符 丹, 賴苗軍, 朱華強(qiáng), 徐澤民, 唐甩恩

(寧波市微循環(huán)與莨菪類藥研究所, 寧波315010)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

使用二氧化碳對大鼠施行安死術(shù)方法探索

符 丹, 賴苗軍, 朱華強(qiáng), 徐澤民, 唐甩恩

(寧波市微循環(huán)與莨菪類藥研究所, 寧波315010)

目的 探索用二氧化碳(CO2)處死大鼠的方法。方法 18只實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的清潔級SD大鼠分3組，每組6只，分別放入帶蓋的透明塑料盒內(nèi) ，此盒用家用燃?xì)廛浌苓B接CO2鋼瓶。緩緩地打開CO2減壓器上的閥門，至壓力表0.1 MPa位置。第一組: 半分鐘后關(guān)閉閥門，2 min后打開塑料盒; 第二組: 1 min后關(guān)閉閥門，2 min后打開塑料盒; 第三組: 1 min后關(guān)閉閥門，5 min后打開塑料盒。打開塑料盒后，每組都觀察5 min。結(jié)果 第一組大鼠打開塑料盒后，6只大鼠有心跳，1 min后全部蘇醒；第二組大鼠打開塑料盒后2只有心跳，4只無心跳，觀察5 min后6只大鼠沒有蘇醒，第三組大鼠6只無心跳，觀察5 min后6只大鼠沒有蘇醒。18只大鼠從放入塑料盒通入CO2至打開塑料盒蓋，一直非常安靜，沒有出現(xiàn)尖叫、逃竄等現(xiàn)象。結(jié)論 在塑料盒中通入1 min CO2, 5 min后打開塑料盒處死實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠, 是一種比較符合善待實(shí)驗(yàn)動物的安死術(shù)方法。

CO2; 大鼠; 安死術(shù)

實(shí)驗(yàn)動物的處死，傳統(tǒng)上多采用頸椎脫臼法、斷頭法、擊打法等，許多人認(rèn)為用物理方法處死動物雖不愉快或令人生厭，但考慮到其速度快，認(rèn)為這種方法可能更為人道[1]。隨著人類對動物保護(hù)意識的加強(qiáng)和動物福利倫理的要求，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r機(jī)采取適當(dāng)?shù)姆椒▽游锸┬邪菜佬g(shù)，確保使動物的痛苦降到最低。處死動物時盡可能減少動物的疼痛和痛苦或縮短疼痛和痛苦的持續(xù)時間，是一種發(fā)展的必然趨勢[2]。近幾年，使用CO2過度麻醉處死作為一種安死術(shù)的方法，在國內(nèi)有一定范圍的應(yīng)用[2-5], 涉及CO2處死動物的裝置有些復(fù)雜, 且大多是綜述, 具體操作存在一定的難度。雖然已經(jīng)確認(rèn)CO2安死術(shù)法是一個比較好的方法, 但由于儀器的問題，應(yīng)用并不是很廣泛[6]。本文就CO2在處死大鼠中的一些裝置及具體操作過程作一探索, 以便此方法能在一般的實(shí)驗(yàn)室得以開展。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的清潔級SD大鼠18只，體質(zhì)量280～320 g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供[SYXK(浙) 2014-0001]。

1.2 CO2裝置

一只CO2鋼瓶，上接CO2減壓器(上海減壓器有限公司生產(chǎn)); 一只改裝的大鼠IVC飼養(yǎng)籠(去掉中間放飼料、飲水瓶的一格，在盒體邊上安裝一個家用燃?xì)夤芙涌?以下簡稱塑料盒，用家用燃?xì)廛浌苓B接接口與CO2減壓器(圖1)。

1.3 CO2處死大鼠

18只SD大鼠，隨機(jī)分成3組，每組6只，分別放入塑料盒中。緩緩地打開CO2減壓器上的閥門，至壓力表0.1MPa位置。第一組: 半分鐘后關(guān)閉閥門，2 min后打開塑料盒; 第二組: 1 min后關(guān)閉閥門，2 min后打開塑料盒; 第三組: 1 min后關(guān)閉閥門，5 min后打開塑料盒。打開塑料盒后，每組都觀察5 min。

2 結(jié)果

第一組: 打開塑料盒后, 6只大鼠有心跳, 1 min后全部蘇醒; 第二組: 打開塑料盒后2只有心跳, 4只無心跳, 觀察5 min, 6只大鼠均沒有蘇醒; 第三組: 打開塑料盒后6只均無心跳, 觀察5 min, 6只大鼠沒有蘇醒。未死亡的第一組大鼠, 重復(fù)第三組大鼠的處死過程, 全都死亡后。第一組大鼠在蘇醒后, 籠底有大、小便痕跡, 其他二組籠底無大、小便痕跡。18只大鼠從放入塑料盒通入CO2至打開塑料盒蓋, 一直非常安靜, 沒有出現(xiàn)尖叫、逃竄等現(xiàn)象。

圖1 改裝后CO2安死術(shù)裝置

3 討論

當(dāng)實(shí)驗(yàn)中途停止或結(jié)束時, 處死實(shí)驗(yàn)動物是不可避免的。在強(qiáng)調(diào)動物倫理的大背景下, 處死大鼠常用的斷頭法、脫頸椎及擊打法，更顯得血腥和暴力。 CO2在空氣中的含量僅為0.04%, 比空氣重且無色無味，由于其對人類沒有危害, 使用方便, 成本較低等優(yōu)點(diǎn), 已經(jīng)被各國應(yīng)用于小型實(shí)驗(yàn)動物的處死上, 包括小鼠、大鼠、豚鼠、家兔及禽類[3]。CO2處死小型實(shí)驗(yàn)動物有那么多好處, 應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)、使用單位得到廣泛應(yīng)用, 但據(jù)作者不完全統(tǒng)計(jì), 在浙江省至2011年底, 已發(fā)放生產(chǎn)許可證49份，使用許可證166份，使用CO2處死小型實(shí)驗(yàn)動物的單位只有一家。其原因可能有二種: 一是思想上沒有對實(shí)驗(yàn)動物的福利引起足夠重視，二是認(rèn)為使用CO2裝置比較麻煩，既費(fèi)錢又占地方。

CO2裝置的塑料盒由大鼠IVC飼養(yǎng)籠改裝，去掉中間放飼料、飲水瓶的一格后, 在盒體的下三分之一處, 安裝一個燃?xì)饨涌? 考慮到CO2氣體充入后,多余的空氣要有地方排出, 在燃?xì)饨涌趯γ嫔先种惶?，開了一個與進(jìn)氣口一樣大小的排氣口, 后來實(shí)踐證明這個排氣口是多余的，因IVC籠的蓋子上原來就有進(jìn)氣孔和排氣孔, 多孔排氣后, 動物處死的時間會延長, 把排氣口堵上后, 就有了上面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。之所以用IVC飼養(yǎng)籠改裝, 當(dāng)初考慮有三: 一是籠盒較密閉，可通入氣體; 二是有搭扣，可防止動物逃跑; 三是透明，能看清動物的狀況。經(jīng)過二年多的運(yùn)行表明，搭扣可以基本不用，大鼠放入塑料盒后，只是好奇地探究，待氣體通入后，大鼠就靜止不動，直至死亡。CO2減壓器上的閥門一定要緩緩打開，至壓力表0.1 MPa位置即可，如果閥門突然打開太大，巨大的氣流會使大鼠受驚嚇。有文章[3]介紹在箱內(nèi)下部加一個底篦，以防動物應(yīng)激產(chǎn)生的排泄物污染動物身體，而作者的裝置，只在盒底放了些衛(wèi)生紙，多次實(shí)驗(yàn)表明，衛(wèi)生紙都是干燥的, 故目前也不再放衛(wèi)生紙。連接塑料盒與CO2鋼瓶的燃?xì)廛浌芸蛇m當(dāng)長一點(diǎn)(約2 m)，便于傾倒大鼠尸體及塑料盒的清潔。

CO2致死法是通過直接或間接的缺氧引起動物死亡，它可以不同速度使動物失去意識。要達(dá)到無痛苦、無疼痛死亡，就要在動物的動作(肌肉活動) 消失之前喪失意識。CO2可使動物在喪失意識之后產(chǎn)生運(yùn)動活動，但這些運(yùn)動活動只是反射活動，不能被動物感知[7]。

CO2裝置所占的位置很小，可以放在通風(fēng)的普通實(shí)驗(yàn)室中; 價(jià)格便宜，整個裝置費(fèi)用約幾千元，如果實(shí)驗(yàn)室有可利用CO2鋼瓶，費(fèi)用更省。

實(shí)驗(yàn)者應(yīng)站在實(shí)驗(yàn)動物的立場上以人道的原則去處置實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)動物，不應(yīng)給實(shí)驗(yàn)動物造成任何恐怖和痛苦。用CO2處死大鼠是一種比較人道的方法，比斷頭、脫頸椎及擊打更符合動物倫理。

[1] 方喜業(yè). 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)[M].北京, 人民衛(wèi)生出版社, 1995: 229-230.

[2] 朱玉峰, 王元占, 楊培梁, 等. 淺談實(shí)驗(yàn)動物安樂死[J]. 中國醫(yī)學(xué)倫理學(xué), 2011, 24(2):260-264.

[3] 張瀟, 譚德講, 李保文, 等. 二氧化碳安樂死在實(shí)驗(yàn)動物中的應(yīng)用與最新進(jìn)展[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 19(8):82-84.

[4] 趙建文, 銀歡, 張志芬, 等. 安樂死箱的技術(shù)條件的研究[J].實(shí)驗(yàn)動物科學(xué), 2007, 24(3):54-55.

[5] 劉云波. 實(shí)驗(yàn)動物安樂死若干問題[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 18(2):76-78.

[6] 劉玉萍, 韋曄, 紀(jì)雅慧, 等. 小動物CO2安樂死裝置的應(yīng)用研究[J]. 醫(yī)學(xué)動物防制, 2013, 27(2):119-122.

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Q95-33

B

1674-5817(2016)05-0391-02

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.05.014

2016-05-30

寧波市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015A610193)

符 丹(1984-), 女, 助理研究員。

E-mail: fd826@163.com

唐甩恩(1963-), 女, 高級實(shí)驗(yàn)師。

E-mail: tangshuain@163.com