陜西省咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(咸陽(yáng) 712000)

薛　偉

?

·臨床檢驗(yàn)·

免疫比濁法測(cè)定D-二聚體抗脂濁能力

陜西省咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(咸陽(yáng) 712000)

薛偉

摘要目的： 分析免疫比濁法測(cè)定D-二聚體及其抗脂濁的能力，了解該種方法的特點(diǎn)和脂血在其測(cè)定中的干擾程度。方法： 根據(jù)NCCLS文件，對(duì)免疫比濁法測(cè)定D-二聚體進(jìn)行正確性實(shí)驗(yàn)、血漿樣本測(cè)定和抗脂濁實(shí)驗(yàn)。結(jié)果： 在D-二聚體水平<1.5μg/ml時(shí)D/C、D/3兩種檢測(cè)模式結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P?0.05)；乳糜1200濁度對(duì)D-D濃度的免疫比濁結(jié)果具有負(fù)干擾且濁度在1200～4800范圍內(nèi)其負(fù)干擾成一次線性趨勢(shì)。 結(jié)論： 免疫比濁法測(cè)定D-二聚體具有較好的效果，但在樣本乳糜濁度較大時(shí)應(yīng)充分考慮到甘油三酯對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響并采取措施進(jìn)行校正以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

主題詞免疫法@D-二聚體 @抗脂濁能力

D-二聚體作為纖溶酶水解交聯(lián)纖維蛋白后形成的特異性降解產(chǎn)物，其高敏感和高預(yù)測(cè)性使得它成為體內(nèi)高凝狀態(tài)和纖溶亢進(jìn)、體內(nèi)血漿凝血因子活化和纖維蛋白溶解系統(tǒng)作用啟動(dòng)的首選分子標(biāo)記物[1]。免疫比濁法作為測(cè)定D-二聚體血漿水平的檢測(cè)方法獲得了廣泛的應(yīng)用[2]，但有研究表明此種方法易受脂血干擾。因此本研究根據(jù)NCCLS文件對(duì)免疫比濁法測(cè)定D-二聚體及其抗脂濁的能力進(jìn)行了分析以了解該種方法的特點(diǎn)和血脂在其測(cè)定中的干擾程度。

材料與方法

1儀器與試劑選用法國(guó)Stago STA-R全自動(dòng)血凝儀，配套D-二聚體試劑。

2分析樣本質(zhì)控定值血漿為法國(guó)Stago公司生產(chǎn)的原裝正常和病理(STA-Liatest control N+P)質(zhì)控血漿；患者血漿樣本根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選取本院門診、住院患者及健康體檢者新鮮抗凝全血100例，血樣用3.2% 109mmol/L枸緣酸鈉抗凝，以3000r/min，離心10min分離出血漿。

3方法

3.1正確性實(shí)驗(yàn):根據(jù)NCCLS EP15-A2文件對(duì)于精密度評(píng)價(jià)的要求，使用N值和P值的質(zhì)控定值血漿連續(xù)測(cè)定10次并計(jì)算均值，觀察結(jié)果是否在廠家提供的質(zhì)控參考范圍內(nèi)。

3.2血漿樣本測(cè)定:利用STAGO血凝分析儀的2種免疫比濁測(cè)量模式定量測(cè)量本研究收取的100份標(biāo)本的D-二聚體水平。

3.3抗脂濁實(shí)驗(yàn)：根據(jù)NCCLS EP7-A文件，將包含甘油三酯的干擾血漿按100%、80%、60%、40%和20%稀釋后與待測(cè)樣本血漿進(jìn)行1∶9比例的混合，重復(fù)3次測(cè)定樣本的均值。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析方法包括t檢驗(yàn)、線性回歸分析，P?0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1正確度質(zhì)控定值血漿經(jīng)測(cè)定后，正常水平(N值)的均值為0.28μg/ml，病理水平(P值)的均值為1.98μg/ml，結(jié)果在廠家提供的質(zhì)控參考范圍內(nèi)，即N值0～0.5μg/ml，P值1.65～2.45μg/ml。

2血漿測(cè)定D/C模式對(duì)正常水平血漿的D-二聚體測(cè)定結(jié)果為0.71±0.091μg/ml，對(duì)病理水平血漿的D-二聚體測(cè)定結(jié)果為2.51±0.159μg/ml；用D/3模式進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，正常水平血漿的D-二聚體測(cè)定結(jié)果為0.31±0.038μg/ml，對(duì)病理水平血漿的D-二聚體測(cè)定結(jié)果為2.9±0.096μg/ml。以D-二聚體水平1.5μg/ml為界，對(duì)100例數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，在D-二聚體水平<1.5μg/ml時(shí)兩種檢測(cè)模式的結(jié)果是有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的(t=8.46，P?0.05)，而D-二聚體水平>1.5μg/ml時(shí)兩種檢測(cè)模式的結(jié)果不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.22，P<0.05)，具體見(jiàn)表1。

表1　兩種檢測(cè)模式對(duì)兩水平D-二聚體的檢測(cè)結(jié)果

3抗脂濁實(shí)驗(yàn)不同乳糜濃度對(duì)D-二聚體的測(cè)定結(jié)果為，對(duì)照樣本三次D-二聚體濃度分別為1.635、1.598和1.619μg/mL，均值為1.617±0.186；乳糜濁度為1200時(shí)，本三次D-二聚體濃度分別為1.529、1.438和1.517μg/mL，均值為1.495±0.049，乳糜1200濁度對(duì)D-D濃度的免疫比濁結(jié)果具有負(fù)干擾，具體結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)研究結(jié)果，對(duì)不同乳糜濃度對(duì)D-二聚體測(cè)定的干擾影響進(jìn)行回歸分析成一次線性趨勢(shì)，線性方程結(jié)果為：Y=1.596-0.0006694X。

表2　不同乳糜濃度對(duì)D-二聚體測(cè)定的干擾影響

討論

血漿D-二聚體是交聯(lián)纖維蛋白在纖溶酶作用下的降解產(chǎn)物，它在臨床上有著廣泛的應(yīng)用[3]。測(cè)定血漿D-二聚體的方法目前應(yīng)用最多的就是免疫比濁法[4]，它把D-D的單克隆抗體包被于乳膠顆粒上與樣本中的抗原特異性結(jié)合從而使?jié)岫仍黾?，通過(guò)測(cè)定濁度的變化就能獲得D-二聚體的濃度[5]。免疫比濁法具有高敏感性、較高特異性、較好陰性預(yù)測(cè)值、定量測(cè)量、快速穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，已被美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)用于肺栓塞、深靜脈血栓性疾病排除診斷[6]。

本研究從正常和病理兩個(gè)水平的質(zhì)控定值血漿進(jìn)行正確度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明該方法的正確性較高；運(yùn)用D/3、D/C兩種模式測(cè)定D-二聚體水平，結(jié)果顯示在D-二聚體水平<1.5μg/ml時(shí)兩種檢測(cè)模式的結(jié)果是有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的，而D-二聚體水平>1.5μg/ml時(shí)兩種檢測(cè)模式的結(jié)果不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明乳糜1200濁度對(duì)免疫比濁法檢測(cè)有負(fù)干擾影響。隨著濁度的升高，當(dāng)乳糜濁度<4800時(shí)，不同乳糜濃度對(duì)D-二聚體測(cè)定的干擾成線性回歸趨勢(shì)，線性回歸方程為Y=1.596-0.0006694X，提示用免疫比濁法測(cè)定D-二聚體時(shí)要考慮高血脂等患者脂濁對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。

免疫比濁法測(cè)定D-二聚體其結(jié)果可直接影響臨床疾病判斷，其中D/3模式為血凝分析儀的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定模式，而D/C模式是專業(yè)人員根據(jù)本院實(shí)際疾病情況設(shè)定的模式，主要用于標(biāo)本的稀釋[7]。在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，可以根據(jù)D-二聚體濃度，以1.5μg/ml為界，靈活選用兩種模式以充分利用儀器檢測(cè)特性、節(jié)約試劑成本[8]。此外，要考慮到乳糜對(duì)免疫比濁法測(cè)定D-二聚體的線性負(fù)干擾影響，通過(guò)完善標(biāo)本采集運(yùn)送及保存程序、嚴(yán)格甄別抗凝劑的選擇與運(yùn)用、對(duì)高濁度樣本進(jìn)行甘油三酯濃度檢測(cè)并對(duì)相應(yīng)D-二聚體結(jié)果進(jìn)行校正等方法減少脂濁對(duì)免疫比濁法測(cè)定D-二聚體濃度結(jié)果的影響。

參考文獻(xiàn)

[1] 官燕飛,彭建明,劉樹(shù)沅,等.STA-R凝血分析儀檢測(cè)D-二聚體的性能驗(yàn)證[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(14):1875-1877.

[2] 馬升俊.免疫比濁法檢測(cè)血漿D-二聚體的性能評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(5):602-604.

[3] 張勇，吉海明，王芳云,等.急性冠脈綜合癥患者血清脂聯(lián)素、纖維蛋白原和D-二聚體的變化及臨床意義[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2014,43(8):1044.

[4] 崔巍.從 D-二聚體檢測(cè)體系的變更談檢驗(yàn)與臨床溝通[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2015,30(4):311-313.

[5] 周靜,孫家瑜,孫加冠.五種D-二聚體檢測(cè)方法用于排除可疑靜脈血栓栓塞癥的臨床評(píng)價(jià)[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2009,40(6):1078-1081.

[6] 許俊.膠乳凝集比濁法與熒光偏振免疫法檢測(cè)卡馬西平血藥濃度的相關(guān)性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(4):453-454.

[7] 封莉,吳興福,王鳳平.淺析提高免疫比濁法測(cè)定D二聚體的準(zhǔn)確性[J].血栓與止血學(xué),2012,18(5):224-226.

[8] 聶濱,陶天陸.應(yīng)用 EP7-A2文件評(píng)價(jià)免疫比濁法測(cè)定 D-二聚體抗脂濁能力[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2015,30(4):324-326.

(收稿：2015-11-28)

Evaluation on the anti-lipid turbidity capability of D-dimer by immunoturbidimetry

Department of Clinical Laboratory,the First People's Hospital of Xianyang(Xianyang 712000)

Xue Wei

ABSTRACTObjective：To analysis immune turbidimetric method determination of plasma D-dimer levels and the anti-lipid turbidity capability of D-dimer by immunoturbidimetry, in order to understand the characteristics and blood lipid in the determination of the degree of interference. Methods：According to NCCLS documents, use correct experiment, plasma sample determination and anti-lipid turbidity experiment on the immune turbidimetric method determination of D -dimer. Results： When the D-dimer levels <1.5μg/ml, the difference between detection mode D/C and detection mode D/3 are statistically significant difference (t=8.46,P< 0.05); chylous turbidity of 1200 has negative interference on the immune turbidimetric method determination of plasma D-D, when turbidity within 1200-4800, the scope of the negative interference show a linear trend. Conclusion：The immune turbidimetric method determination of D-dimer has a good effect, but if turbidity chyle is larger in sample, we should fully take into account the effects of hypertriglyceridemia on the test results and take measures to ensure the accuracy of the correction.

KEY WORDSImmunization@D-dimer@Anti-turbidity ability

【中圖分類號(hào)】R392

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.057