王亞鳳，黃永林，劉金磊，顏小捷，陳月圓，楊子明，何瑞杰，李典鵬

(廣西壯族自治區(qū)中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所，廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林　541006)

殼斗科植物種子的多酚類(lèi)含量及抗氧化能力*

王亞鳳，黃永林**，劉金磊，顏小捷，陳月圓，楊子明，何瑞杰，李典鵬

(廣西壯族自治區(qū)中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所，廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林541006)

摘要：【目的】測(cè)定青岡櫟Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst.、飯甑青岡Cyclobalanopsis fleuryi (Hickel.et A.Camus) Chun ex Q.F.Zheng、大葉櫟Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.、栲Castanopsis fargesii、椆木Lithocarpus thalassica (Hance) Rehd.種子中的多酚含量，評(píng)價(jià)其提取物的抗氧化能力，并分析多酚含量與抗氧化能力的關(guān)系。【方法】采用Folin-酚法測(cè)定多酚含量，通過(guò)DPPH·和ABTS·自由基清除法評(píng)價(jià)種子提取物的抗氧化能力。【結(jié)果】在選取的5種殼斗科植物種子中，飯甑青岡的多酚含量最高(14.16%)，其次為大葉櫟(10.89%)，栲的含量最低(0.44%)；各提取物均表現(xiàn)出良好的抗氧化能力，其中青岡櫟的半清除率質(zhì)量濃度IC50均優(yōu)于抗壞血酸(Vc)，飯甑青岡IC50與Vc相當(dāng)。【結(jié)論】青岡櫟與飯甑青岡種子提取物可作為天然抗氧化劑應(yīng)用于保健品、化妝品乃至藥品等行業(yè)。

關(guān)鍵詞：殼斗科總酚含量測(cè)定抗氧化能力

0引言

【研究意義】殼斗科植物因其種子均有包含種子的殼斗而得名，主要產(chǎn)于亞洲東南部及南部，中國(guó)分布的有栗屬(Castanea)、錐屬(Castanopsis)、水青岡屬(Fagus)、柯屬(Lithocarpus)、櫟屬(Quercus)、青岡屬(Cyclobalanopsis)和三棱櫟屬(Trigonobalanus)等7屬，約300種。除新疆維吾爾自治區(qū)有引種外，其它各省均為自然分布。殼斗科植物多為常綠或落葉喬木，稀灌木，是山地水源林的重要成分及主要用材樹(shù)種[1]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】現(xiàn)有的研究表明殼斗科植物樹(shù)葉、樹(shù)皮均富含多酚類(lèi)成分，并具有很好的抗氧化活性[2-8]。關(guān)小麗等[4]對(duì)8種殼斗科植物葉中總酚的含量進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行抗氧化能力檢測(cè)，表明研究的8種殼斗科植物葉中均含有多酚類(lèi)成分并具有較好的抗氧化能力。Huang等[5]對(duì)大葉櫟新鮮葉子提取物進(jìn)行化學(xué)成分分離，得到大量多酚類(lèi)化合物，并對(duì)主要成分進(jìn)行脂肪酶抑制活性研究和ORAC值測(cè)定。Huang等[6-8]還從苦櫧葉、米櫧葉中分離得到多種多酚物質(zhì)?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前對(duì)于殼斗科植物種子的研究主要集中在總脂肪、蛋白質(zhì)、還原糖、淀粉、果膠等營(yíng)養(yǎng)成分的比較分析上，還未見(jiàn)有關(guān)化學(xué)成分及藥理活性方面的公開(kāi)報(bào)道[9]。因此本文從種子的化學(xué)成分入手，研究其應(yīng)用價(jià)值?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】測(cè)定種子中多酚類(lèi)成分的含量、類(lèi)型及其抗氧化能力，為全面開(kāi)發(fā)利用殼斗科植物資源提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器

JA2003N電子天平(上海菁海儀器有限公司)；AS5150A超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；N-1100旋轉(zhuǎn)型蒸發(fā)儀(東京理化)；CA-1111冷卻水循環(huán)(東京理化)；十兩裝高速中藥粉碎機(jī)(浙江瑞安市百信藥機(jī)器械廠(chǎng))；TDZ4A-WS低速臺(tái)式離心機(jī)(湘儀離心機(jī)有限公司)；電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宜昌儀器紗篩廠(chǎng))；RT-9100半自動(dòng)生化分析儀(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司)。

1.2試劑

沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS，美國(guó)Sigma公司)；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，美國(guó)Sigma公司)；福林酚試劑(GOLD WHEAT)；抗壞血酸(Vc，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；純凈水；其它試劑均為分析純。

1.3樣品

實(shí)驗(yàn)樣品經(jīng)廣西植物研究所呂仕洪副研究員鑒定分別為青岡櫟Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst.、飯甑青岡Cyclobalanopsis fleuryi (Hickel.et A.Camus) Chun ex Q.F.Zheng、大葉櫟Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.、栲Castanopsis fargesii、椆木Lithocarpus thalassica (Hance) Rehd.的種子。憑證標(biāo)本保存于廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.4方法

1.4.1含量測(cè)定方法

有關(guān)對(duì)照品溶液的配制以及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作均參考文獻(xiàn)[10]。

1.4.1.1對(duì)照品溶液的配制

精密稱(chēng)取干燥至恒重的沒(méi)食子酸對(duì)照品10.5 mg，置于100 mL容量瓶中，用50%(V/V)甲醇溶解并定容至刻度并搖勻，即得0.105 g·L-1的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液。

1.4.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

分別精確吸取50 μL、100 μL、150 μL、200 μL、250 μL、300 μL對(duì)照品溶液于具塞試管中，加入蒸餾水稀釋至1 mL(同時(shí)以1 mL蒸餾水作對(duì)照)，然后加入0.5 mL Folin-Ciocalteu試劑搖勻，靜置10 min后分別加入1.5 mL 0.075 g/mL的碳酸鈉溶液及2 mL蒸餾水，搖勻，置于40℃水浴鍋中反應(yīng)1 h，冷卻，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品吸光值。以吸光度(X)為橫坐標(biāo)，所測(cè)定樣品的含量(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程Y=0.0472X-0.0008(R2=0.9994)，表明在本實(shí)驗(yàn)條件下沒(méi)食子酸在0～31.5 μg具有良好線(xiàn)性關(guān)系。

1.4.1.3供試品溶液的制備

將真空干燥的種子粉碎，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取粉末1 g，按1∶25的料液比加入80%(V/V)的乙醇超聲提取2次，每次30 min，過(guò)濾，合并濾液并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用80%(V/V)的乙醇定容至100 mL，搖勻，即得到供試品溶液。

1.4.1.4總多酚含量測(cè)定

分別精密取殼斗科植物種子樣品各3份，按照1.4.1.3節(jié)中方法進(jìn)行供試品溶液的制備，按照1.4.1.2節(jié)中方法顯色及測(cè)定吸光度值，并由線(xiàn)性回歸方程計(jì)算出樣品中多酚的含量，并計(jì)算出各樣品中多酚類(lèi)物質(zhì)的百分含量。

1.4.1.5方法學(xué)驗(yàn)證

(1)精密度實(shí)驗(yàn)

精確吸取一定量青岡櫟種子供試品溶液，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色，在760 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行吸光度測(cè)定，連續(xù)測(cè)量6次，測(cè)得數(shù)據(jù)的RSD為0.028%，表明儀器精密度良好。

(2)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精確吸取一定量青岡櫟種子供試品溶液，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色，測(cè)量240 min內(nèi)吸光度值，每30 min測(cè)一次，測(cè)得數(shù)據(jù)的RSD為0.46%，表明該樣品在顯色后240 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

(3)重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[4，11]，分別稱(chēng)取一定量青岡櫟種子粉末，按1.4.1.3節(jié)中方法制備供試品溶液6份，從每份供試品溶液中精確吸取一定量的溶液，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色，在760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，可計(jì)算出青岡櫟種子中多酚類(lèi)物質(zhì)的含量為5.11%，其RSD為0.44%，表示該提取方法重復(fù)性良好。

(4)加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知多酚含量樣品6份，按1.4.1.3節(jié)中方法制備供試品溶液，再分別吸取一定量的供試品溶液，并加入一定量的對(duì)照品，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色并測(cè)定吸光度值，計(jì)算平均加樣回收率為100.87%，RSD為0.66%，說(shuō)明該方法具有較高的準(zhǔn)確性。

1.4.2抗氧化能力測(cè)定

實(shí)驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)[11-15]，有所改動(dòng)。

1.4.2.1供試品溶液的制備

將真空干燥的種子粉碎，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取粉末10 g，按1.4.1.3節(jié)中方法進(jìn)行提取，過(guò)濾，合并濾液并減壓濃縮干燥，即得供試樣品，然后通過(guò)1.4.1.2節(jié)中的方法測(cè)定提取物中多酚含量。

1.4.2.2DPPH·自由基清除實(shí)驗(yàn)

精密吸取不同濃度的樣品溶液0.5 mL于具塞試管中，加入0.5 mL DPPH乙醇溶液(0.394 g·L-1)混勻(空白組用溶劑代替樣品溶液，對(duì)照組用溶劑代替DPPH溶液)。以上3組在37℃水浴中放置30 min，于517 nm處測(cè)定其吸光度。按照同樣方法以Vc作陽(yáng)性對(duì)照，按照如下公式計(jì)算DPPH·自由基的清除率，并計(jì)算半清除率質(zhì)量濃度(IC50)，

DPPH·清除率=[A空白-(A樣品-A對(duì)照)]/A空白×100%。

1.4.2.3ABTS·自由基清除實(shí)驗(yàn)

精密吸取不同濃度的樣品溶液200 μL于具塞試管中，然后加入2 mL ABTS溶液混勻(空白組用溶劑代替樣品，對(duì)照組用溶劑代替ABTS溶液)。以上3組在室溫下避光放置30 min，于734 nm處測(cè)定吸光度。按照同樣方法以Vc作陽(yáng)性對(duì)照，按照如下公式計(jì)算ABTS·自由基的清除率，并計(jì)算半清除率質(zhì)量濃度(IC50)，

ABTS·消除率=[A空白-(A樣品-A對(duì)照)]/A空白×100%。

2結(jié)果與分析

2.1總多酚含量

通過(guò)對(duì)殼斗科植物種子中多酚類(lèi)含量測(cè)定結(jié)果(表1)可知，殼斗科植物種子中均含有多酚類(lèi)成分，飯甑青岡種子中的總多酚含量最高(14.16%)，其次為大葉櫟(10.89%)，栲含量最低(0.44%)，各植物種子間多酚類(lèi)物質(zhì)含量差異大。

表1不同樣品多酚含量(n=3)

Table 1Polyphenol content of samples(n=3)

樣品Samples多酚含量Polyphenolcontent(%)RSD(%)青岡櫟種子SeedsofCyclobalanopsisglauca5.111.43飯甑青岡種子SeedsofCyclobalanopsisfleuryi14.161.56大葉櫟種子SeedsofQuercusgriffithii10.891.92栲種子SeedsofCastanopsisfargesii0.442.10椆木種子SeedsofLithocarpusthalassica1.311.04

2.2抗氧化能力

2.2.1DPPH·自由基清除能力

在同一質(zhì)量濃度下，經(jīng)DPPH·自由基清除實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，吸光度越小說(shuō)明樣品消除能力越強(qiáng)。如表2所示，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，樣品質(zhì)量濃度與DPPH·清除能力具有明顯的量效關(guān)系。青岡櫟種子、飯甑青岡種子提取物樣品的DPPH·清除能力與Vc相當(dāng)，大葉櫟種子提取物的DPPH·清除能力最弱，這可能與植物的多酚類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)有關(guān)。

2.2.2ABTS·自由基清除能力

在一定質(zhì)量濃度下，經(jīng)ABTS·自由基清除實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，吸光度越小說(shuō)明樣品消除能力越強(qiáng)。由表3可知，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，樣品質(zhì)量濃度與ABTS·清除能力具有明顯的量效關(guān)系。樣品中除椆木種子提取物外，其他提取物均表現(xiàn)出較強(qiáng)的ABTS·清除能力，其中青岡櫟種子提取物的ABTS·清除能力最強(qiáng)，在同等質(zhì)量濃度下青岡櫟種子提取物IC50優(yōu)于Vc，飯甑青岡IC50與Vc相當(dāng)。

表2樣品清除DPPH·自由基能力

Table 2The capability of DPPH· radical scavenging of samples

樣品SamplesIC50(mg·ml-1)青岡櫟種子SeedsofCyclobalanopsisglauca0.38飯甑青岡種子SeedsofCyclobalanopsisfleuryi0.43大葉櫟種子SeedsofQuercusgriffithii4.88栲種子SeedsofCastanopsisfargesii1.10椆木種子SeedsofLithocarpusthalassica3.84Vc0.41

表3樣品清除ABTS·自由基能力

Table 3The capability of ABTS· radical scavenging of samples

樣品SamplesIC50(mg·ml-1)青岡櫟種子SeedsofCyclobalanopsisglauca0.13飯甑青岡種子SeedsofCyclobalanopsisfleuryi0.61大葉櫟種子SeedsofQuercusgriffithii2.17栲種子SeedsofCastanopsisfargesii1.96椆木種子SeedsofLithocarpusthalassica4.97Vc0.31

3結(jié)論

通過(guò)對(duì)殼斗科植物種子中多酚類(lèi)含量的測(cè)定可知，飯甑青岡種子中的總多酚含量最高(14.16%)，其次為大葉櫟(10.89%)，栲含量最低(0.44%)，各植物種子間多酚類(lèi)物質(zhì)含量差異比較大。綜合2種抗氧化能力試驗(yàn)結(jié)果表明，青岡櫟種子提取物的還原能力均高于對(duì)照品Vc，飯甑青岡種子提取物與對(duì)照品Vc相當(dāng)。因此，殼斗科植物中，青岡櫟與飯甑青岡種子提取物可作為天然抗氧化劑應(yīng)用于保健品、化妝品乃至藥品等行業(yè)。

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(責(zé)任編輯：米慧芝)

Content and Antioxidant Capacity of Polyphenols from the Seeds of Fagaceae Plants

WANG Yafeng,HUANG Yonglin,LIU Jinlei,YAN Xiaojie,CHEN Yueyuan,Yan Ziming,HE Ruijie,LI Dianpeng

(Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals Research and Utilization,Guangxi Institute of Botany,Guangxi Zhuang Autonomous Region and the Chinese Academy of Sciences，Guilin，Guangxi，541006，China)

Abstract:【Objective】The content of polyphenols from the seeds of Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst.,Cyclobalanopsis fleuryi (Hickel.et A.Camus) Chun ex Q.F.Zheng,Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.,Castanopsis fargesii and Lithocarpus thalassica (Hance) Rehd.was determined,antioxidant capacities of their extract were compared,and the relationship between the content of polyphenols and antioxidant capacity was analyzed.【Methods】The content of polyphenols was determined by the method of Folin-phenol,and antioxidant capacities of their extract were compared by DPPH· and ABTS· radical scavenging.【Results】The content of polyphenols from C.fleuryi was the highest (14.16%),followed by Q.griffithii(10.89%),and C.fargesii was the lowest (0.44%),and all extracts showed good antioxidant capacity.The IC50value of C.glauca was better than that of Vc,and the IC50of C.fleuryi was similar to that of Vc.【Conclusion】The extracts from the seeds of C.glauca and C.fleuryi could be used in health care products, cosmetics and even pharmaceuticals.

Key words:Fagaceae，polyphenols，content determination，antioxidant capacity

收稿日期：2015-11-12

作者簡(jiǎn)介：王亞鳳 (1990-)，女，碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。

中圖分類(lèi)號(hào)：TS255.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1005-9164(2016)02-0180-04

修回日期：2016-01-18

*廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014GXNSFCB118001)，中國(guó)科學(xué)院“西部之光”人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(科發(fā)人字[2013]165號(hào))，廣西科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(15YJ22ZWS22)，廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目(ZRJJ2013-7，ZRJJ2014-1)和廣西壯族自治區(qū)八桂學(xué)者專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目資助。

**通信作者：黃永林(1974-),男，博士，研究員，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)及開(kāi)發(fā)利用研究,E-mail:hyl@gxib.cn。

廣西科學(xué)Guangxi Sciences 2016,23(2):180～183,188

網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2016-03-15

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