孫衛(wèi)

神經(jīng)節(jié)苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制分析

孫衛(wèi)

目的 探究神經(jīng)節(jié)苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制。方法 選取168只剛出生1周的SD大鼠并分為3組，各56只?？瞻捉M進行假手術，沒有顱腦外傷；對照組出現(xiàn)顱腦外傷，腹腔注射生理鹽水；觀察組存在顱腦外傷，腹腔注射神經(jīng)節(jié)苷脂。結果 實驗結果顯示，觀察組死亡率為23.81%，明顯低于對照組的66.67%（P＜0.05）；觀察組與對照組大鼠大腦海馬區(qū)的Nestin 0～24時表達明顯比空白組高（P＜0.05）；觀察組大鼠大腦海馬區(qū)NGF表達的第0～24時都明顯比對照組高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；觀察組大鼠大腦海馬區(qū)NGF表達的第0～16時明顯比空白組高（P＜0.05）；觀察組大鼠海馬區(qū)NGF表達根據(jù)時間的增長而降低但仍比對照組高。結論 神經(jīng)節(jié)苷脂預防性的利用，能夠促使提高顱腦外傷模型大鼠大腦海馬區(qū)的NGF表達，并降低顱腦外傷造模大鼠的死亡率。

神經(jīng)節(jié)苷脂；顱腦外傷；保護作用

根據(jù)相關研究報告顯示，近年來，我國發(fā)生顱腦損傷患者越來越多，患病率逐漸增高，已經(jīng)成為臨床腦外傷常見病及高發(fā)病之一[1]。顱腦外傷具有突發(fā)性，多是由外界暴力直接或間接對患者頭部造成損傷，該病癥的病情復雜、臨床治療風險較大并且臨床表現(xiàn)變化較快[2]。顱腦損傷是現(xiàn)階段存在發(fā)病率較高、致殘與致死率較高的一種創(chuàng)傷性疾病[3]。本研究對神經(jīng)節(jié)苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制進行探究，為治療顱腦外傷選取藥物提供參考，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇168只剛出生1周的SD大鼠為研究對象，均為健康雄性，體質量在180～270 g。將其隨機分為3組，各56只。給藥方式如下：空白組和對照組術前給予腹腔生理鹽水注射，按20 mL/kg給藥，1次/d，持續(xù)注射3 d；實驗組，給予腹腔神經(jīng)節(jié)苷脂（GMI，商品名“申捷”，夏邑醫(yī)藥公司，國藥準字H 20059887，濃度為2 mg/mL）注射，與上述時間保持一致。

1.2 建立有效的動物手術以及顱腦外傷模型 利用特殊的造模打擊裝置，根據(jù)相關研究對大鼠顱腦外傷模型的制作模式將動物模型進行建立。大鼠造模前，禁止飲食8 h，在進行實驗的過程中大鼠保持俯臥位，固定腦立體定向儀，對皮膚進行消毒，按照每千克體質量0.35 g以10%水合氯醛在其腹腔內(nèi)進行麻醉注射，在正中將頭皮切開會后對骨膜進行剝離，將右頂骨充分暴露出來，隨后利用牙科鉆在冠狀縫1.5 mm后以及距離中線2.5 mm處鉆1個直徑為5 mm的骨窗，并確保骨膜的完整性。

1.3 動物大腦標本的提取 手術完成后，到第0、2、4、8、12、16、24 h時間點，從每組大鼠中各選出5只大鼠，從頸動脈取血，將大鼠處死，進而提取海馬組織。提取海馬組織的方法如下：首先割斷大鼠頭部，然后將頭部正中隆起處的下丘腦切下，將小腦和腦干切除，順著大腦失狀裂縱行切開大腦半球，剝開枕葉內(nèi)側丘腦和項葉額葉內(nèi)側紋狀體，將邊緣系統(tǒng)暴露出來，用藥匙將雙側海馬組織慢慢剝離，放到凍存管中冷凍保存，冷存溫度為－80℃。待全部標本提取好以后，分別取每份標本2 g，量取pH值為7.4的PBS 2 mL，將其混合研成勻漿，再利用離心器將其分離，最后提取上清液，分別將其裝好以后測量、備用。

1.4 測量神經(jīng)巢蛋白以及神經(jīng)生長因子 根據(jù)芬蘭酶標分析儀與洗板機（型號分別為352型與AC 8）和神經(jīng)節(jié)苷脂與Nestin酶聯(lián)免疫分析試劑盒（上海酶聯(lián)生物技術有限公司）的具體操作表明對神經(jīng)巢蛋白與神經(jīng)生長因子進行測量。也就是根據(jù)包裝加底物液顯色等，在酶標儀的450 nm波長位置處，根據(jù)空白管調零的方式對吸光度進行測定。

1.5 統(tǒng)計學方法 本研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組術后死亡率的對比 2組術后建立顱腦外傷模型，對整個研究過程進行觀察，其中觀察組56只在手術過程中處死35只，另外21只大鼠中有5只自然死亡，死亡率為23.81%，對照組56只在手術過程中處死35只，另外21只大鼠中有14只自然死亡，死亡率為66.67%，觀察組死亡率明顯比對照組低，2組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 每組大鼠不同時段內(nèi)大腦海馬區(qū)Nestin表達的變化情況 觀察組大鼠大腦海馬區(qū)Nestin 0～24時表達與對照組的對比差異不具有統(tǒng)計學意義。觀察組與對照組大鼠大腦海馬區(qū)的Nestin 0～24時表達明顯比空白組高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 每組大鼠不同時間內(nèi)大腦海馬區(qū)Nestin表達的變化情況對比（x±s，n=56）

2.3 每組大鼠不同時間內(nèi)大腦海馬區(qū)NGF表達的變化情況對比 觀察組大鼠大腦海馬區(qū)NGF表達的第0～24時都明顯比對照組高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；觀察組第0～16時明顯比空白組高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；同時，觀察組大鼠海馬區(qū)NGF的表達會根據(jù)時間的增長而降低，到第24時降到空白組的水平，但此時的水平仍然比對照組高。見表2。

表1 每組大鼠不同時間內(nèi)大腦海馬區(qū)NGF表達的變化情況對比（x±s，n=56）

3 討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中應用神經(jīng)節(jié)苷脂，能夠促使其快速修復，神經(jīng)節(jié)苷脂對內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子前體具有重要的增強作用[4-6]，能夠促使神經(jīng)營養(yǎng)因子的活性不斷增強，有助于神經(jīng)快速生長與恢復，其作用機制還需要深入的進行探究。Nestin屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的特殊中間絲蛋白，出生后快速降低直至消失，只是在部分保持神經(jīng)發(fā)生功能處存在表達[7-8]。Nestin能夠將中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷情況及早地反映出來，同時，也是能夠較快應答的一種敏感標識。神經(jīng)生長因子屬于最先發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營養(yǎng)因子中的重要組成部分，也是神經(jīng)系統(tǒng)中主要的生物活性物質，神經(jīng)生長因子的2個重要功能分別為神經(jīng)元營養(yǎng)功能、促突起生長雙重生物學功能，能夠調節(jié)神經(jīng)元的損傷修復以及功能恢復。

本研究結果表明，神經(jīng)節(jié)苷脂預防性的利用，能夠促使顱腦外傷模型大鼠大腦海馬區(qū)的NGF表達有顯著提高，能夠有效降低顱腦外傷造模大鼠的死亡率。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.008

江西 330006 江西省人民醫(yī)院神經(jīng)外科 （孫衛(wèi)）