陳秀伶

【摘要】目的：通過HPLC方法測定二甲雙胍在鹽酸二甲雙胍片劑中的含量。方法：在色譜條件：選擇Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，流動相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)至pH=3.5）（32∶78），檢測波長：234 nm， 進樣量10μl，1.0 mL/min流速，柱溫為室溫（30℃）條件下進行檢測。結(jié)果：二甲雙胍在2.56ug·mL-1-64.00ug·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為：Y =65347X-324521（r=0.9996）， 平均回收率為100.46%，RSD為1.43%。結(jié)論：采用高效液相色譜方法，可有效評估鹽酸二甲雙胍片劑中二甲雙胍的含量，本法結(jié)果準(zhǔn)確、方法簡單、靈敏度高。

【關(guān)鍵詞】HPLC法； 二甲雙胍； 鹽酸二甲雙胍；含量

【中圖分類號】R4 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1671-8801（2016）03-0043-02

二甲雙胍是目前治療2型糖尿病的首選藥物，目前對于鹽酸二甲雙胍的含量測定方法較多，紫外及高效液相等檢測方法，都有相繼報道[1]?？紤]到紫外檢測不能有效分離制劑中有關(guān)物質(zhì)，所測結(jié)果準(zhǔn)確性不高，故考慮分析高效液相法對鹽酸二甲雙胍片劑檢測的有效性，結(jié)果報道如下：

1 材料

1.1 儀器與試藥

島津 LC-20A 型高效液相色譜儀；超聲波清洗器；乙腈由國藥集團化學(xué)試劑有限公司提供，為色譜醇；磷酸、磷酸二氫鉀均為分析純；鹽酸二甲雙胍對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：150913-151102）；鹽酸二甲雙胍膠囊（常州蘭陵制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H11021518，批號為：140923、150316、150728）。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法學(xué)驗證

2.1.1 色譜條件

色譜柱選擇Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm），，流動相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)至pH=3.5）（32∶78），檢測波長：234 nm， 進樣量10μl，1.0 mL/min流速，柱溫為室溫（30℃）。

2.1.2 溶液的制備

2.1.2.1 供試品溶液的制備

精密稱取30粒鹽酸二甲雙胍膠囊，傾出內(nèi)藥物后，混合均勻，精密稱取上述供試品0.1g置于50ml容量瓶中，加入流動相30ml稀釋，超聲5min，至澄清后，放置室溫，稀釋至對應(yīng)刻度，取適量溶液經(jīng)微孔濾膜（0.2um）過濾后，待用。

2.1.2.2 對照品溶液的制備

采用十萬分位天平稱取鹽酸二甲雙胍對照品12.80mg于100ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.3 系統(tǒng)適用性試驗

2.1.3.1 精密度試驗

在相同色譜條件下，重復(fù)進樣6次，每次10ul，分別測定峰面積，并計算6組數(shù)據(jù)所得的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果為 1.1%<2.0%，符合藥典規(guī)定，提示，本組方法精密度良好。

2.1.3.2 重復(fù)性試驗

選擇同批號鹽酸二甲雙胍膠囊6份，精密稱定后，根據(jù)供試品“2.1.2.1”項操作制備溶液，采用相同色譜條件，進樣10ul，采集6份樣品的色譜圖，計算溶液的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD = 1.2% （小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，提示本組方法具有較好的重復(fù)性。

2.1.3.3 穩(wěn)定性試驗

于0h、4h、8h、12h、24h分別取供試品與對照品溶液，采用相同色譜條件，進樣10ul，根據(jù)測得的色譜峰面積，對照品組RSD為1.1%<2.0%，供試品組RSD為1.2%<2.0%，提示對照品及供試品溶液在48h內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.1.3.4 回收率考察

取“2.1.2.1”項供試液于，保存至3個錐形瓶內(nèi)，依次加鹽酸二甲雙胍對照品2.23mg、5.17和10.31mg，根據(jù)制作“2.1.2.1”項步驟，進樣10ul，對峰面積進行測定，得到回收率分別為：100.43%、100.58%和99.96%，平均100.46%，RSD 1.43%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

2.1.4 線性關(guān)系考察

采用移液管精密移取“2.1.2.2”下對照品溶液0.20ml、0.50ml、0.80ml、1ml、2ml、5ml于10ml容量瓶中，使用流動相稀釋至刻度，澄清后，采用微孔濾膜過濾，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。結(jié)合對應(yīng)色譜條件，進樣10ul，測定樣品色譜峰面積，以峰面積和濃度為坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為：Y =65347X-324521（r=0.9996），提示，鹽酸二甲雙胍濃度在2.56ug·mL-1 ～64.00ug·mL-1范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

2.2 樣品中鹽酸二甲雙胍含量測定

在同一色譜條件下分別測定鹽酸二甲雙胍對照品溶液與3批鹽酸二甲雙胍膠囊供試品溶液（取供試品25mg），采用兩組方式（峰面積歸一化法和自身對照法）分別對供試品中鹽酸二甲雙胍含量進行測定（結(jié)果與樣品標(biāo)示量對比）。

3 結(jié)果

結(jié)果顯示，通過上述色譜條件測定鹽酸二甲雙胍膠囊中鹽酸二甲雙胍含量，與標(biāo)識量比較結(jié)果顯示，三個批次的樣本含量分別為100.51%、100.49%、100.39%，RSD<2.0%。

4.討論

鹽酸二甲雙胍（C4H12ClN5）屬雙胍類降糖藥物，本文首先通過對其進行全波段掃描，確定234nm作為其檢測波長，因此時吸收最大；前期試驗及文獻調(diào)查顯示[2]，由于本藥物屬鹽類物質(zhì)，分離過程極易出現(xiàn)拖尾或者雙頭峰，故而考慮加入緩沖鹽，使其測定過程酸堿保持平衡態(tài)，利于測量及分離，經(jīng)分析可知，在乙腈、磷酸二氫鉀溶液緩沖鹽條件下，所測色譜峰行較好，分離度高，故選擇其為流動相。本組實驗結(jié)果顯示，高效液相法測定鹽酸二甲雙胍膠囊中鹽酸二甲雙胍含量準(zhǔn)確性好、精密度高，方法重復(fù)性好，可考慮作為此類物質(zhì)的檢測方式。

參考文獻

[1] 楊青. 高效液相色譜法測定鹽酸二甲雙胍片的含量[J]. 中國藥業(yè)， 2008， 17（19）：35-35.

[2] 周平， 童卉琦， 白金，等. RP-HPLC測定鹽酸二甲雙胍腸溶片的含量[J]. 中國執(zhí)業(yè)藥師， 2014（12）.