水平隨著EMs分期的增高而升高(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2FS，ENA-78和RANTES水平與EMs分期的關(guān)系

r-AFS分期FS(ng/L)ENA-78(mg/L)RANTES(ng/L)Ⅰ期(n=19)565±171.32±0.2879±17Ⅱ期(n=36)644±28*2.14±0.87*113±22*Ⅲ期(n=39)817±23*#3.25±0.91*#136±32*#Ⅳ期(n=26)970±26*#△4.31±1.19*#△171±34*#△ F值1362.01852.39547.044 P值0.0000.0000.000

注：與Ⅰ期比較，*P<0.01；與Ⅱ期比較，#P<0.01；與Ⅲ期比較，△P<0.01

2.3FS，ENA-78和RANTES水平與痛經(jīng)評(píng)分的關(guān)系FS，ENA-78和RANTES水平與EMs患者痛經(jīng)評(píng)分的升高而升高(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3FS，ENA-78和RANTES水平與痛經(jīng)評(píng)分的關(guān)系

痛經(jīng)評(píng)分FS(ng/L)ENA-78(mg/L)RANTES(ng/L)0(n=26)583±181.27±0.4387±181(n=48)675±25*2.18±0.78*126±23*2(n=31)835±28*#4.09±0.97*#143±34*#3(n=15)1168±31*#△5.09±1.13*#△174±38*#△ F值2127.468108.67037.146 P值0.0000.0000.000

注：與0分比較，*P<0.01；與1分比較，#P<0.01；與2分比較，△P<0.01

2.4EMs組的FS、ENA-78和RANTES水平之間的相關(guān)性分析EMs組的FS水平與ENA-78和RANTES水平呈正相關(guān)(r值分別為0.658和0.568，P<0.05)，ENA-78水平與RANTES水平呈正相關(guān)(r=0.725，P<0.05)。

3討論

EMs是婦科的常見(jiàn)病，由于病因復(fù)雜，多種因素參與了其發(fā)生發(fā)展過(guò)程，致診斷困難，早期誤診率高達(dá)70%以上。目前腹腔鏡仍是本病惟一的確診方法，但由于為有創(chuàng)，費(fèi)用高和需要麻醉等缺點(diǎn)，導(dǎo)致早期診斷率不高，治療效果欠佳。血清標(biāo)志物具有無(wú)創(chuàng)，費(fèi)用低，可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，可以通過(guò)血清標(biāo)志物含量推測(cè)EMs的發(fā)生發(fā)展，對(duì)本病的早期診斷和治療具有重要意義，可以減少EMs病情的延誤和提高EMs的早期診斷率。本組研究表明EMs機(jī)體的FS水平明顯高于在位組和對(duì)照組，并且隨著EMs分期和痛經(jīng)評(píng)分增加而出現(xiàn)明顯增加，說(shuō)明FS參與了EMs疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，提示FS在診斷EMs中具有重要意義。FS是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β家族的單體蛋白，通過(guò)拮抗激活激素來(lái)發(fā)揮重要的生理功能。FS主要的存在于卵泡、胎盤、子宮內(nèi)膜和胰腺等組織中，以卵泡內(nèi)最多。FS參與EMs發(fā)病的作用并不明確，有研究顯示，F(xiàn)S對(duì)子宮內(nèi)膜組織的分化，間質(zhì)的侵襲，免疫調(diào)節(jié)和凋亡方面具有重要作用，并參與了EMs的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[5]。FS在EMs中升高，可能與子宮內(nèi)膜分泌FS，并釋放入血，從而引起血清中的FS水平明顯升高[6]。血清中的FS水平升高，對(duì)活化素的拮抗作用明顯增強(qiáng)，從而加大子宮內(nèi)膜的損害，而血清活化素表達(dá)的升高，也同時(shí)促進(jìn)外周血FS水平的升高。

本組研究表明EMs組的ENA-78水平明顯高于在位組和對(duì)照組，EMs組的血清ENA-78水平隨著EMs分期和痛經(jīng)評(píng)分升高而升高，說(shuō)明ENA-78參與了EMs疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，是發(fā)生EMs局部微環(huán)境中的重要細(xì)胞因子，微環(huán)境中的細(xì)胞因子相互作用和相互促進(jìn)，直接或者間接促進(jìn)異位內(nèi)膜和間質(zhì)的增值，對(duì)于診斷EMs具有重要意義[7, 8]。與文獻(xiàn)報(bào)道顯示EMs患者的ENA-78水平明顯高于對(duì)照組，并且與EMs的分期具有明顯的相關(guān)性一致[9]。ENA-78具有趨化中性粒細(xì)胞，與中性粒細(xì)胞的特異性受體結(jié)合，促進(jìn)中性粒細(xì)胞分泌更多的生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子，延緩中性粒細(xì)胞的凋亡，具有多種調(diào)節(jié)和免疫疊加的作用，形成復(fù)雜的細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)[10]。ENA-78能夠直接促進(jìn)EMs異位內(nèi)膜新生血管的形成，間接促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)，為異位子宮內(nèi)膜的種植奠定了基礎(chǔ)。ENA-78誘發(fā)異位內(nèi)膜與腹膜間皮細(xì)胞的黏附，激活基質(zhì)金屬蛋白酶，并促進(jìn)降解細(xì)胞外基質(zhì)，有利于異位內(nèi)膜種植在腹膜和其他結(jié)締組織，刺激間質(zhì)細(xì)胞增生[11]。ENA-78的產(chǎn)生受到多種細(xì)胞因子和卵巢激素的調(diào)節(jié)，作用于中心粒細(xì)胞，對(duì)于維持EMs的發(fā)生發(fā)展具有重要作用。

本研究表明，EMs患者機(jī)體的RANTES水平明顯高于在位組和對(duì)照組，并隨著EMs的分期和痛經(jīng)評(píng)分升高而升高，說(shuō)明RANTES水平的升高與EMs的發(fā)生發(fā)展具有重要聯(lián)系，與文獻(xiàn)報(bào)道RANTES與EMs分期和痛經(jīng)評(píng)分呈正相關(guān)[12,13]一致。RANTES作為趨化因子對(duì)中性粒細(xì)胞，單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等具有趨化和激活作用的細(xì)胞因子，參與機(jī)體的急慢性炎性反應(yīng)。有研究表明RANTES是一種巨噬細(xì)胞系統(tǒng)最強(qiáng)的細(xì)胞趨化因子，可以通過(guò)兩種不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑作用T細(xì)胞[14]：低濃度的RANTES作為一種典型的趨化蛋白，可引起鈣離子的內(nèi)流，導(dǎo)致細(xì)胞受體的極化和細(xì)胞遷移；高濃度的RANTES引起持續(xù)的鈣離子內(nèi)流，過(guò)度的磷酸化和細(xì)胞活化。RANTES升高通過(guò)活化和趨化巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞到異位灶中，分泌大量的細(xì)胞因子如白介素和腫瘤壞死因子等[15]，誘導(dǎo)異位內(nèi)膜表達(dá)大量的RANTES，而RANTES又進(jìn)一步趨化淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞到異位內(nèi)膜中。從而形成炎性細(xì)胞與RANTES相互作用形成的正反饋弧，大量的炎性細(xì)胞的聚集。又可以誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)，使免疫細(xì)胞的活性和數(shù)量出現(xiàn)明顯變化，分泌炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，參與局部血管形成、粘連和纖維化[16]。從而促進(jìn)異位內(nèi)膜的生長(zhǎng)，參與EMs的病理生理過(guò)程。

本組研究發(fā)現(xiàn)EMs患者的FS水平與ENA-78和RANTES水平呈正相關(guān)，ENA-78水平與RANTES水平呈正相關(guān)。說(shuō)明EMs的發(fā)生發(fā)展過(guò)程可能與多種細(xì)胞因子相互促進(jìn)，相互作用具有明顯的相關(guān)性，3個(gè)指標(biāo)可能在EMs的復(fù)雜機(jī)制中起到關(guān)鍵性橋梁作用，在形成EMs疾病的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中均具有重要意義，隨著對(duì)EMs研究的深入，有利于探索出診斷EMs的新方法，甚至為治療EMs找到新的靶點(diǎn)?？傊?，F(xiàn)S，ENA-78和RANTES參與了EMs發(fā)生發(fā)展的過(guò)程，各指標(biāo)之間相互協(xié)同，對(duì)于早期診斷EMs具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

1Guerriero S,Ajossa S,Minguez JA,et al.Diagnostic accuracy of transvaginal ultrasound for diagnosis of deep endometriosis regarding locations other than recto-sigmoid: systematic review and meta-analysis. Ultrasound Obstet Gynecol,2015,46:534-545.

2譚容容，吳潔，劉嘉茵. 激活素-抑制素-卵泡抑素系統(tǒng)與子宮內(nèi)膜異位癥所致排卵障礙的關(guān)系. 生殖醫(yī)學(xué)雜志,2010,19:452-456.

3陳煜岊，徐紅，覃錦耀，等. 上皮中性粒細(xì)胞活化肽與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系初探. 廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,23:406-407.

4范小斌，曹引麗，藺小賢，等. RANTES在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜的表達(dá)及其意義. 實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2012,28:1035-1038.

5徐小艷，洛若愚，邢輝. 激活素A和卵泡抑素在子宮內(nèi)膜異位癥中的診斷價(jià)值. 中國(guó)生育健康雜志,2015:119-122, 132.

6Reis FM,Luisi S,Abrao MS,et al.Diagnostic value of serum activin A and follistatin levels in women with peritoneal, ovarian and deep infiltrating endometriosis. Hum Reprod,2012,27:1445-1450.

7唐嗣信，方小玲. 子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中EPO及ENA-78的表達(dá)及意義. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2012,22:79-81.

8張文敏，趙艷麗，班開(kāi)斌，等.子宮內(nèi)膜異位癥患者RBP4與ENA-78的含量變化. 中華全科醫(yī)學(xué),2012,10:384-385.

9陳煜岊，徐紅，何中慧，等.上皮來(lái)源的中性粒細(xì)胞活化肽-78在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá). 廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,25:669-671.

10張嶺梅，劉風(fēng)華，王沂峰，等.ENA-78在子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液中的表達(dá). 廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,40:5-7.

11張嶺梅，劉風(fēng)華，王沂峰，等.子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者卵泡液中ENA-78的意義.河北醫(yī)藥,2012,34:2265-2266.

12Yuan DP,Gu L,Long J,et al.Shikonin reduces endometriosis by inhibiting RANTES secretion and mononuclear macrophage chemotaxis. Exp Ther Med,2014,7:685-690.

13Kim CH,Lee YJ,Kim JB,et al.Effect of Pioglitazone on Production of Regulated upon Activation Normal T-cell Expressed and Secreted (RANTES) and IVF Outcomes in Infertile Women with Endometriosis. Balsaenggwa Saengsig,2013,17:207-213.

14Yang Y,Zhang X,Zhou C,et al.Elevated immunoreactivity of RANTES and CCR1 correlate with the severity of stages and dysmenorrhea in women with deep infiltrating endometriosis. Acta Histochem,2013,115:434-439.

15林敏，王溢，董克，等. 子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中NF-κB和趨化因子MCP-1、RANTES的表達(dá). 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2014,30:577-579.

16周夏伶，何偉，王久蘭，等. 血清與腹腔液中趨化因子RANTES水平在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的臨床應(yīng)用.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,15:3119-3121.

Significance of FS, ENA-78 and RANTES in detection of patients with endometriosis

GUHuafen,ZHANGLiwen,MEIXiaohui,etal.

DepartmentofGynaecologyandObstetrics,TheFifthPeople’sHospitalofShanghaiCityAffiliatedtoFudanUniversity,Shanghai200240,China

【Abstract】ObjectiveTo observe the significance of follistatin (FS), epithelial neutrophil activating peptide (ENA)-78 and regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted (RANTES) in detection of patients with endometriosis (EMs).MethodsOne hundred and twenty patients with EMs, from January 2014 to June 2015, were served as EMs group, who were divided into stageⅠ(n=19), stageⅡ(n=36), stage Ⅲ (n=39) and stage Ⅳ (n=26) according to the revised American Fertility Society (r-AFS),moreover,they were divided into 0 score (n=26), 1 score (n=48), 2 scores (n=31) and 3 scores (n=15) according to Dysmenorrhea Scoring. Besides the 30 patients with benign tumors were selected as eutopic endometrium group and the other 30 healthy women were served as control group. The levels of FS, ENA-78 and RANTES were detected and compared among EMs group, eutopic endometrium group and control group, and the levels of FS, ENA-78 and RANTES were observed in different EMs stages and dysmenorrhea scores, furthermore, the correlation among different indexes was analyzed.ResultsThe levels of FS, ENA-78 and RANTES in EMs group were significantly higher than those in eutopic endometrium group and control group (P<0.01), which in eutopic endometrium group were significantly higher than those in control group (P<0.01). The levels of FS, ENA-78 and RANTES were increased,with the increase of EMs staging and dysmenorrhea scoring (P<0.01). The FS levels in EMs group were positively correlated to those of ENA-78 (r=0.658,P<0.05) and RANTES (r=0.568,P<0.05),moreover ENA-78 levels were positively correlated to those of RANTES (r=0.725,P<0.05).ConclusionFS, ENA-78 and RANTES are involved in the pathogenesis and development of EMs, with synergism effects among them,which play an important role in early diagnosis of EMs.

【Key words】endometriosis; early diagnosis; dysmenorrhea; follistatin

(收稿日期：2015-11-03)

【中圖分類號(hào)】R 711.71

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-7386(2016)10-1484-03

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.10.012