梁巧蘭，韓　亮，周其宇

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室/甘肅省草業(yè)工程實驗室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州　730070)

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深綠木霉T2發(fā)酵液蛋白分離物誘導(dǎo)抗病作用研究

梁巧蘭，韓亮，周其宇

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室/甘肅省草業(yè)工程實驗室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州730070)

采用生長速率法和產(chǎn)孢量測定法，研究了不同培養(yǎng)基和溫度、pH、接菌量、培養(yǎng)基量對深綠木霉T2生長和產(chǎn)孢量的影響。結(jié)果表明，PDA培養(yǎng)基有利于深綠木霉T2的生長；深綠木霉T2發(fā)酵產(chǎn)孢最優(yōu)條件為溫度25℃、pH 7、接菌量為0.05 mL/L、培養(yǎng)基量為100 mL/250 mL，此條件下發(fā)酵72 h時產(chǎn)孢量最大，為1.5×109個/mL；76 h時產(chǎn)孢量下降；發(fā)酵液通過鹽析及凝膠層析獲得具有3個洗脫峰的蛋白質(zhì)液，分別為Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ；采用生長速率法和誘導(dǎo)活體接種法分別測定不同濃度的3個洗脫液對百合灰霉菌的抑菌率及其誘導(dǎo)抗病效果，結(jié)果表明洗脫峰Ⅰ蛋白質(zhì)的100倍液對百合灰霉菌的抑菌率最小，僅為1.16%，而其誘導(dǎo)抗病效果最好，為84.77%。

深綠木霉T2菌株；發(fā)酵條件優(yōu)化；蛋白質(zhì)分離物；誘導(dǎo)抗病作用；百合灰霉菌

木霉屬(Trichodermaspp.)真菌屬半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目的粘孢菌類，是一類普遍存在的真菌，常見于土壤中，是土壤微生物的重要組分之一，也見于植物殘體及動物糞便中，經(jīng)?？梢詮闹参锔鶉?、葉圍及種子、球莖表面分離到。目前發(fā)現(xiàn)的木霉菌有30多種，其中，有許多具有生防潛力，如哈茨木霉(T.harzianum)、綠木酶(T.virid)、康氏木霉(T.koningii)、鉤木霉(T.hamatum)和長枝木霉(T.longibrachiatum)等[1]。據(jù)資料統(tǒng)計，木霉菌至少對18 屬29 種植物病原真菌具有拮抗作用，由于其具有廣譜性、適應(yīng)性強(qiáng)等特點而被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)的各個方面。目前對木霉生防機(jī)制研究較為深入，但大多集中在微生物之間的相互作用，而忽略了寄主植物種類的選擇。近年研究發(fā)現(xiàn)，有些木霉菌株可定殖于植物根部成為植物的共生體，或通過木霉發(fā)酵液處理植物根部，不僅可以促進(jìn)植物的生長而且還可誘導(dǎo)植物的抗病性[2-6]，這是因為木霉菌能夠分泌抗生素類及酶類物質(zhì)[7]。而有關(guān)深綠木霉T2發(fā)酵液對植物誘導(dǎo)抗病作用的研究報道很少。為此，試驗從培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件兩方面對深綠木霉T2菌株發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，對優(yōu)化條件下深綠木霉T2菌株發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)進(jìn)行了分離提取，并測定了不同濃度蛋白質(zhì)對百合灰霉菌的抑制作用及誘導(dǎo)抗病效果，旨在為進(jìn)一步探討深綠木霉T2代謝產(chǎn)物對百合灰霉菌的誘導(dǎo)抗病機(jī)理，為開發(fā)深綠木霉新型生物農(nóng)藥提供理論依據(jù)。

1　材料和方法

1.1發(fā)酵培養(yǎng)基篩選

試驗材料為甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗室保存的深綠木霉T2、百合灰霉菌，種植于實驗室中的百合幼苗。

分別以玉米粉、麥麩、燕麥片、葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖為碳源，按下列組合制成不同培養(yǎng)基。接種在PDA上培養(yǎng)3 d的T2菌餅上，用十字交叉法測量菌落直徑，并用直徑5 mm的打孔器打制菌餅9枚置于10 mL滅菌水中振蕩配制孢子懸浮液，用血球計數(shù)板鏡檢產(chǎn)孢量，篩選出深綠木霉T2最佳發(fā)酵培養(yǎng)基[8]。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，酵母粉為5 g，瓊脂17 g，用自來水定容至1 000 mL；玉米粉培養(yǎng)基：玉米粉+不同碳源(葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖)+酵母粉+瓊脂，不同碳源20 g；麥麩培養(yǎng)基：麥麩+不同碳源(葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖)+酵母粉+瓊脂，不同碳源20 g；燕麥培養(yǎng)基：燕麥片+不同碳源(葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖)+酵母粉+瓊脂，不同碳源20 g；其中，后3種培養(yǎng)基其他成分同PD。

1.2不同發(fā)酵條件對深綠木霉產(chǎn)孢的影響

不同溫度對深綠木霉產(chǎn)孢的影響：向裝有100 mL滅菌PDB培養(yǎng)液(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，酵母粉5 g，自來水定容至1 000 mL)的250 mL三角瓶中接種1 mL T2孢子懸浮液(1×105個/mL)，分別置于10、20、25、30℃條件下振蕩培養(yǎng)(150 r/min)，每處理重復(fù)3次。

不同pH對產(chǎn)孢的影響：將滅菌PDB培養(yǎng)液用1 mol/L NaOH或l mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH分別為5、6、7、8、9然后分裝于滅菌的250 mL三角瓶中，每瓶接種1 mL孢子懸浮液(1×105個/mL)，于25℃條件下振蕩培養(yǎng)(150 r/min)，每次處理重復(fù)3次，于72 h后取上清液1 mL加入9 mL無菌水。

不同量培養(yǎng)基對產(chǎn)孢的影響：250 mL三角瓶中分別裝入50、100、150、180 mL滅菌的PDB培養(yǎng)液，每瓶接種1 mL孢子懸浮液(1×105個/mL)。置于最適溫度條件下振蕩培養(yǎng)(150 r/min)，每個處理重復(fù)3次。

接種量對產(chǎn)孢的影響：將滅菌的PDB培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至最適pH，將最適量培養(yǎng)基裝入250 mL三角瓶中，接種量分別設(shè)為0.05、0.50、1.00、1.50 mL孢子懸浮液(1×105個/mL)。于25℃下振蕩培養(yǎng)(150 r/min)，每個處理重復(fù)3次。

分別于72 h后取上述各處理的上清液1 mL加入9 mL無菌水，用血球計數(shù)板鏡檢產(chǎn)孢量[8]。

1.3木霉發(fā)酵液的制備及發(fā)酵液中蛋白質(zhì)分離提取

試驗在BIOF生物發(fā)酵罐中進(jìn)行，發(fā)酵規(guī)格10 L，發(fā)酵液為PDB(馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、酵母粉5 g/L)，酵母粉在發(fā)酵液中起生長因子的作用[9]。接菌液為深綠木霉T2孢子懸浮液1 mL接種于裝有100 mL培養(yǎng)液的250 mL三角瓶中，置于25℃搖床(150 r/min)，培養(yǎng)2 d，即為種子液。發(fā)酵條件按篩選的最佳條件設(shè)置，發(fā)酵開始后，每4 h取樣1次，用血球計數(shù)板鏡檢產(chǎn)孢量，確定產(chǎn)孢量最大的時間及放罐時間；當(dāng)產(chǎn)孢量達(dá)到最大時停止發(fā)酵，待發(fā)酵罐冷卻后放罐，發(fā)酵液在4℃下5 000 r/min 離心10 min，取上清液，濾紙過濾，將一些懸浮的孢子和其他的雜質(zhì)去除[10]；4℃條件下采用硫酸銨鹽析，硫酸銨過飽和后靜置20 min，在4℃下5 000 rpm離心30 min。棄去上清液，以小量PBS溶解沉淀，裝于透析袋中，以三蒸水作為透析緩沖液，4℃下透析除去殘留的硫酸銨，每30 min更換1次透析液，采用納氏試劑檢驗是否有NH4+殘留，直至除去全部NH4+，獲得深綠木霉T2發(fā)酵液粗蛋白，備用。

以Tris-HCl緩沖液120 mL(pH 8.0，Tris-HCl 0.02 mol/L，NaCl 0.09 mol/L) 溶脹約3.7 g Sephadex G-100凝膠，裝入層析柱(40×1 cm ) ，連接Tris-HCl洗脫緩沖液層析柱與收集裝置，以0.2 mg/mL VB12為標(biāo)準(zhǔn)作檢測層析，如果VB12的黃色條帶水平整齊的下行，則可使用此層析柱;否則應(yīng)傾出凝膠再次裝填層析柱，直到檢測層析結(jié)果符合上述要求[11]。

取3 g深綠木霉T2發(fā)酵液粗蛋白，溶于2 mL洗脫緩沖液中，上樣前在4℃條件下，3 000 r/min離心5 min，除去干擾層析的不溶物，以1 mL蛋白溶液上樣，流速6滴/min，2 mL/管，收集蛋白溶液并用紫外分光光度計測定D595nm值(每管取50 μL樣品，加入考馬斯亮藍(lán)G-250 200 μL，混勻，5 min內(nèi)測定D595nm)，并繪制洗脫曲線，對D595nm相近的樣品進(jìn)行合并，獲得深綠木霉T2發(fā)酵液蛋白質(zhì)分離物，分別用于對百合灰霉菌抑菌作用和誘導(dǎo)百合抗灰霉菌作用效果測定。

1.4分離蛋白質(zhì)對百合誘導(dǎo)抗病作用

1.4.1不同濃度分離蛋白質(zhì)對百合灰霉菌抑制作用測定分別量取PDA培養(yǎng)基45、49.5、49.9、49.95 mL置于三角瓶中，經(jīng)滅菌后冷卻到45℃，在無菌條件下分別加入分離蛋白質(zhì)5、0.5、0.1、0.05 mL，混合均勻，制成PDA平板，使分離蛋白質(zhì)的終濃度分別為10、100、500、1 000倍液，然后，將培養(yǎng)4 d的百合灰霉菌菌餅(Ф=0.5 cm)接種于PDA平板上，放置于25℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d后，用十字交叉法測量灰霉菌落直徑大小，按公式計算分離蛋白質(zhì)對灰霉菌的抑菌率[12]。

1.4.2分離蛋白質(zhì)對百合灰霉病誘導(dǎo)抗病作用測定

用不同分離相的蛋白質(zhì)(10、100、500、1 000倍液)，噴霧處理健康的百合幼苗，48 h后用1×106個/mL的灰霉菌孢子懸浮液進(jìn)行噴霧接種，以噴滅菌水為對照，每處理10株，重復(fù)3次，15 d后根據(jù)以下分級標(biāo)準(zhǔn)，觀察記錄發(fā)病情況，并用公式計算病情指數(shù)及誘導(dǎo)抗病效果[12-13]。

病害分級標(biāo)準(zhǔn)：0 級—葉片無病斑；1 級—病斑面積占整個葉面積1%以下；2 級—病斑面積占整個葉面積的2%～5%；3 級—病斑面積占整個葉面積6%～20%；4 級—病斑面積占整個葉面積的21%～40%；5級—病斑面積占整個葉面積的40%以上。

誘導(dǎo)抗病效果(%)=

1.5數(shù)據(jù)分析

采用DPS 3.0軟件對所測數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，用平均

值表示測定結(jié)果，采用Excel 2010制表。

2　結(jié)果與分析

2.1培養(yǎng)基篩選

通過培養(yǎng)基篩選試驗，發(fā)現(xiàn)以葡萄糖為糖源時深綠木霉T2在馬鈴薯、玉米粉、麥麩、燕麥4種培養(yǎng)基上生長速度明顯快于以果糖、蔗糖、麥芽糖作為糖源的4種培養(yǎng)基，且菌落直徑之間存在顯著差異；在同一糖源不同培養(yǎng)基上以馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基、玉米果糖培養(yǎng)基、麥麩果糖培養(yǎng)基、馬鈴薯麥芽糖培養(yǎng)基、燕麥麥芽糖培養(yǎng)基更有利于T2的生長較好，方差分析表明，96 h時以上培養(yǎng)基培養(yǎng)的T2菌落直徑與其他培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落直徑之間存在顯著差異；以馬鈴薯、果糖為糖源時馬鈴薯培養(yǎng)基和其他3種培養(yǎng)基的產(chǎn)孢量之間存在顯著差異，且高于其他糖源不同培養(yǎng)基的產(chǎn)孢量(表1)。

表1　不同培養(yǎng)基下深綠木霉T2的生長及產(chǎn)孢量

注：小、大寫字母分別表示0.05水平上同一培養(yǎng)基不同糖源、不同培養(yǎng)基同一糖源菌落直徑及產(chǎn)孢量的差異顯著性

2.2不同條件對深綠木霉T2產(chǎn)孢的影響

2.2.1溫度對深綠木霉T2產(chǎn)孢量的影響溫度對深綠木霉T2產(chǎn)孢量有一定影響，其中，25℃條件下產(chǎn)孢量最大，為5.75×109個/mL，30℃條件下產(chǎn)孢量最低，為3.54×109個/mL，而15，20℃條件下的產(chǎn)孢量介于二者之間(圖1)。

圖1　不同溫度下T2的產(chǎn)孢量Fig.1　 Effects of different temperatures on T2 sporulation

2.2.2pH對深綠木霉T2產(chǎn)孢量的影響pH為7時有利于深綠木霉T2孢子的產(chǎn)生，產(chǎn)孢量最大，為5.97×109個/mL，pH為8時產(chǎn)孢量次之，為4.94×109個/mL，而pH為9時的產(chǎn)孢量最低，為2.89×109個/mL，pH為5、6時的產(chǎn)孢量均大于4.0×109個/mL(圖2)。

圖2　pH值下T2的產(chǎn)孢量Fig.2　 Effects of pH values on T2 sporulation

2.2.3不同量培養(yǎng)基對產(chǎn)孢量影響在250 mL三角瓶中隨著培養(yǎng)基量的增多，深綠木霉T2產(chǎn)孢量逐漸增加，當(dāng)培養(yǎng)基量為100 mL/250 mL時，產(chǎn)孢量最大，為6.34×109個/mL；但是，當(dāng)培養(yǎng)基量增加到180 mL/250 mL時，產(chǎn)孢量下降為3.06×109個/mL(圖3)。

2.2.4接種量對產(chǎn)孢的影響隨著接種量的增大，產(chǎn)孢量逐漸降低，當(dāng)接種量為T2孢子懸浮液0.05 mL(1×105個/mL)時，產(chǎn)孢量最大，為5.00×109個/mL，接種量為1.50 mL時產(chǎn)孢量最小，為3.54×109個/mL(圖4)。

圖3　不同量培養(yǎng)基下T2的產(chǎn)孢量Fig.3　Effects of different content medium on T2 sporulation

圖4　不同接菌量下T2的產(chǎn)孢量Fig.4　Effects of fifferent inoculation on T2 sporulation

2.3木霉發(fā)酵液的制備及蛋白質(zhì)的分離提取

發(fā)酵條件根據(jù)2.2中篩選的參數(shù)設(shè)置，在BIOF生物發(fā)酵罐中發(fā)酵，每4 h取樣檢測發(fā)現(xiàn)，72 h時產(chǎn)孢量最大，為1.5×109個/mL，76 h產(chǎn)孢量逐漸下降(圖5)。

通過對深綠木霉發(fā)酵液中蛋白質(zhì)的分離提取，獲得的蛋白質(zhì)在波長為595 nm時，D值出現(xiàn)了3個吸收峰(圖6)，將D值接近的蛋白質(zhì)合并，獲得了3組蛋白質(zhì)。

2.4分離蛋白質(zhì)對百合誘導(dǎo)抗病作用

通過3組分離蛋白質(zhì)對百合灰霉菌抑菌率測定，結(jié)果表明第1組蛋白質(zhì)10倍液的抑菌率最大，為32.93%， 100倍液抑制率較低，僅為1.16%，而500和1 000倍液均沒有抑制作用(表2)；誘導(dǎo)抗病作用測定，發(fā)現(xiàn)分離蛋白質(zhì)100倍液對百合抗灰霉病的誘導(dǎo)效果最好，為84.77%，且與其他處理的誘導(dǎo)抗病效果之間存在極顯著差異(表3)。

圖5　深綠木霉T2發(fā)酵不同時間產(chǎn)孢量Fig.5　Sporulation of Trichoderma atroviride T2 in the fermentation process difference times

圖6　從深綠木霉T2發(fā)酵液中分離提取的蛋白質(zhì)洗脫曲線Fig.6　Elution profile of protein from Trichoderma atroviride T2 fermentation liquid deparation

3　討論

發(fā)酵條件優(yōu)化試驗發(fā)現(xiàn)，深綠木霉T2最佳培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖酵母粉培養(yǎng)液，最適培養(yǎng)條件為溫度25℃、pH為7、接菌量為0.05 mL/150 mL培養(yǎng)基、培養(yǎng)基量為100 mL/250 mL(培養(yǎng)基/三角瓶容積)；利用該優(yōu)化條件對深綠木霉T2發(fā)酵培養(yǎng)后，從發(fā)酵液中分離獲得了3組吸收峰不同的蛋白質(zhì)，測定了不同濃度分離蛋白質(zhì)對百合灰霉菌的抑菌率及其誘導(dǎo)抗病效果，結(jié)果表明洗脫峰Ⅰ蛋白質(zhì)100倍液對百合灰霉菌的抑菌率最小，僅為1.16%，而其誘導(dǎo)抗病效果最好，為84.77%。

表2　分離蛋白質(zhì)對百合灰霉菌抑菌率(4 d)和誘導(dǎo)抗病效果(15 d)

注：不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)

研究認(rèn)為木霉菌生長最好的碳源為葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、木糖、海藻糖和纖維二糖[14]；蛋白胨即可作為碳源又可作為氮源；在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中應(yīng)用糖蜜-酵母粉培養(yǎng)基模擬工業(yè)化生產(chǎn)條件研究木霉在20 L發(fā)酵罐中的生長情況,發(fā)現(xiàn)采用這種培養(yǎng)基可以獲得比較理想的結(jié)果,孢子含量可達(dá)109個/g干重[15]。以棉籽粉或玉米漿代替啤酒酵母也可以產(chǎn)生理想的效果；Jackson[16]研究發(fā)現(xiàn)，在葡萄糖-丙氨酸基礎(chǔ)培養(yǎng)基上產(chǎn)生的菌絲干重比在糖蜜-酵母培養(yǎng)基上產(chǎn)生的高。Lew is[17]研究發(fā)現(xiàn)，糖蜜-玉米漿培養(yǎng)基在支持木霉的生長與產(chǎn)孢方面優(yōu)于蔗糖-硝酸培養(yǎng)基和葡萄糖-酒石酸培養(yǎng)基。國內(nèi)有研究者應(yīng)用蟲草頭孢廢液,添加幾種中草藥(青蒿、黃芩、貫眾和板蘭根)作為培養(yǎng)基,接種哈茨木霉(T.harzianum)的分生孢子進(jìn)行培養(yǎng)，可獲得1.67×108個孢子/皿[18-22]；另外礦質(zhì)元素、維生素、溫度、pH、光照等對木霉菌的生長也有一定的影響；而此次試驗僅以玉米粉、麥麩、燕麥片、葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖為碳源，以酵母粉為氮源，對深綠木霉T2在16種組合培養(yǎng)基上的生長情況進(jìn)行了測定，并以篩選出的生長速度快產(chǎn)孢量最大的馬鈴薯+葡萄糖+酵母粉培養(yǎng)基作為液體發(fā)酵培養(yǎng)基，從溫度、pH、接菌量、培養(yǎng)基量4個方面對T2發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，對其他方面還有待于進(jìn)一步探討。

植物誘導(dǎo)抗病性被認(rèn)為是植物保護(hù)技術(shù)的新途徑[13]。真菌蛋白激發(fā)子對植物的誘導(dǎo)抗性研究是近年來國際上植物病理學(xué)研究的熱點之一[23-24]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，木霉菌除了直接或間接地抑制病原菌外，還能夠促進(jìn)種子萌發(fā)[25]、誘導(dǎo)作物產(chǎn)生系統(tǒng)抗病性，綠木霉、棘胞木霉、深綠木霉、哈茨木霉等均可誘導(dǎo)植物獲得對廣譜性致病真菌、細(xì)菌、病毒等微生物的局部或系統(tǒng)抗性。但是，有關(guān)從木霉菌中分離純化激發(fā)子及其對食用百合的誘導(dǎo)抗病作用研究國內(nèi)尚屬空白，國外僅有從綠木霉中得到的多肽或蛋白質(zhì)激發(fā)子如Sm1、類抗菌肽和哈慈木霉T22分泌的與番茄葉霉菌Avr4和Avr9同源的蛋白質(zhì)激發(fā)子等幾例報道[26-30]。其誘導(dǎo)抗病機(jī)理之一就是木霉產(chǎn)生了能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性的激發(fā)子，如有酶活性或其他功能的蛋白質(zhì)、類抗菌肽、Avr同源體、低聚糖或低分子量化合物。許多木霉能產(chǎn)生木聚糖酶誘導(dǎo)植物乙烯的合成，從而激發(fā)植物的防御反應(yīng)[26]。哈慈木霉分離物Th8，Th1和TH10處理紅辣椒后葡聚糖酶活性增強(qiáng)[27]；木霉產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶(如幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶、蛋白酶等)能夠降解病原真菌細(xì)胞壁，并釋放出低分子量化合物，誘導(dǎo)植物防御相關(guān)酶的合成[28]；而有關(guān)來源于深綠木霉T2發(fā)酵液的、能夠誘導(dǎo)百合抗灰霉病的蛋白質(zhì)分離物究竟為何種物質(zhì)的問題還需要進(jìn)一步研究。

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Study on induced resistant of protein isolate from fermentation broth ofTrichodermaatrovirideT2

LIANG Qiao-lan,HAN Liang,ZHOU Qi-yu

(CollegeofPrataculturalScience,GansuAgriculturalUniversity/KeyLaboratoryofGrasslandEcosystem，MinistryofEducation/PrataculturalEngineeringLaboratoryofGansuProvince/Sino-U.S.CentersforGrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou730070,China)

The effects of medium,temperature,pH value,inoculation amount on the growth and sporulation ofTrichodermaatrovirideT2 were studied and the result indicated that PDA medium performed better and its sporulation optimum fermentation conditions were 25℃,pH 7,inoculation amount of 0.5 mL/L,medium content of 100 mL/250 mL,sporulation reached the maximum at 72 h under these conditions,it was 1.5×109/mL sporulation began to decline at 76 h by growth rate method and spore production measurement method.Three proteins eluted peaks from fermentation brothTrichodermaatrovirideT2 were obtained by (NH4)2SO4precipitation and gel filtration chromatography,they were Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ,respectively and their inhibition rates and induced resistance effects on their different concentrations to lilyBotrytiscinereawere measured by growth rate method and the induced in vivo inoculation method.The inhibition rate of protein elution peak Ⅰ 100 times was the minimum (1.16%),while its induced resistance was the best (84.77%).

TrichodermaatrovirideT2 strains;fermentation conditions optimization;protein isolates;induced resistance;lilyBotrytiscinerea

2016-02-27；

2016-05-18

甘肅省財政廳項目“深綠木霉T2蛋白激發(fā)子TraT2A分離純化及誘導(dǎo)抗病作用機(jī)理研究”(甘財教2013(116))資助

梁巧蘭(1968-)，女，甘肅省平?jīng)鍪谐缧趴h人，博士，副教授，主要研究方向為作物保護(hù)和生物防治。

E-mail：liangql@gsau.edu.cn

S 763.1

A

1009-5500(2016)03-0028-07