李星艷，王世銀，許瑞霞，王新華，劉守仁，張偉，唐紅

(1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,新疆石河子　832000；2.新疆石河子工程技術(shù)學(xué)校，新疆石河子　832000；3.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉　831100)

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阿勒泰羊CFD基因的克隆及其在不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中的表達(dá)分析

李星艷1,2，王世銀3，許瑞霞1，王新華1，劉守仁1，張偉3，唐紅1

(1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,新疆石河子832000；2.新疆石河子工程技術(shù)學(xué)校，新疆石河子832000；3.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100)

摘要：【目的】獲取阿勒泰羊CFD基因序列，研究CFD基因在阿勒泰羊不同組織中的表達(dá)情況，及其在不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中表達(dá)量的變化，為深入研究CFD基因?qū)Π⒗仗┭蛭仓练e的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ)，并最終用于低脂肪綿羊品種的培育?！痉椒ā恳园⒗仗┭蛭仓琧DNA為模板，進(jìn)行CFD基因克隆及序列分析，采用RT-PCR技術(shù)研究CFD基因在阿勒泰羊不同組織中的表達(dá)情況，采用qRT-PCR技術(shù)分析CFD基因在不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中表達(dá)量的變化?！窘Y(jié)果】克隆了阿勒泰羊CFD基因，CFD基因在阿勒泰羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉、尾脂組織中均有表達(dá)，其中在尾脂組織中表達(dá)水平最高。CFD基因在阿勒泰羊正常飼喂階段尾脂組織中的表達(dá)量極顯著低于饑餓飼養(yǎng)階段尾脂組織中的表達(dá)(P<0.01)?！窘Y(jié)論】CFD基因主要是通過促進(jìn)脂肪分解而對阿勒泰羊尾脂沉積進(jìn)行調(diào)控。

關(guān)鍵詞：阿勒泰羊；CFD基因；尾脂

0前 言

【研究意義】近年來，隨著生活水平的不斷提高，以及高脂肪食物對心腦血管健康的影響，人們對低脂肪羊肉的需求量越來越大。新疆很多地方綿羊品種由于適應(yīng)性強(qiáng)、耐粗飼的優(yōu)良特點(diǎn)曾在當(dāng)?shù)仞B(yǎng)羊業(yè)中占據(jù)重要地位，但是隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的變化，這些綿羊品種由于瘦肉率較低已不能適應(yīng)市場發(fā)展的需求，所以研究綿羊脂肪沉積相關(guān)基因及其調(diào)控機(jī)制，培育低脂肪綿羊品種對當(dāng)前綿羊育種有重要意義。已有的研究結(jié)果表明，CFD(Complement Factor D)基因在動物脂肪代謝調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。研究以脂尾型綿羊品種阿勒泰羊?yàn)檠芯繉ο?，研究其在不同代謝狀態(tài)阿勒泰羊中的表達(dá)情況，為進(jìn)一步闡明其在阿勒泰羊脂肪沉積中的調(diào)控機(jī)理進(jìn)而用于培育低脂肪綿羊品種奠定基礎(chǔ)。【前人研究進(jìn)展】1985年學(xué)者Cook等在研究小鼠3T3-F442A脂肪細(xì)胞時發(fā)現(xiàn)了CFD(Complement Factor D)基因及其所編碼的28 kDa的蛋白，其基因定位于小鼠的第10號染色體43.0 cM上。CFD基因大小為1 748 bp，包含5個外顯子和4個內(nèi)含子，外顯子大小分別為74、157、148、258和230 bp，內(nèi)含子大小分別為475、90、141和175 bp。CFD基因保留了絲氨酸蛋白酶基因家族的基本外顯子結(jié)構(gòu)特征，但CFD基因中有兩個外顯子是熔接的，而這2個外顯子在其他的絲氨酸蛋白酶基因中是分離的[1,2]。CFD是一種絲氨酸蛋白激酶，是?；碳さ鞍譨cylation stimulating protein (ASP)合成所必需的。它主要由脂肪組織分泌并釋放入血。研究表明，在瘦素缺陷型小鼠模型“ob/ob”、瘦素受體缺陷型小鼠模型“db/db”以及谷氨酸鈉(monosodium glutamate, MSG)處理的糖尿病小鼠模型的脂肪組織中，CFDmRNA及蛋白質(zhì)水平均顯著減少[3]。在不同物種中CFD基因的表達(dá)似乎有組織差異，已有的研究結(jié)果表明小鼠CFD基因幾乎是脂肪組織特異性表達(dá)，而人類CFD卻主要是由單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)合成的[4-7]。目前，關(guān)于小鼠CFD基因的研究主要集中在肥胖以及血脂代謝等方面。Zhu等關(guān)于大鼠肺動脈高壓模型的研究結(jié)果顯示，CFD基因在肺組織中的表達(dá)水平顯著增強(qiáng)[8,9]，具體的機(jī)制尚不清楚；王曉蕾(2005) 等[10]發(fā)現(xiàn)，CFD基因的表達(dá)變化可能與糖尿病的發(fā)病有關(guān)，可以作為深入研究和治療糖尿病的候選基因。Lo JC等研究報道，由脂肪細(xì)胞生成的一種細(xì)胞信號蛋白CFD在刺激胰島素分泌、控制血糖中發(fā)揮了一種從前未預(yù)料到的、至關(guān)重要的作用，CFD有可能是長期以來尋找的、將脂肪組織代謝和胰腺β細(xì)胞功能聯(lián)系到一起的分子[11,12]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】CFD基因在脂肪組織生理功能和能量代謝中非常主要。通過文獻(xiàn)檢索未見相關(guān)的研究報道。阿勒泰羊是新疆一種優(yōu)良的地方綿羊品種，由于其脂肪沉積能力很強(qiáng)，可以很好地適應(yīng)北疆寒冷而漫長的冬季。所以阿勒泰羊是研究脂肪沉積的理想試驗(yàn)動物，前期研究已發(fā)現(xiàn)一些與阿勒泰羊尾脂沉積密切相關(guān)的基因[13-15]，在脂肪沉積研究方面有一定的基礎(chǔ)。研究其在綿羊中的組織表達(dá)，以及在綿羊脂肪沉積中功能?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以阿勒泰羊?yàn)檠芯繉ο?，研究CFD基因在阿勒泰羊中的組織表達(dá)情況，以及不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中表達(dá)量的變化，分析其與阿勒泰羊脂肪沉積之間的關(guān)系，為深入研究其對脂肪沉積的調(diào)控機(jī)理進(jìn)而用于低脂肪綿羊品種的培育奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

選擇6只健康狀況良好的成年阿勒泰羊，分為2組每組3只分別作為對照組和試驗(yàn)組。對照組正常飼喂，試驗(yàn)組的飼喂分為兩個階段：第一個階段采用正常飼喂的方式，4周后手術(shù)采集左臀部脂肪組織，迅速置于液氮保存?zhèn)溆?；手術(shù)結(jié)束后進(jìn)行3周的恢復(fù)飼養(yǎng)，待其恢復(fù)正常后進(jìn)入第二個飼養(yǎng)階段，此階段采用自由飲水，但逐漸降低飼喂量并最終停止飼喂。4周后屠宰，對照組也同時屠宰并采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉和尾脂，迅速置于液氮保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方 法

1.2.1引物設(shè)計

檢索NCBI數(shù)據(jù)庫，獲得牛CFD基因序列(登錄號：NM_001034255)，采用oligo6軟件分別設(shè)計克隆引物CFD-L和qRT-PCR引物CFD-Ex，選擇GAPDH(登錄號：NM_001190390)為內(nèi)參基因。引物由上海生工生物工程有限公司合成，列出引物序列。表1

表1　引物序列和PCR產(chǎn)物長度

1.2.2總RNA的提取及cDNA合成

使用TRizol Reagent (Invitrogen)分別提取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉和尾脂總RNA，采用0.7%瓊脂糖凝膠電泳檢測及ND2000超微量分光光度計(Thermo)分析，確定總RNA提取質(zhì)量并測定濃度。采用可去除基因組的反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser (TaKaRa)合成cDNA。

1.2.3CFD基因的克隆、測序及序列分析

以尾脂cDNA為模板，用克隆引物CFD-L進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性1 min，然后95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸1.5 min，40個循環(huán)后72 ℃延伸10 min。獲得阿勒泰羊CFD基因擴(kuò)增片段經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后連接T載體 (Promega)，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行菌落PCR鑒定，并選擇陽性克隆搖菌、提取質(zhì)粒送華大基因測序。測序序列拼接后與牛CFD基因序列比對，以確定擴(kuò)增序列的正確性，并采用DNAMAN軟件和UCSC數(shù)據(jù)庫在線分析克隆的綿羊CFD基因序列，采用ExPASy-ProtParam tool軟件分析其蛋白結(jié)構(gòu)。

1.2.4阿勒泰羊不同組織CFD基因表達(dá)情況檢測

以對照組阿勒泰羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉和尾脂cDNA為模板，以綿羊GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參照，采用引物CFD-Ex和GAPDH-Ex進(jìn)行半定量PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性1 min，然后95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，25個循環(huán)后72 ℃延伸5 min，擴(kuò)增產(chǎn)物使用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.5不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中CFD基因表達(dá)情況檢測

分別以試驗(yàn)組第一階段和第二階段采集的尾脂cDNA為模板，以綿羊GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參照，采用引物CFD-Ex和GAPDH-Ex對CFD基因進(jìn)行qRT-PCR分析，擴(kuò)增條件：95 ℃熱激活5 min，然后95 ℃變性 1 s，60 ℃復(fù)性/延伸 30 s，共40個循環(huán)，并繪制溶解曲線已檢測PCR反應(yīng)的特異性。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計

CFD基因在不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中的表達(dá)量通過Ct(Qr=2-△△Ct)計算，即CFD基因和GAPDH基因每個樣品分別做三個重復(fù)并取其平均數(shù)，然后計算其的Ct差值。以第一階段尾脂樣品中CFD基因表達(dá)量為對照，第二階段尾脂樣品中CFD基因表達(dá)量的Ct差值減去一階段尾脂樣品中CFD基因表達(dá)量的Ct差值即為△△Ct，然后通過2-△△Ct計算不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中CFD基因的相對表達(dá)量，并使用SPSS13.0進(jìn)行單因素方差分析進(jìn)行差異顯著檢驗(yàn)。

2結(jié)果與分析

2.1基因的克隆測序

以阿勒泰羊尾脂組織cDNA為模板，利用CFD基因特異性引物CFD-L進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得了一條與預(yù)期大小相符的片段，經(jīng)回收、測序及序列拼接后，與GenBank中登錄的綿羊CFD基因序列進(jìn)行比對，同源性高達(dá)96%，確定為綿羊CFD基因。

2.2CFD基因生物信息學(xué)

通過DNAMAN軟件和UCSC數(shù)據(jù)庫在線分析，試驗(yàn)克隆獲得的綿羊CFD基因序列的編碼區(qū)(CDS序列)大小為786 bp，包含5個外顯子，起始密碼子為ATG，終止密碼子為TGA，編碼261個氨基酸。圖1

利用ExPASy-ProtParam tool軟件分析發(fā)現(xiàn)，綿羊CFD蛋白的分子質(zhì)量為28 092.2Da，理論等電點(diǎn)(Theoretical pI)為7.15，帶負(fù)電荷的氨基酸殘基(Asp+ Glu)的總數(shù)為27個，帶正電荷的氨基酸殘基(Arg+Lys)的總數(shù)為27個，分子式為C1219H1972N366O366S15，其半衰期為30 h，脂肪系數(shù)為93.41，總平均疏水指數(shù)(GRAVY)為-0.110。利用SMART結(jié)構(gòu)域在線分析軟件對CFD的結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，CFD含有一個能夠催化三聯(lián)體His、Asp和Ser組成的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域Tryp_SPc。圖2

SignalP 4.1信號肽在線預(yù)測結(jié)果顯示，CFD蛋白的前22個氨基酸為疏水性信號肽(圖3)。磷酸化位點(diǎn)預(yù)測結(jié)果顯示，CFD蛋白含有8個絲氨酸磷酸化位點(diǎn)，5個蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)和1個酪氨酸磷酸化位點(diǎn)(圖4)。NetOGlyc 4.0、NetNGlyc 1.0軟件分析發(fā)現(xiàn)，CFD蛋白含有1個O-糖基化位點(diǎn)，無N-糖基化位點(diǎn)。圖2，圖3，圖4

注：方框中所示氨基酸為預(yù)測的組氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、絲氨酸(Ser)三個氨基酸殘基的催化三聯(lián)體位點(diǎn)

Note：The amino acids in box are catalytic sites formed by His, Asp and Ser

圖1綿羊CFD基因的CDS序列和推導(dǎo)的氨基酸序列

Fig.1CFDCDS sequence and protein sequence

圖2 CFD結(jié)構(gòu)域預(yù)測

Fig. 2 CFD Structural Domain prediction

圖3CFD信號肽預(yù)測

Fig.3 CFD Signal peptide prediction

圖4　CFD磷酸化位點(diǎn)預(yù)測

利用DNAMAN軟件分析綿羊CFD與牛、小家鼠、褐家鼠、人、東非狒狒、家貓、非洲爪蟾、斑馬魚等物種CFD的核苷酸序列及氨基酸序列的同源性，比較結(jié)果表明，綿羊CFD核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列與反芻動物牛的同源性均高達(dá)96.9%以上，與家貓、東非狒狒及人的核苷酸序列及氨基酸序列的同源性也均高達(dá)80%以上；綿羊CFD基因的核苷酸序列與非洲爪蟾和斑馬魚的同源性分別為53.72%、52.02%，氨基酸序列與非洲爪蟾和斑馬魚的同源性分別為49.42%、37.75%。表2

表2 　綿羊CFD基因的核苷酸和氨基酸序列與其他物種的同源性比較

注：綿羊(XM_004008767.1)、牛(NM_001034255.2)、小家鼠(NM_013459.3)、褐家鼠(NM_001077642.1)、人(BC057807.1)、東非狒狒( XM_003914553.2)、貓(XM_011288647.1 )、非洲爪蟾(NM_203989.1)、斑馬魚(NM_001020532.1);牛(Bostaurus)、小家鼠(Musmusculus)、褐家鼠(Rattusnorvegicus)、人(humansapiens)、東非狒狒(Papioanubis)、家貓(Feliscatus)、非洲爪蟾(Xenopus(Silurana)tropicalis)、斑馬魚(Daniorerio)

運(yùn)用Mega5.1軟件，采用N-J法建立綿羊與牛、小家鼠、褐家鼠、人、東非狒狒、家貓、非洲爪蟾、斑馬魚等其他物種的CFD系統(tǒng)進(jìn)化樹，可以看出，綿羊CFD與反芻動物牛的親緣關(guān)系最近，與斑馬魚的遺傳距離最遠(yuǎn)。圖5

圖5　不同物種CFD蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.3CFD基因的組織表達(dá)譜

半定量RT-PCR結(jié)果顯示，CFD基因在阿勒泰羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉、尾脂組織中均有表達(dá)，其中在尾脂組織中表達(dá)水平最高，其次是脾臟。圖6

圖6　 CFD基因在阿勒泰羊不同組織組織的半定量RT-PCR結(jié)果

2.4綿羊CFD基因的實(shí)時熒光定量PCR檢測

利用實(shí)時熒光定量PCR方法檢測了CFD基因在阿勒泰羊正常飼喂階段尾脂與饑餓飼養(yǎng)階段尾脂組織中的表達(dá)變化，擴(kuò)增曲線及溶解曲線顯示，CFD基因在阿勒泰羊正常飼喂階段尾脂組織中的表達(dá)量極顯著低于饑餓飼養(yǎng)階段尾脂組織中的表達(dá)(P<0.01)。圖7，圖8

圖7　 CFD基因溶解曲線圖和擴(kuò)增曲線

圖8　 CFD基因在不同營養(yǎng)狀態(tài)阿勒泰羊尾脂中的表達(dá)水平比較

3討 論

3.1CFD基因的序列

1985年學(xué)者Cook等在研究小鼠3T3-F442A脂肪細(xì)胞時首次發(fā)現(xiàn)了CFD基因及其所編碼的28 kDa的蛋白，其基因定位于小鼠的第10號染色體43.0 cM上。CFD基因大小為1 748 bp,包含5個外顯子和4個內(nèi)含子，外顯子大小分別為74、157、148、258和230 bp，內(nèi)含子大小分別為475、90、141和175 bp，CFD具有絲氨酸蛋白酶家族基因的典型特征，其外顯子1包含5＇端非翻譯區(qū)和信號肽[2]。Cook等還發(fā)現(xiàn)在3T3-F442A細(xì)胞系中，存在豐度相當(dāng)?shù)膬煞N不同的CFDmRNA，區(qū)別在于其中一個CFDmRNA的第19個外顯子中有三個核苷酸(C-A-G)的插入。研究通過RT-PCR方法成功克隆了阿勒泰羊CFD基因，該基因的編碼區(qū)(CDS序列)大小為786 bp，包含5個外顯子，起始密碼子為ATG，終止密碼子為TGA，編碼261個氨基酸，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為28 092.2Da，理論等電點(diǎn)(Theoretical pI)為7.15，含有27個帶負(fù)電荷的氨基酸殘基(Asp+ Glu)和27個帶正電荷的氨基酸殘基(Arg+Lys)。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果顯示，CFD含有一個能夠催化三聯(lián)體His、Asp和Ser組成的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域Tryp_SPc，更加證實(shí)了CFD基因?qū)儆诮z氨酸蛋白酶基因家族。

信號肽常指新合成多肽鏈中用于指導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)移(定位)的N-末端的氨基酸序列(有時不一定在N端)，是引導(dǎo)新合成的蛋白質(zhì)向分泌通路轉(zhuǎn)移的短肽鏈(長度5～30個氨基酸)。通過預(yù)測蛋白質(zhì)N端信號肽的有無，可以初步推測該蛋白是否為分泌蛋白。研究結(jié)果表明，阿勒泰羊CFD蛋白含有一個N端信號肽，說明該蛋白屬于分泌蛋白。

蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)生物學(xué)功能的關(guān)鍵步驟之一，是蛋白質(zhì)動態(tài)反應(yīng)和相互作用的一個重要分子基礎(chǔ)，同時，它也是細(xì)胞信號網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的重要靶點(diǎn)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾幾乎參與了細(xì)胞所有的正常生命活動過程，并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)糖基化參與調(diào)控蛋白質(zhì)在組織和細(xì)胞中的定位、功能、活性、壽命及多樣性[16,17]，細(xì)胞內(nèi)50%以上的蛋白質(zhì)都有糖基化修飾，它們參與了各種重要的生命活動，包括細(xì)胞識別、細(xì)胞分化、發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫應(yīng)答等。研究預(yù)測結(jié)果顯示，綿羊CFD蛋白含有1個O-糖基化位點(diǎn)，無N-糖基化位點(diǎn)，初步推測綿羊CFD蛋白的O-糖基化修飾通過影響細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，在細(xì)胞吞噬、炎性細(xì)胞遷移等過程中發(fā)揮重要作用。蛋白質(zhì)磷酸化和去磷酸化幾乎調(diào)節(jié)著生命活動的整個過程，包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育和分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動、肌肉收縮、新陳代謝、腫瘤發(fā)生等。研究發(fā)現(xiàn)，綿羊CFD蛋白含有8個絲氨酸磷酸化位點(diǎn)，5個蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)和1個酪氨酸磷酸化位點(diǎn)，初步推測這些磷酸化位點(diǎn)在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程中發(fā)揮重要的作用。

3.2CFD基因在阿勒泰羊不同組織中的表達(dá)分析

一些研究表明，CFDmRNA在小鼠脂肪組織中高豐度表達(dá)，在其他組織中檢測不到CFDmRNA的表達(dá)或表達(dá)水平很低[18,19]。王曉蕾等[20]通過競爭性RT-PCR反應(yīng)檢測CFD基因的時空表達(dá)發(fā)現(xiàn)，CFD基因在小鼠腎臟、心臟、肺臟及腦組織中存在表達(dá)，在肝臟組織中不表達(dá)。試驗(yàn)CFD基因的組織表達(dá)譜結(jié)果顯示，CFDmRNA在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉及尾脂組織中均表達(dá)，且在尾脂組織中高表達(dá)。初步推測其在脂肪細(xì)胞發(fā)育及脂代謝過程中發(fā)揮重要作用。為進(jìn)一步了解CFD基因在脂肪組織中的功能，試驗(yàn)進(jìn)行了阿勒泰羊正常飼養(yǎng)和饑餓飼養(yǎng)試驗(yàn)，并分析了CFD基因在饑餓前后阿勒泰羊尾脂組織中的表達(dá)變化，結(jié)果顯示，CFD基因在饑餓飼養(yǎng)組尾脂組織中的表達(dá)量極顯著高于正常飼養(yǎng)組(P<0.01)，初步推測CFD基因能夠促進(jìn)脂肪分解作用。研究結(jié)果與Flier等[3,21]的研究結(jié)果一致。Flier及其研究小組發(fā)現(xiàn)在許多分解代謝狀態(tài)，包括禁食、鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病以及部分胰腺切除誘導(dǎo)的糖尿病個體中，CFDmRNA表達(dá)水平有所增加(2～5倍)，具體作用機(jī)制有待更深層次的研究。

4結(jié) 論

采用RT-PCR檢測了CFD基因在阿勒泰羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉、尾脂中的組織表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其在尾脂中的表達(dá)量最高。進(jìn)而采用qRT-PCR技術(shù)檢測了CFD基因在常規(guī)飼養(yǎng)和饑餓飼養(yǎng)阿勒泰羊尾脂中表達(dá)量的變化，發(fā)現(xiàn)CFD基因在饑餓飼養(yǎng)組阿勒泰羊尾脂組織中的表達(dá)量極顯著高于正常飼養(yǎng)組(P<0.01)，初步推測CFD基因能夠促進(jìn)脂肪分解作用。

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Fund project:Supported by NSFC's joint fund Xinjiang key project (U1130302), National basic research and development plan (973) preliminary project (2011CB111501), The National Natural Science Foundation of China(31260281) and XPCC doctor funding program (2014BB014)

doi:10.6048/j.issn.1001-4330.2016.06.022

收稿日期(Received)：2016-01-04

基金項目:國家自然科學(xué)基金新疆聯(lián)合基金重點(diǎn)項目(U1130302)；國家基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973)前期專項項目(2011CB111501)；國家自然科學(xué)基金地區(qū)項目(31260281)；兵團(tuán)博士資金計劃項目(2014BB014)

作者簡介:李星艷(1978-)，女，四川人，講師，碩士，研究方向?yàn)榕R床獸醫(yī)診療技術(shù)，(E-mail)450562450@qq.com 通訊作者(Cotresponding author):張偉(1978-)，男，甘肅人，副教授，博士，研究方向?yàn)樾笄莘敝常?E-mail)zhangweigsau@163.com 唐紅(1980-)，女，黑龍江人，助理研究員，碩士，研究方向?yàn)榫d羊繁殖與體細(xì)胞克隆，(E-mail)urblockhead@163.com

中圖分類號：S811.4；S826

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-4330(2016)06-1136-09

Cloning ofCFDGene in Altay Sheep and Analysis of Expression Levels in Tail Fat of Altay Sheep in Different Nutrition States

LI Xing-yan1,2, WANG Shi-yin3, XU Rui-xia1, WANG Xing-hua1, LIU Shou-ren1,TANG Hong1, ZHANG Wei3

(1.ResearchInstituteofAnimalHusbandryandVeterinary,XinjiangAcademyofAgriculturalandReclamationScience,ShiheziXinjiang832000,China; 2.ShiheziEngineering&TechnologySchool,ShiheziXinjiang832000,China; 3.XinjiangAgriculturalProfessionalTechnologicalCollege,ChangjiXinjiang831100,China)

Abstract：【Objective】 To clone CFD gene, then investigate expression of CFD gene in different tissues of Altay sheep and expression variation in tail fat tissue in different nutrition states, and make a base for further understanding regulation functions of CFD gene in Altay sheep tail fat growth, and finally help breed sheep with relatively low fat growth ability. 【Method】RT-PCR was chosen to clone CFD gene and detect expressions of CFD gene in different tissues of Altay sheep, then research its expression variations in tail fat tissue of Altay sheep in different nutrition states using qRT-PCR.【Result】CFD gene was cloned successfully, and the result of tissue expression showed that CFD gene expressed in heart, liver, spleen, lung, kidney, muscle and tail fat, but the expression level was the highest in tail fat tissue. The expression level of CFD gene in tail fat tissue of normally fed Altay sheep was significantly lower than that of the hunger state (P<0.01). 【Conclusion】Based on the relative results that were reported before, we could speculate that CFD gene may regulate tail fat growth of Altay sheep by promoting decomposing of fat.

Key words:Altay sheep; CFD gene; tail fat