趙小英

(甘肅省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅蘭州 730050)

·臨床研究·

維持血液透析患者丙型肝炎抗-HCV ELISA檢測灰區(qū)標(biāo)本確認(rèn)的意義

趙小英

(甘肅省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅蘭州 730050)

摘要:目的探討維持血液透析患者酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)抗-HCV檢測灰區(qū)標(biāo)本確認(rèn)的臨床價值。方法選取ELISA檢測抗-HCV吸光度/臨界值(S/CO)比值在0.5～3.5之間的標(biāo)本95份用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PR-PCR)進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果在抗-HCV灰區(qū)(0.5≤S/CO<3.5)的95份標(biāo)本中，0.5≤S/CO<1.0的標(biāo)本13份，經(jīng)PR-PCR熒光定量進(jìn)行確認(rèn)陽性2份，陽性率15.4%(2/13)；1.0≤S/CO<3.5兩個區(qū)段標(biāo)本82份，經(jīng)PR-PCR確認(rèn)25份，陽性率分別33.3%(10/30)和28.8%(15/52)。結(jié)論維持血液透析患者(MHD)抗-HCV ELISA檢測灰區(qū)標(biāo)本應(yīng)進(jìn)一步確認(rèn)，以防止漏診誤診。

關(guān)鍵詞:丙型肝炎病毒；酶聯(lián)免疫吸附測定；灰區(qū)；血液透析

維持血液透析(MHD)患者，丙型肝炎病毒(HCV)易經(jīng)血液透析過程交叉感染和傳播，感染率極高。國內(nèi)一項(xiàng)調(diào)查顯示，我國MHD患者中HCV抗體陽性率高達(dá)29.5%[1]。早期診斷是減少或杜絕MHD患者醫(yī)源性傳播HCV的關(guān)鍵。但由于MHD患者常伴有免疫功能低下或免疫抑制，使HCV感染后抗-HCV濃度產(chǎn)生較低甚至缺失，在臨床檢測中會有相當(dāng)數(shù)量的標(biāo)本吸光度/臨界值(S/CO)落在臨界值附近(即灰區(qū))，尤其對S/CO值處在陰性灰區(qū)的一部分標(biāo)本來說，及易造成血液檢測結(jié)果的假陰性，從而能造成HCV感染的漏檢。對MHD患者來說，假陰性的危害遠(yuǎn)大于假陽性。為此筆者將2013年3月至2015年6月來本院血透中心治療的患者經(jīng)抗-HCV 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測選取95份S/CO值在0.5～3.5的標(biāo)本進(jìn)行了熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PR-PCR)確證，結(jié)果報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料血樣取自2013年3月至2015年6月來本院血透中心治療的患者，用2種抗-HCV ELISA試劑篩查，共選取灰區(qū)即抗-HCV S/CO在0.5～3.5的標(biāo)本95份作為本試驗(yàn)的研究對象。

1.2試劑與儀器雷杜酶標(biāo)儀(RT-6100)，洗板機(jī)等。丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒[ELISA法，萬泰生物藥業(yè)，英科新創(chuàng)(廈門)有限公司]。HCV-RNA定量采用PR-PCR檢測技術(shù)，儀器采用Roche公司COBASAM-PLICOR定量PCR儀和試劑。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。HCV-RNA≥103U/mL為陽性。

1.3檢測方法采用常規(guī)三代ELISA試劑(萬泰生物藥業(yè)、英科新創(chuàng))進(jìn)行了篩檢和復(fù)檢， 所有操作均按試劑盒說明書進(jìn)行。篩選S/CO比值在0.5～3.5的95份標(biāo)本，采用PR-PCR進(jìn)行確認(rèn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1抗-HCV S/CO值分布與HCV-RNA確認(rèn)結(jié)果將行抗-HCV ELISA初篩灰區(qū)(0.5≤S/CO<3.5)的95份標(biāo)本再行PCR熒光定量進(jìn)行確認(rèn)，陽性的有27份。全部標(biāo)本按初篩S/CO值分成了3個區(qū)段進(jìn)行比較。第1區(qū)段屬陰性灰區(qū)(0.5≤S/CO<1.0)的13份標(biāo)本中，PCR確認(rèn)2份，陽性率15.4%(2/13)；第2、3區(qū)段屬陽性灰區(qū)(1.0≤S/CO<3.5)的標(biāo)本82份，PR-PCR確認(rèn)25份，陽性率分別為33.3%(10/30)和28.8%(15/52)。各S/CO區(qū)段陽性率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.446，P=0.485)。見表1。

表1　　95份抗-HCV S/CO值分布與HCV-RNA確認(rèn)結(jié)果

2.2確認(rèn)陽性標(biāo)本的HCV-RNA含量比較27份陽性標(biāo)本中，11份103U/mL≤HCV-RNA<105U/mL，其中陰性灰區(qū)(0.5≤S/CO<1.0)1份，陽性灰區(qū)(1.0≤S/CO<3.5)10份；其余16份HCV-RNA≤105U/mL標(biāo)本中，陰、陽兩灰區(qū)各占1和15份。說明灰區(qū)陽性標(biāo)本的HCV-RNA含量與S/CO值無關(guān)。

3討論

長期MHD患者由于頻繁的靜脈穿刺、體外循環(huán)、輸血等醫(yī)源性因素，HCV隱性感染成為透析患者獲得院內(nèi)感染的主要途徑，也是血液透析中心HCV暴發(fā)流行的主要原因[2]。因此，及時準(zhǔn)確地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，對減少或杜絕醫(yī)源性傳播具有重要意義。

ELISA抗-HCV檢測是目前國內(nèi)篩查HCV感染的主要方法[3]，該測定雖有良好的特異性，但由于干擾因素太多，如不同廠家試劑所使用的HCV抗原來源、質(zhì)量及包被濃度差異可能會導(dǎo)致假陰性或假陽性反應(yīng)的出現(xiàn)。李金明[4]認(rèn)為，ELISA抗-HCV檢測結(jié)果處于灰區(qū)的標(biāo)本均應(yīng)確認(rèn)。但國內(nèi)外不同廠家的抗-HCV ELISA試劑盒對弱陽性標(biāo)本的檢測結(jié)果差異較大，假陰性率從25.0%～82.1%不等[5]，造成漏檢的風(fēng)險(xiǎn)較高。本研究檢測的95份抗-HCV初篩處于灰區(qū)的標(biāo)本中，PR-PCR定量確認(rèn)陽性的只有27份。其中陰性灰區(qū)(S/CO<1.0)的13份標(biāo)本PR-PCR確認(rèn)2份，說明ELISA陰性灰區(qū)中存在著一定數(shù)量的假陰性結(jié)果，假陰性率15.4%(2/13)遠(yuǎn)低于文獻(xiàn)報(bào)道，究其原因，可能因?yàn)楸敬卧囼?yàn)使用了兩種試劑進(jìn)行篩檢，避免了由于試劑的不同而造成的漏檢。如何減少抗-HCV ELISA檢測的漏檢，最大限度地減少M(fèi)HD患者之間的院內(nèi)感染，谷金蓮等[6]研究認(rèn)為，對于0.51.0)的82份標(biāo)本，PR-PCR確認(rèn)陽性25份，陰性57份。表明ELISA陽性灰區(qū)中還存在著相當(dāng)數(shù)量的假陽性標(biāo)本。美國疾病預(yù)防控制中心曾對Abbott HCV ELISA2.0及Ortho3.0試劑盒進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)初篩檢測反應(yīng)性標(biāo)本S/CO≥3.8的有95%以上是真陽性，S/CO≤3.8者則有較高的假陽性率，尤其在抗-HCV陽性率低于10%的各類人群中，假陽性率平均為35%[7]。

以上種種表明，MHD患者抗-HCV ELISA檢測灰區(qū)標(biāo)本確證非常必要。在臨床工作中，通常將抗HCV篩查陽性者，才行HCV-RNA檢測，無疑很大程度上可能漏檢了一部分處于血清轉(zhuǎn)換期的HCV感染者，而給其他透析患者帶來了很大的風(fēng)險(xiǎn)。同樣，以ELISA S/CO≥1.0作為HCV陽性結(jié)果并作為判斷HCV是否感染的依據(jù)，其誤診的后果將會造成患者及家屬沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和不必要的心理壓力。

參考文獻(xiàn)

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.038

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)10-1392-02

(收稿日期：2016-01-15)