劉衛(wèi)蘭，呂會(huì)茹，牛小艷（洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 洛陽 471000）

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全自動(dòng)免疫組化儀應(yīng)用的探討

劉衛(wèi)蘭，呂會(huì)茹，牛小艷
（洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 洛陽 471000）

摘 要：文章總結(jié)全自動(dòng)免疫組化儀的使用步驟和維護(hù)保養(yǎng)，并且利用全自動(dòng)免疫組化染色儀對(duì)比人工操作，選取臨床工作中淋巴瘤和乳腺癌組織標(biāo)本各20例進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果：全自動(dòng)免疫組化儀染色強(qiáng)度高，著色均勻，陽性定位準(zhǔn)確，背景清晰，基本無邊緣效應(yīng)。因此得出結(jié)論：全自動(dòng)免疫組化儀具有較成熟和完善的操作步驟，易操作、易掌握；自動(dòng)免疫組化染色儀可以避免人工操作的錯(cuò)誤和誤差，免疫組化操作和試劑的標(biāo)準(zhǔn)化強(qiáng)、重復(fù)性好、便于玻片歸檔、安全環(huán)保，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加客觀、更加科學(xué)。

關(guān)鍵詞：全自動(dòng)免疫組化儀；人工操作；維護(hù)和保養(yǎng)

1 材料與方法

1.1材料

本院使用的是德國Leica Bond-Max全自動(dòng)免疫組化儀，包含檢測(cè)試劑組塊、染色組塊、散裝液體組塊及廢液收集組塊等。每個(gè)Bond-Max有3個(gè)玻片盤，同時(shí)最多可容納30張玻片，而每個(gè)玻片盤可獨(dú)立執(zhí)行不同程序；Bond-Max由電腦控制儀器的程序，完全可以滿足工作量超大實(shí)驗(yàn)室的需求。選用本院淋巴瘤和乳腺癌組織標(biāo)本各20例，分別進(jìn)行手工及全自動(dòng)免疫組化儀染色的對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

2 方法

全自動(dòng)免疫組化儀的工作方法包括：烤片、脫蠟、抗原修復(fù)、阻斷、標(biāo)記一炕、標(biāo)記二抗、顯色直到復(fù)染，這些都可以由Bond-Max自動(dòng)完成，真正實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)操作。

2.1步驟一

先確認(rèn)清空有毒廢液容器，實(shí)驗(yàn)試劑放置正確并充足；再啟動(dòng) Bond 系統(tǒng)，并進(jìn)行儀器初始自檢。

2.2步驟二

3.4 腸道菌群與更年期綜合征 更年期綜合征指部分婦女由于卵巢功能衰退或喪失，因性激素波動(dòng)或急劇減少，引起機(jī)體內(nèi)分泌失調(diào)、免疫力低下和植物神經(jīng)紊亂的癥候群，可導(dǎo)致全身多個(gè)系統(tǒng)的病理變化[28]。近年來越來越多研究證明，腸道菌群的改變會(huì)引起體內(nèi)代謝紊亂，且與高級(jí)神經(jīng)精神活動(dòng)存在密切關(guān)系，說明腸道菌群改變可能與更年期的一系列癥候群存在一定關(guān)系。郭在清[29]研究結(jié)果顯示，更年期綜合征人群腸道雙歧桿菌數(shù)量顯著減少，腸桿菌科及腸球菌細(xì)菌數(shù)量顯著增加，益生菌群與腸桿菌科結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可能更年期綜合征人群由于神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)等健康狀態(tài)的下降，引起腸道有益菌群與腐敗菌比例發(fā)生變化，從而引起腸道微生態(tài)失調(diào)。

選用本院淋巴瘤和乳腺癌組織標(biāo)本各20例，分別進(jìn)行手工及全自動(dòng)免疫組化儀染色的對(duì)比，對(duì)病例的蠟塊進(jìn)行切片、裱片，并在烤片箱里進(jìn)行烤1-2h為宜，抗體滲透組織要求徹底清除石蠟，如果未充分清除，石蠟層將會(huì)干擾甚至抑制抗體與抗原的結(jié)合［2］；手工染色方法采用Envison兩步法，自動(dòng)染色方法使用計(jì)算機(jī)操作程序，將日常使用的指標(biāo)進(jìn)行染色流程的編輯設(shè)置。［3］

2.3步驟三

在免疫組化染色過程中，抗原性保存完整、不彌散或丟失是實(shí)驗(yàn)成功的重要保證。［4］常用一抗的配制，并且掃描包括二抗、DAB顯色等的試劑盒；將試劑脫蠟液、氯化鈉檸檬酸鈉、CC1細(xì)胞預(yù)處理液、CC2細(xì)胞預(yù)處理液等按比例進(jìn)行調(diào)配。

2.4步驟四

在Bond軟件上輸入病例玻片上的詳細(xì)信息，主要包括免疫指標(biāo)、病理號(hào)、免疫號(hào)等病人信息，再將貼好標(biāo)簽的玻片放置在玻片架上。

2.5步驟五

先將本次裝有一抗試劑容器的試劑架和二抗組合試劑架，一同安裝在主機(jī)操作儀的平臺(tái)上，然后設(shè)置染色切片數(shù)和開始或結(jié)束時(shí)間，再點(diǎn)擊計(jì)算機(jī)操作軟件中的“啟動(dòng)”命令，此后所有染色工作均由機(jī)器自動(dòng)完成。

2.6步驟六

操作完成后，按下“結(jié)束”按鈕，取出切片后先用洗潔精清洗，再進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、封片等操作。

3 結(jié)果

下圖1和2顯示針對(duì)乳腺癌的全自動(dòng)免疫組化儀與人工染色的結(jié)果；表1中列出針對(duì)淋巴瘤全自動(dòng)免疫組化儀與人工染色的結(jié)果比較（部分值）。

4 討論

4.1檢測(cè)手段更加科學(xué)

全自動(dòng)免疫組化染色儀對(duì)抗體都設(shè)定了科學(xué)的染色流程，并具有激光掃描條碼功能，計(jì)算機(jī)程序自動(dòng)控制能夠自動(dòng)識(shí)別抗體滴加，使得反應(yīng)條件都更加準(zhǔn)確。這樣就避免了人工操作而可能產(chǎn)生的失誤，如，切片和試劑碼擺放順序的錯(cuò)誤、抗體滴加錯(cuò)誤，［5］以及因操作不當(dāng)而帶來的假陽性、假陰性出現(xiàn)等。

4.2檢測(cè)結(jié)果更加精確

免疫組化結(jié)果的判斷至關(guān)重要，一般是先要看陽性內(nèi)對(duì)照的情況，其次要分析陽性染色的部位是否正確，再次要結(jié)合HE染色切片確定免疫染色陽性的組織或細(xì)胞是否為腫瘤或有意義的組織和細(xì)胞。［6］

圖1 乳腺癌ER自動(dòng)免疫組化儀染色圖

圖2 乳腺癌ER人工染色圖

表1 全自動(dòng)免疫組化儀與人工染色的鏡下對(duì)比結(jié)果

上圖和表中顯示了全自動(dòng)免疫組化儀和人工染色的差別，全自動(dòng)免疫組化儀有效避免了人工出現(xiàn)的誤差和錯(cuò)誤，保證了染色結(jié)果的均一性和可重復(fù)性，染色結(jié)果強(qiáng)度高，著色均勻，陽性定位準(zhǔn)確，背景清晰，基本無邊緣效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加客觀、更加科學(xué)。

4.3 檢測(cè)過程效率高

通過對(duì)全自動(dòng)免疫組化儀的染色時(shí)間進(jìn)行合理設(shè)置，可以解決切片數(shù)量少的問題、并且節(jié)約人力、大大提高了工作效率。例如，使用一種抗體實(shí)驗(yàn)時(shí)，為了節(jié)省標(biāo)簽，可以直接指定抗體放置的位置，無須通過機(jī)器掃描，節(jié)省實(shí)驗(yàn)的時(shí)間和步驟。

4.4 檢測(cè)過程有記錄

全自動(dòng)免疫組化儀有完整的操作記錄。每張玻片都有詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)信息，包含實(shí)驗(yàn)時(shí)間，試劑的批次和有效期等。［7］儀器會(huì)提醒用戶已經(jīng)過期的試劑，避免造成的實(shí)驗(yàn)誤差。［8］此外，全自動(dòng)免疫組化染色儀還可以特殊染色、進(jìn)行不同的免疫組化方法操作，同時(shí)還具有沖洗過程徹底，減少有毒物質(zhì)對(duì)人體損害，可以配套使用打印機(jī)，可將廢液集中回收，安全環(huán)保等優(yōu)勢(shì)。

5 維護(hù)與保養(yǎng)

全自動(dòng)免疫組化儀的精密性、科學(xué)性是其發(fā)揮作用的重要保證，日常保養(yǎng)與維護(hù)就顯得非常重要。實(shí)驗(yàn)儀器一般需要進(jìn)行短時(shí)日常保養(yǎng)和長時(shí)定期維護(hù)。

5.1短時(shí)日常保養(yǎng)

每天工作結(jié)束時(shí)后，利用全自動(dòng)免疫組化的“清洗/清理”程序開啟清洗功能對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)清洗。同時(shí)用稀釋后的消毒滅菌溶液對(duì)各種AFM試劑瓶進(jìn)行清潔，并在空氣中風(fēng)干；使用稀釋后的84消毒液對(duì)CovertileTM進(jìn)行消毒，并在下次開始工作前用蒸餾水清洗干凈后風(fēng)干；使用前，用無絨棉布和醫(yī)用酒精清潔玻片染色裝置；可用消毒滅菌液清洗切片托盤，并輕輕擦拭電熱板，［8］使滅菌液存留約15 min后洗去。

5.2長時(shí)定期維護(hù)

每個(gè)月定時(shí)用強(qiáng)效清洗劑清洗各種大容器，然后用去離子水漂凈，待容器干燥后重新裝新鮮試劑并將容器放回儀器；此外，全自動(dòng)免疫組化儀具有每3個(gè)月進(jìn)行全面消毒滅菌的提示，同時(shí)要求每6個(gè)月（ 或當(dāng)制片達(dá)到一定數(shù)量時(shí)），需要專業(yè)人員進(jìn)行一次全面維護(hù)。

6 總結(jié)

近些年來，全自動(dòng)免疫組化儀在病理診斷中發(fā)揮越來越重要的作用。全自動(dòng)免疫組化儀具有較成熟和完善的操作步驟，易操作、易掌握；對(duì)比人工操作，全自動(dòng)免疫組化儀具有工作效率高，免疫組化操作和免疫組化試劑的標(biāo)準(zhǔn)化強(qiáng)，重復(fù)性好、便于玻片歸檔、安全環(huán)保，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的背景清晰、著色均勻、染色結(jié)果可靠、基本無邊緣效應(yīng)、陽性定位準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

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ADiscussio n of Application for Automatic Immunohistoche-mistry Instrument

Liu Weilan， Lv Huiru， Niu Xiaoyan
（Luoyang Vocational&Technical College， Luoyang， 471000，China）

Abstract:Is reviewed in this paper automatic immunohistochemistry instrument using the steps and maintenance， and the use of automatic immune staining instrument compared to the artificial operation， select clinical lymphoma and breast cancer tissues， 20 cases in each were detected. Test results: the whole automatic immunohistochemistry staining intensity is high， the color is even， the positive position is accurate， the background is clear， the basic no edge effect. So we can draw the conclusion: full automatic immunohistochemistry instrument with the maturity and perfect operation procedure， easy to operate， easy to grasp； Auto Immune Histochemistry instrument can avoid artificial operation error， standardization of immunohistochemical operation and reagent， good repeatability， easy to slide archive，safety and environmental protection， experimental results are more objective， more scientific.

key words:automatic immunohistochemistry instrument； manual operation； care and maintenance

作者簡(jiǎn)介：劉衛(wèi)蘭（1979-），女，河南洛陽人，助理實(shí)驗(yàn)師；研究方向：生物與生理教學(xué)研究。