白建生（甘肅省卓尼縣畜牧工作站，甘肅 卓尼 747600）

甘南地區(qū)牦牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定

白建生
（甘肅省卓尼縣畜牧工作站，甘肅 卓尼 747600）

摘要：為了調查甘南卓尼縣牦牛隱性乳房炎的流行情況，以便為該縣牦牛隱性乳房炎的控制提供科學有效地防治措施，本試驗選取具有代表性的牦牛為試驗對象，采集乳樣，分離鑒定乳樣中的細菌，結合該縣牦牛的飼養(yǎng)管理，與目前對牦牛疾病防治的現狀，提出了牦牛隱性乳房炎的綜合性防治措施。

關鍵詞：牦牛；隱形乳房炎；分離鑒定；甘南地區(qū)

乳房炎是奶牛的乳腺受到物理、化學、微生物等刺激所發(fā)生的一種炎性變化。乳房出現紅腫熱痛的炎性反應，乳汁中的體細胞增多導致乳汁的營養(yǎng)成分下降。1978年美國乳房炎委員會（NMC）根據奶牛在乳房部位和和分泌出的乳汁中是否有無變化，將乳房炎分為隱性乳房炎和臨床型乳房炎兩種。隱性乳房炎因沒有明顯的臨床癥狀而常被忽視[1]，因此在實際生產中隱性乳房炎給畜牧業(yè)造成了很大的經濟損失。

細菌、病毒等致病微生物存在于乳汁中，當乳制品加工過程消毒不嚴時，很容易使致病微生物殘存于牛奶中，飲用后會導致人體不適，甚至發(fā)病。根據國際奶牛聯(lián)合會統(tǒng)計，奶牛隱性乳房炎發(fā)病率高達50％，而臨床型乳房炎發(fā)病率只有2％。在世界范圍內，每年因乳房炎損失乳汁估計可達380萬t。奶牛乳房炎不僅造成了重大的經濟損失，而且還嚴重危害著奶牛飼養(yǎng)業(yè)的健康發(fā)展。

1　材料與方法

1.1樣品來源

2015年5月隨機采集卓尼縣4個草場的牦牛乳樣品60份。

1.2儀器設備

生化培養(yǎng)箱，型號SPX-150B型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠生產；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號YXQ-SG46-280SA，上海佳勝試驗設備有限公司生產；潔凈工作臺，型號SPY-115D型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠生產；顯微鏡,型號Motic DMBA450型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠生產；電子天平(感量0.00019)；以上儀器均由卓尼縣畜牧局實驗室提供。

1.3試劑藥品

營養(yǎng)肉湯、普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、5％綿羊血液瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、M-H瓊脂培養(yǎng)基、生化試劑、CMT診斷試劑等。

環(huán)境消毒藥物包括惠福星和立可靈。

1.4奶牛隱性乳房炎的檢測方法與判定標準

CMT方法[2]在隱性乳房炎檢查方面具有快速、檢出率高、準確、操作簡單等優(yōu)點,判定標準參照《獸醫(yī)產科學實習指導》[3]。

表1　隱性乳房炎CMT法的判定方法

1.4.1奶牛乳樣的采集采樣前先用溫水清洗采樣乳頭，再用75％酒精棉球消毒乳頭，在每次消毒乳頭后均用消毒紙巾擦干，棄去采樣乳區(qū)的頭兩把乳汁，大約10～15 ml，然后采集乳樣約5～10 ml，擠入滅菌瓶

中，作好標記待檢病原菌，處于干奶期的牦牛僅可采1～2 ml奶樣。在每次采樣后均要乳頭消毒，以防細菌感染。采樣后將樣品迅速放入冰水中或冷藏，盡快送檢。

1.4.2細菌分離鑒定一是牦牛生活環(huán)境中細菌的分離及初步分類。樣品采集完成后，立即將放有樣品的平板送回實驗室，置于37℃的溫箱中培養(yǎng)1～2 d，然后用肉眼觀察平板上的細菌生長狀況，根據菌落形態(tài)特征、生長特性進行初步的分類。挑取典型菌落，涂片，用常用的革蘭氏染色最后鏡檢，依據細菌形態(tài)特征及革蘭氏染色的特性，將其分離細菌分為革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陰性球菌、革蘭氏陽性桿菌、革蘭氏陰性桿菌[4]。二是牦牛奶樣中細菌的分離鑒定。取適量奶樣，搖勻，每個樣品無菌采取0.05 ml，預先準備好的血液平皿、普通營養(yǎng)瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿等。然后接種細菌，置于37℃下培養(yǎng)1～2 d。觀察細菌生長情況，根據菌落形態(tài)特點，挑取較為典型的菌落進行涂片，染色，鏡檢。鑒定分離病菌的染色特性，進行肉湯接種試驗，根據細菌的生長與生化特性進一步鑒定細菌。

根據細菌培養(yǎng)特性及其鏡檢結果，可初步區(qū)別球菌與桿菌。根據細菌革蘭氏染色、溶血以及所產生的菌落顏色特性都可以對細菌特性進行鑒定。

2　乳樣中細菌的分離結果

在本次牦牛隱性乳房炎病原菌的調查中，共檢驗了60份患牛奶樣，共分離出了116株細菌，細菌檢驗結果如下表3所示，金黃色葡萄球菌和鏈球菌是乳房炎的主要病原菌，其次是大腸埃希氏菌。

表2乳樣中細菌的分離結果

參考文獻:

[1]陳北亨,王建辰.獸醫(yī)產科學(第二版)[M].北京：中國農業(yè)出版社,1990.

[2]張慶茹.奶牛隱性乳房炎研究進展[J].當代畜禽養(yǎng)殖業(yè),2003,(8):56-60.

[3]趙興緒.獸醫(yī)產科學實習指導[M].北京:中國農業(yè)出版社,2002.

[4]桂炳東,孫敬,徐建民.細菌藥物敏感性試驗測定手冊[M].南昌：江西科學技術出版社,2001.

（編輯：趙鵬飛）

中圖分類號：S857.2+6

文獻標識碼：B

文章編號：1006-799X(2016)04-0088-01

作者簡介：白建生（1976-），男，甘肅卓尼人，主要從事畜牧獸醫(yī)技術推廣工作。