陳 亨， 方 軍， 滕爽爽， 肖國強(qiáng)， 張炯明， 柴雪良， （. 溫州醫(yī)科大學(xué) 生命科學(xué)院、檢驗醫(yī)學(xué)院， 浙江 溫州325035； 2. 浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所， 浙江 溫州325005； 3. 浙江省近岸水域生物資源開發(fā)和保護(hù)重點實驗室， 浙江 溫州 325005； 4. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院海洋貝類工程技術(shù)研究中心， 浙江 溫州 325005）

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單體牡蠣誘導(dǎo)變態(tài)的研究

陳 亨1， 方 軍2， 3， 4， 滕爽爽2， 3， 4， 肖國強(qiáng)2， 3， 4， 張炯明2， 3， 4， 柴雪良1， 2， 3， 4
（1. 溫州醫(yī)科大學(xué) 生命科學(xué)院、檢驗醫(yī)學(xué)院， 浙江 溫州325035； 2. 浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所， 浙江 溫州325005； 3. 浙江省近岸水域生物資源開發(fā)和保護(hù)重點實驗室， 浙江 溫州 325005； 4. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院海洋貝類工程技術(shù)研究中心， 浙江 溫州 325005）

為了得到殼型規(guī)則、大小均一的單體牡蠣， 作者以葡萄牙牡蠣（Crassostrea angulata）和長牡蠣（Crassostrea gigas）眼點幼蟲為材料， 從腎上腺素（EPI）濃度梯度、處理時間梯度和眼點幼蟲密度梯度3個因素誘導(dǎo)產(chǎn)生不固著變態(tài)的單體牡蠣。結(jié)果表明， 葡萄牙牡蠣用EPI處理24 h的最適濃度為5×10–4mol/L，不固著變態(tài)率為72.8%， 在該最適濃度下， 最佳處理時間為12 h， 不固著變態(tài)率為82.7%。長牡蠣用EPI處理6 h的最適濃度為5×10–5mol/L， 不固著變態(tài)率為53.2%， 在該最適濃度下， 最佳處理時間為8h， 不固著變態(tài)率為56.8%， 眼點幼蟲密度在80個/mL以下EPI處理效果沒有顯著性差異。對長牡蠣幼蟲進(jìn)行后續(xù)生長測定， 結(jié)果顯示EPI處理組幼蟲的殼長、殼高和存活率要高于對照組， 表明EPI可能促進(jìn)牡蠣幼蟲變態(tài)長出次生殼并提高其生存能力。

葡萄牙牡蠣（Crassostrea angulata）； 長牡蠣（Crassostrea gigas）； 單體牡蠣； 不固著變態(tài)

［Foundation： Mariculture Technology Innovation Team Project III of Wen-Zhou City（C20120004-3）； The test station of national shellfish-industry technology system （CARS-48）； The operation service platform of aquatic germplasm resources（2014DKA30470）； Scientific technology project of Zhejiang Province（2013F50016）］

牡蠣屬于軟體動物門（Mollusca）、瓣鰓綱（Lamellibranchia）、珍珠貝目（Pterioida）、牡蠣科（Ostreidae），是中國沿海最重要的經(jīng)濟(jì)型養(yǎng)殖貝類， 是世界上第一大養(yǎng)殖貝類， 其種類繁多， 分布廣泛。全世界有100多種， 中國已發(fā)現(xiàn)20余種。據(jù)農(nóng)業(yè)部統(tǒng)計， 2012年中國牡蠣養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)394.8817萬t， 占貝類養(yǎng)殖總產(chǎn)量的32.7%。尤其是福建和廣東， 其牡蠣養(yǎng)殖產(chǎn)量占總產(chǎn)量的37.4%和26.0%［1］。

近幾年來， 隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大， 牡蠣產(chǎn)量大大提高， 但牡蠣的養(yǎng)殖也存在很多問題， 如群聚的牡蠣受生長空間的限制， 大小相差懸殊， 殼形極不規(guī)則， 采用貝殼、橡皮條等做為固著基進(jìn)行筏式養(yǎng)殖，因牡蠣殼形和固著基不規(guī)則， 在沿海地區(qū)常年的風(fēng)浪沖擊下極易脫落。由于養(yǎng)殖環(huán)境、品質(zhì)等因素， 中國養(yǎng)殖的牡蠣價格十分低廉， 僅為國際市場價格20%左右［2］。目前， 國際上發(fā)達(dá)國家的牡蠣養(yǎng)殖主要采用單體牡蠣養(yǎng)殖的方式， 中國早在20世紀(jì)70年代后期就開始誘導(dǎo)單體牡蠣的生產(chǎn)， 目前國內(nèi)也有單體牡蠣的筏式籠養(yǎng)［3-5］， 但發(fā)展緩慢。單體牡蠣具有外形美觀、大小均勻、易于加工和運輸、便于控制養(yǎng)殖密度等優(yōu)點， 能在一定程度上解決牡蠣品質(zhì)不高、死亡率高等問題。其次， 單體牡蠣便于筏式籠養(yǎng)和管理，能提高抗風(fēng)浪能力和單位面積產(chǎn)量， 經(jīng)濟(jì)價值較高。

浙江省樂清市是“貝類養(yǎng)殖發(fā)祥地”之一， 而樂清清江是“中國牡蠣之鄉(xiāng)”， 地處樂清灣西岸， 葡萄牙牡蠣（Crassostrea angulata）已成為樂清灣的優(yōu)勢品種。葡萄牙牡蠣也稱僧帽牡蠣（Ostrea cucullata）， 主要分布于中國南方沿海， 原產(chǎn)于歐洲沿海， 具有個體大、適應(yīng)力強(qiáng)、養(yǎng)殖周期短、味道鮮美等優(yōu)點。長牡蠣（Crassostrea gigas）， 也稱太平洋牡蠣， 為沿海地區(qū)20世紀(jì)80年代從日本引進(jìn)， 具有個體大、生長快、產(chǎn)量高等優(yōu)點， 是中國牡蠣養(yǎng)殖的主要品種之一。國內(nèi)有一些關(guān)于陽離子和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)貝類幼蟲附著和變態(tài)的報道［6-17］， 國外也有一些關(guān)于神經(jīng)遞質(zhì)誘導(dǎo)單體牡蠣的報道［18-20］。但關(guān)于單體牡蠣的研究甚少且未見誘導(dǎo)單體葡萄牙牡蠣的報道； 其次，同種牡蠣因地域、培養(yǎng)條件等差異導(dǎo)致最適EPI濃度差異， 楊愛國等［10］、Coon 等［11］誘導(dǎo)單體長牡蠣的最適EPI濃度為10–4mol/L，方琦等［12］誘導(dǎo)單體長牡蠣和僧帽牡蠣的最適EPI濃度是5×10–5mol/L， Beiras等［19］誘導(dǎo)單體長牡蠣的最適EPI濃度為10–4mol/L。作者從濃度、時間、幼蟲密度梯度3個方面用EPI對葡萄牙牡蠣和長牡蠣進(jìn)行不固著變態(tài)的誘導(dǎo)， 為樂清灣牡蠣人工單體育苗提供了科學(xué)理論和技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 材料

實驗于2014年4月25日和2014年5月21日在浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所清江基地進(jìn)行， 試驗材料分別為葡萄牙牡蠣和長牡蠣眼點幼蟲， 葡萄牙牡蠣取自福建廈門， 長牡蠣取自山東威海， 平均殼長分別為（332 ± 18）μm和（320 ± 37）μm。通過人工解剖牡蠣親貝獲得卵子和精子， 洗卵， 人工受精， 獲得受精卵， 于24℃海水中培養(yǎng)25 d得到眼點幼蟲， EPI 來自SIGMA。

1.2 方法

1.2.1 葡萄牙牡蠣誘導(dǎo)實驗

將葡萄牡蠣眼點幼蟲放到1.5 L塑料杯中并充氣，控制牡蠣幼蟲的密度為10個/mL。將EPI配成5×10–4、1×10–4、5×10–5、1×10–5、5×10–6、1×10–6mol/L 的EPI 濃度梯度， 設(shè)3個平行組。將幼蟲在不同的EPI濃度下處理24 h， 然后測定牡蠣幼蟲的不固著變態(tài)率， 確定EPI誘導(dǎo)的最適濃度； 用最適濃度處理眼點幼蟲0.5、1、2、4、10、12、24 h， 測定EPI誘導(dǎo)的最佳處理時間（誘導(dǎo)葡萄牙牡蠣不固著變態(tài)的最適濃度表示EPI處理24 h的最適濃度， 最佳時間表示5×10–4mol/L EPI處理的最佳時間）。

1.2.2 長牡蠣誘導(dǎo)實驗

控制長牡蠣幼蟲的密度為10個/mL， 將EPI配成0、5×10–4、1×10–4、5×10–5、1×10–5、5×10–6mol/L 的EPI濃度梯度， 設(shè)3個平行組。將幼蟲在不同的EPI濃度下處理6 h， 藥物過濾8 h后測定牡蠣幼蟲的不固著變態(tài)率， 確定EPI誘導(dǎo)的最適濃度； 用最適濃度處理眼點幼蟲0.5、1、2、4、8、12 h， 藥物過濾8 h后測定EPI誘導(dǎo)的最佳處理時間； 用最適EPI濃度和最佳處理時間處理密度為5、10、20、50、80個/mL的牡蠣眼點幼蟲， 藥物過濾8 h后測定EPI誘導(dǎo)的最佳幼蟲密度（誘導(dǎo)長牡蠣不固著變態(tài)的最適濃度表示EPI處理6 h的最適濃度， 最佳時間表示5×10–5mol/L EPI處理的最佳時間， 最佳幼蟲密度表示5×10–5mol/L EPI處理8 h的最佳幼蟲密度）。

繼續(xù)對不同濃度、時間、密度梯度處理組進(jìn)行培養(yǎng)， 每天喂料兩次， 換水1次（換水量4/5）， 每天測定牡蠣幼蟲的殼長、殼高（30個）、存活率， 比較觀察后續(xù)1周的生長情況差異。

1.2.3 測量

存活率測定方法： 取10 mL處理后的樣液對幼蟲總數(shù)及死亡數(shù)進(jìn)行計數(shù)， 存活率/%=［（幼蟲總數(shù)–死亡數(shù)）/幼蟲總數(shù)］×100%。

變態(tài)率測定方法： 取10 mL樣液， 將幼蟲置于載玻片上， 輕輕搖晃使變態(tài)不游動的幼蟲集中到載玻片中間， 以次生殼長出、鰓發(fā)達(dá)、面盤消失和足部退化為變態(tài)標(biāo)志， 對變態(tài)幼蟲進(jìn)行計數(shù)， 再用碘酊處理， 對幼蟲總數(shù)進(jìn)行計數(shù)， 計算變態(tài)率。

幼蟲殼長殼寬的測定方法： 取10 mL樣液置于顯微鏡下拍照， 隨機(jī)取30個牡蠣幼蟲， 用ImageJ軟件測定殼長、殼高， 乘以放大倍數(shù)得到實際殼長、殼高。

1.2.4 統(tǒng)計分析

用SPSS17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析， 并用Tukey和DunnettT3進(jìn)行多重比較。不同字母代表差異顯著性P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同EPI濃度梯度誘導(dǎo)產(chǎn)生單體牡蠣

2.1.1 葡萄牙牡蠣

實驗中分別用5×10–4、1×10–4、5×10–5、1×10–5、5×10–6、1×10–6mol/L腎上腺素（EPI）對葡萄牙牡蠣眼點幼蟲進(jìn)行誘導(dǎo)24 h。根據(jù)幼蟲的變態(tài)情況發(fā)現(xiàn)5×10–4mol/L EPI處理效果最好， 不固著變態(tài)率為72.8%， 存活率為91.3%（圖1）。

2.1.2 太平洋牡蠣

實驗中分別用0、5×10–4、1×10–4、5×10–5、1×10–5、5×10–6mol/L腎上腺素（EPI）對長牡蠣眼點幼蟲進(jìn)行誘導(dǎo)6 h， 藥物過濾后8 h測定。根據(jù)幼蟲的變態(tài)情況發(fā)現(xiàn)1×10–4和5×10–5mol/L EPI 處理的不固著變態(tài)率較高， 分別為54.5% 和53.2%， 5×10–4mol/L EPI處理的不固著變態(tài)率僅為38.5%， 且對長牡蠣幼蟲的活力有強(qiáng)烈的抑制作用（圖2 a）。

對不同濃度梯度長牡蠣幼蟲進(jìn)行后續(xù)生長測定，測定幼蟲的殼長、殼高和存活率。前3 d各處理組90%以上存活； 第四天5×10–4mol/L 處理組的幼蟲大量死亡， 10%以下存活， 其余各處理組的幼蟲少量死亡， 60%以上存活； 第五天5×10–4mol/L 處理組和對照組的幼蟲基本死亡， 其余各處理組的幼蟲存活率為10%且存活的均為有明顯次生殼的大個體（圖2 b）。幼蟲殼長和殼高變化趨勢相近， 前3 d變化不明顯，第四天5×10–5mol/L EPI處理組的幼蟲居首， 第五天1×10–4、5×10–5mol/L EPI 處理組的幼蟲明顯高于對照組和5×10–4mol/L 處理組（圖3）。綜合各因素， EPI處理的最適濃度為5×10–5mol/L。

圖1 不同EPI 濃度處理葡萄牙牡蠣眼點幼蟲的不固著變態(tài)率（a）和存活率（b）Fig.1 Metamorphic （a） and survival （b） rates for Crassostrea angulata eyed-larvae exposed to different concentrations of epinephrine （EPI）

圖2 不同的EPI 濃度處理長牡蠣眼點幼蟲的不固著變態(tài)率（a）和存活率（b）Fig.2 Metamorphic （a） and survival （b） rates for Crassostrea gigas eyed-larvae exposed to different concentrations of epinephrine （EPI）

圖3 不同EPI濃度處理的長牡蠣幼蟲殼長（a）、殼高（b）變化Fig.3 Changes in the shell length （a） and shell height （b） of Crassostrea gigas larvae exposed to different concentrations of epinephrine （EPI）

2.2 不同時間梯度誘導(dǎo)產(chǎn)生單體牡蠣

2.2.1 葡萄牙牡蠣

本實驗用5×10-4mol/L EPI 對葡萄牙牡蠣眼點幼蟲分別處理0.5、1、2、4、10、12、24 h。根據(jù)幼蟲的變態(tài)情況發(fā)現(xiàn)12 h EPI 處理效果最好， 變態(tài)率為82.7%， 存活率為89.8% （圖4）。EPI處理24 h幼蟲變態(tài)率為88.9%， 略高于處理12 h的變態(tài)率， 存活率為89.2%， 兩者未見顯著性差異， 可能需要進(jìn)行后續(xù)生長跟蹤， 但幼蟲活力下降， 主要表現(xiàn)為伸縮能力下降。

圖4 葡萄牙牡蠣眼點幼蟲經(jīng)5×10–4mol/L EPI處理的不固著變態(tài)率（a）和存活率（b）Fig.4 Metamorphic （a） and survival （b） rates for Crassostrea angulata eyed-larvae exposed to 5 × 10?4mol/L epinephrine （EPI）

2.2.2 長牡蠣

本實驗用5×10–5mol/L EPI 對長牡蠣眼點幼蟲分別處理0.5、1、2、4、8、12 h， 藥物過濾后8 h測定。根據(jù)幼蟲的變態(tài)情況發(fā)現(xiàn)， EPI 處理后2 h內(nèi)，幼蟲變態(tài)率快速增加， 此后繼續(xù)上升， 但上升的趨勢減緩， 8 h處理組的變態(tài)率最高， 達(dá)到56.8%（圖5 a）。

圖5 長牡蠣眼點幼蟲經(jīng)5×10–5mol/L EPI處理的不固著變態(tài)率（a）和存活率（b）Fig.5 Metamorphic （a） and survival （b） rates for Crassostrea gigas eyed-larvae exposed to 5 × 10?5mol/L epinephrine （EPI）

對不同時間梯度長牡蠣幼蟲進(jìn)行后續(xù)生長測定，測定幼蟲的殼長、殼高和存活率。前3 d各處理組90%以上存活； 第四天0.5 h處理組存活率最高， 90%以上存活， 12 h處理組和對照組50%以上存活， 其余各處理組70%以上存活； 第五天對照組的幼蟲基本死亡， 2和4 h處理組15%以上存活， 其余各處理組10%以下存活且存活的都是有明顯次生殼的大個體（圖5 b）。幼蟲的殼長、殼高前兩天變化不明顯， 第二天后， 藥物處理組的殼長、殼高始終高于對照組，處理2 h后的殼長、殼高變化趨勢不明顯。綜合各因素， EPI的最佳處理時間為8 h（圖6）。

2.3 不同密度梯度誘導(dǎo)產(chǎn)生單體牡蠣

思維品質(zhì)是指個體在思維活動中智力特征的表現(xiàn)，也就是人與人之間的思維活動上表現(xiàn)的差異。培養(yǎng)學(xué)生用英語思維是英語教學(xué)重要目標(biāo)，在教學(xué)的同時優(yōu)化思維品質(zhì)也是教學(xué)任務(wù)之一，但思維品質(zhì)的培養(yǎng)不能一蹴而就的，需要教師創(chuàng)造性的設(shè)計多樣化的教學(xué)活動。開放性問題、智力游戲問題、探索性問題是別出心裁、創(chuàng)意新、情景實、思維價值高的一類新題型，它們具有開發(fā)智力、激活思維、增加創(chuàng)新能力的潛在功能。這類問題的出現(xiàn)，為學(xué)生創(chuàng)設(shè)了一個嶄新的英語情景。給學(xué)生以再發(fā)現(xiàn)、再創(chuàng)造的思維空間。為此，課堂教學(xué)中，教師的提問，學(xué)生的練習(xí)，都要設(shè)計編擬一些思維活、立意新、探索性強(qiáng)的問題，促使學(xué)生思維開放。

本實驗用5×10–5mol/L EPI 對5、10、20、50、80個/mL長牡蠣眼點幼蟲處理8 h， 藥物過濾后8 h測定。根據(jù)幼蟲變態(tài)情況發(fā)現(xiàn)， 各密度梯度的幼蟲變態(tài)率相差不明顯， 20個/mL 處理組的變態(tài)率最高，達(dá)到52.1%（圖7 a）。

對不同密度梯度長牡蠣幼蟲進(jìn)行后續(xù)生長測定，測定幼蟲的殼長、殼高和存活率。前3 d各處理組90%以上存活； 第四天5和10個/mL處理組存活率最高， 50%以上存活， 20和50個/mL處理組20%以上存活， 80個/mL處理組基本死亡； 第五天80個/mL處理組的幼蟲全部死亡， 20和50個/mL處理組5%以下存活， 5和10個/mL處理組10%以上存活且存活的都是有明顯次生殼的大個體（圖7 b）。幼蟲的殼長、殼高前3 d變化不明顯， 第四天， 5和10個/mL處理組的殼長、殼高明顯高于其他組， 第五天， 5個/mL處理組的殼長、殼高最大。綜合各因素， 幼蟲密度在80個/mL以下EPI的處理效果無顯著性差異， 但最適培養(yǎng)密度為5～10個/mL（圖8）。

圖6 不同時間處理梯度的長牡蠣幼蟲殼長（a）、殼高（b）變化Fig.6 Changes in the shell length （a） and shell height （b） of Crassostrea gigas larvae exposed to epinephrine （EPI） for different lengths of time

圖7 長牡蠣不同幼蟲密度經(jīng)5×10–5mol/L EPI處理8h的不固著變態(tài)率（a）和存活率（b）Fig.7 Metamorphic （a） and survival （b） rates for Crassostrea angulata eyed-larvae maintained at different densities and exposed to 5 × 10–5mol/L epinephrine （EPI） for 8 h

圖8 不同幼蟲密度梯度長牡蠣幼蟲殼長（a）、殼高（b）變化Fig.8 Changes in the shell length （a） and shell height （b） of Crassostrea gigas larvae maintained at different densities

3 討論

3.1 單體牡蠣誘導(dǎo)變態(tài)的EPI濃度、處理時間和幼蟲密度結(jié)果分析

本文與當(dāng)前國內(nèi)外用EPI誘導(dǎo)產(chǎn)生單體牡蠣的研究結(jié)果比較見表1， 本文中的實驗材料為葡萄牙牡蠣和長牡蠣眼點幼蟲， Huvet等［21］認(rèn)為葡萄牙牡蠣與長牡蠣形態(tài)相似， 但屬于不同的亞種， 最新的16SrRNA研究表明葡萄牙牡蠣與僧帽牡蠣屬于同一個種。本實驗中葡萄牙牡蠣和長牡蠣最適EPI濃度差異顯著， 其中葡萄牙牡蠣最適EPI濃度偏高，1×10–4mol/L EPI誘導(dǎo)的不固著變態(tài)率僅為30.1%；長牡蠣的最適EPI濃度偏低， 1×10–4和5×10–5mol/L EPI誘導(dǎo)的不固著變態(tài)率分別為54.5%和53.2%?？赡艿脑蚴怯紫x的養(yǎng)殖環(huán)境和生長不同步的差異?？赡芷咸蜒滥迪犑蹺PI的誘導(dǎo)作用沒有長牡蠣敏感，需要更高的濃度或者更長的誘導(dǎo)時間才能起到相同的作用， 可以通過多因素控制變量法更準(zhǔn)確測定最佳EPI濃度和最佳EPI處理時間。其次， 盡管本實驗用100目的篩絹進(jìn)行多次篩選， 依舊難以保證幼蟲處于同步生長階段， 而EPI只能誘導(dǎo)即將變態(tài)的幼蟲。此外， 鹽度、幼蟲密度以及陽離子濃度也可能影響牡蠣眼點幼蟲的變態(tài)， 柯才煥等［16］發(fā)現(xiàn)僧帽牡蠣對低鹽的適應(yīng)能力強(qiáng)， 對高鹽的適應(yīng)能力弱，祁劍飛等［14］發(fā)現(xiàn)K+和Ca2+是葡萄牙牡蠣幼蟲附著變態(tài)的有效誘導(dǎo)劑。李華琳等［22］發(fā)現(xiàn)6～8個/mL幼蟲的生長速度快、同步性好， 10個/mL幼蟲生長速度緩慢。

表1 用EPI誘導(dǎo)產(chǎn)生單體牡蠣的研究結(jié)果比較Tab.1 The effect of different concentrations and exposure times of epinephrine （EPI） on the induction of metamorphosis in cultchless oysters

密度梯度實驗結(jié)果表明EPI對低于80個/mL幼蟲密度的誘導(dǎo)效果差異不明顯， 但不同幼蟲密度的處理組后期殼長、殼高差異顯著， 可能的原因是幼蟲培養(yǎng)密度過大而限制了幼蟲的生長。Coon等［11］提出即使幼蟲密度在150個/mL以上也不影響EPI的誘導(dǎo)作用， 也驗證了在一定范圍內(nèi)， EPI對于高幼蟲密度和低幼蟲密度的誘導(dǎo)效果無明顯差異。因此， 在大批量處理時可以提高幼蟲密度， 但在幼蟲培養(yǎng)期間，要嚴(yán)格控制幼蟲密度。

3.2 單體牡蠣誘導(dǎo)變態(tài)的后續(xù)生長測定結(jié)果分析

此外， 第五天不僅處理組的存活率高于對照組且存活的都是有明顯次生殼的大個體， 處理組的殼長、殼高也明顯高于對照組?？赡茉蚴荅PI除了能誘導(dǎo)牡蠣幼蟲不固著變態(tài)外， 還能加速牡蠣幼蟲變態(tài)長出次生殼， 有明顯次生殼的個體的生存能力要強(qiáng)于無次生殼的個體。

3.3 單體牡蠣誘導(dǎo)變態(tài)方法的缺陷及改進(jìn)

Coon 等［18］證實了幼蟲附著和變態(tài)由兩個獨立的生理機(jī)制控制的， EPI能作用于α1-腎上腺素受體，只誘導(dǎo)幼蟲發(fā)生變態(tài)， 對幼蟲的附著行為無作用。經(jīng)EPI作用后， 幼蟲會快速沉到底部， 本實驗對幼蟲進(jìn)行充氣， 發(fā)現(xiàn)幼蟲依舊沉到底部， 由于幼蟲之間的相互擠壓而限制彼此的運動， 對取樣和不固著變態(tài)率的觀察都造成一定的影響。其次， 藥物經(jīng)過濾除去后， 幼蟲可能對誘導(dǎo)環(huán)境的變化有一定的滯后性， 需要適應(yīng)一段時間才能恢復(fù)活力， 這些幼蟲只是受到藥物的影響而并未發(fā)生變態(tài)。因此， 鑒于葡萄牙牡蠣實驗的不足， 作者在長牡蠣實驗中進(jìn)行了改進(jìn)， 在過濾除去EPI 8h后再進(jìn)行不固著變態(tài)率的測定。從不同時間梯度實驗的對照組中發(fā)現(xiàn)，8h對未經(jīng)EPI處理的幼蟲不固著變態(tài)率的影響不顯著。

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（本文編輯： 譚雪靜）

The induction of metamorphosis in cultchless oysters （Crassostrea angulata and Crassostrea gigas）

CHEN Heng1， FANG Jun2， 3， 4， TENG Shuang-shuang2， 3， 4， XIAO Guo-qiang2， 3， 4，ZHANG Jiong-ming2， 3， 4， CHAI Xue-liang1， 2， 3， 4
（1. School of Laboratory Medicine and Life Science， WenZhou Medical University， Wenzhou 325035， China；2. Zhejiang Mariculture Research Institute， Wenzhou 325005， China； 3. Zhejiang Key Laboratory of Exploitation and Preservation of Coastal Bio-resource， Wenzhou 325005， China； 4. Engineering Research Center for Marine Bivalves， Chinese Academy of Fishery Sciences， Wenzhou 325005， China）

Aug.， 3， 2014

Crassostrea angulata； Crassostrea gigas； cultchless oyster； metamorphosis without settlement

To obtain cultchless oysters with a regular shell shape and uniform size， epinephrine （EPI） was applied to Crassostrea angulata and Crassostrea gigas eye-larvae to induce cultchless metamorphosis. We examined the effect of larval density， concentration of EPI， and length of exposure to EPI to determine optimum levels for each species. For C. angulata， we found that the optimum concentration of EPI was 5×10?4mol/L for a 24 h treatment （metamorphic rate = 72.8%） and the optimum treatment time at this concentration was 12 h （metamorphic rate = 82.7%）. In contrast， in C. gigas， the optimum concentration of EPI was 5×10?5mol/L over 6 h （metamorphic rate = 53.2%）， and the optimum treatment time at this concentration was 8 h （maximum metamorphic rate = 56.8%）. However， there was no significant difference between EPI treatments at larval densities ＜ 80 individuals/mL. The growth of C. gigas was also determined over the following days， which showed that shell length， shell height， and larval survival rate was higher in the treated groups than those in the control groups. Therefore， EPI can facilitate larval metamorphosis and improve their survival ability.

S968. 3

A

1000-3096（2016）01-0010-08

10.11759//hykx20140803003

2014-08-03；

2015-03-06

溫州市水產(chǎn)增養(yǎng)殖技術(shù)創(chuàng)新團(tuán)隊項目（C20120004-3）； 國家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系試驗站項目（CARS-48）； 水產(chǎn)種質(zhì)資源平臺運行服務(wù)項目（2014DKA30470）； 浙江省科技計劃項目（2013F50016）

陳亨（1990-）， 男， 浙江溫州人， 主要從事貝類遺傳育種研究， 電話： 13575448171， E-mail： chenheng0530@163.com； 柴雪良， 通信作者， 電話： 13587969015， E-mail： cxl-5888@163.com