孫玉霜，李　穎，李秀梅，梁智選，郭立力，朱亞寧，石　瑜,關(guān)建軍

(1.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402 ；2.天津市靜?？h動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 301600)

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天津地區(qū)豬口蹄疫免疫抗體水平監(jiān)測(cè)及分析

孫玉霜1，李穎1，李秀梅1，梁智選1，郭立力1，朱亞寧1，石瑜1,關(guān)建軍2

(1.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402 ；2.天津市靜?？h動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 301600)

摘要：為摸清天津地區(qū)豬口蹄疫免疫抗體水平，2014年1月至12月，共采集天津市10個(gè)區(qū)縣種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)的豬血清樣品7 639份，采用液相阻斷ELISA方法，對(duì)免疫抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果抗體水平合格的6 491份，合格率84.97%。種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)合格率分別為93.37%、84.89%、82.68%，全年中5月份免疫抗體合格率最高89.91%，經(jīng)產(chǎn)母豬、育肥豬、仔豬、保育豬的免疫抗體合格率分別為95.58%、88.13%、80.16%、75.38%。

關(guān)鍵詞：口蹄疫；抗體水平；監(jiān)測(cè)；分析

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)傳播迅速、發(fā)病率高，可引起幼畜死亡，成年畜生產(chǎn)性能下降，并且嚴(yán)重影響動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品流通貿(mào)易等[1-2]。強(qiáng)制免疫是我國(guó)防控口蹄疫等重大動(dòng)物疫病防控的主要手段，免疫效果好壞直接關(guān)系到口蹄疫防控效果。開(kāi)展免疫動(dòng)物的抗體水平監(jiān)測(cè)，能及時(shí)了解疫苗的免疫效果,有效地進(jìn)行科學(xué)防控和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作[3]。本研究采用O型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)2014年隨機(jī)從天津市不同地區(qū)的種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)定期采集的7 639份豬血清樣品進(jìn)行免疫抗體水平監(jiān)測(cè)，以了解不同地區(qū)豬群的口蹄疫免疫狀況，評(píng)估免疫效果，為制定口蹄疫綜合防控措施提供依據(jù)[4-5]。

1　材料與方法

1.1材料

按比例隨機(jī)采集天津市10個(gè)區(qū)縣的種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)免疫28 d以上臨床健康豬的血清樣品7 639份(表1)。按常規(guī)方法分離血清后置-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方法

1.2.1檢測(cè)試劑口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，分批購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào):2013021001、2013051501、2013062701、2013102001，在有效期內(nèi)使用。

1.2.2檢測(cè)方法按照口蹄疫O型液相阻斷ELISA試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作[6]。

1.2.3判定標(biāo)準(zhǔn)每塊板設(shè)病毒抗原對(duì)照，陰性血清和陽(yáng)性血清對(duì)照。病毒抗原對(duì)照至少2個(gè)孔的OD 492 nm值在1.5±0.5范圍內(nèi)；陽(yáng)性血清對(duì)照抗體效價(jià)應(yīng)是1∶1 024±1滴度以?xún)?nèi)；陰性血清對(duì)照抗體滴度應(yīng)小于1∶8。

臨界值計(jì)算方法：抗原對(duì)照為4孔，棄去最高和最低兩孔，計(jì)算剩余2孔的OD 492 nm值之和再除以2，即50%對(duì)照值稱(chēng)為臨界值。陰性孔即被檢血清稀釋孔OD 492 nm值大于臨界值的孔，小于或等于臨界值的孔為陽(yáng)性孔。被檢血清的抗體滴度即陽(yáng)性孔的OD 492 nm值等于臨界值時(shí)所對(duì)應(yīng)的稀釋度。豬抗體效價(jià)大于等于6log2(1∶64)判為免疫抗體合格，免疫抗體合格率按農(nóng)業(yè)部文件規(guī)定判定。

2　結(jié)果

全年抽檢血清樣品7 639份，免疫抗體水平合格的6 491份，合格率84.97%；其中種豬場(chǎng)樣品664份，免疫抗體水平合格的620份，合格率93.37%；規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)樣品4 718份，免疫抗體水平合格的4 005份，合格率84.89%；散養(yǎng)戶(hù)樣品2 257份，免疫抗體水平合格的1 866份，合格率82.68%。

2.1各地區(qū)免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

全市10個(gè)區(qū)縣共抽樣7 639份血清樣品，除津南區(qū)因無(wú)種豬場(chǎng)未抽樣外，其他區(qū)縣種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)均進(jìn)行抽樣(表1)，總體上種豬場(chǎng)樣品合格率最高，為93.37%，其次是規(guī)模場(chǎng)的，為84.49%，散養(yǎng)戶(hù)的最低，為82.68%。各區(qū)縣中國(guó)樣品總合格率最高的是北辰區(qū)，合格率90.52%；種豬場(chǎng)樣品合格率最高的是東麗區(qū)和北辰區(qū)，都達(dá)到100%，規(guī)模場(chǎng)樣品合格率最高的是武清區(qū)，合格率91.05%，散養(yǎng)戶(hù)樣品合格率最高的是北辰區(qū)，合格率89.66%。

2.2不同月份免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

共抽樣7 639份樣品，按月份匯總，樣品合格率最高的月份是5月，其次為11月，樣品合格率均達(dá)到89%以上，最低的月份是10月，樣品合格率僅71.43%(表2)，上半年抗體合格率整體水平比較穩(wěn)定且高于下半年，7月份的樣品合格率整體呈下降趨勢(shì)。種豬場(chǎng)全年免疫抗體水平相對(duì)穩(wěn)定，均保持在85%以上，規(guī)模場(chǎng)5月、6月和11月樣品合格率較高，均達(dá)89%以上，散養(yǎng)戶(hù)樣品的抗體水平經(jīng)歷7月份最低之后呈上升趨勢(shì)，到11月份達(dá)到全年的最高水平93.67%。

2.3不同日齡豬免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

按豬只日齡進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，抗體水平合格率依次為經(jīng)產(chǎn)母豬>育肥豬>仔豬>保育豬(表3)。保育豬的合格率最低，僅75.38%，育肥豬、經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平合格率明顯高于仔豬、保育豬的，保育豬與經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平合格率相差較大，達(dá)20.2%。

表1　各區(qū)(縣)豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表2　豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)全年結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表3　不同日齡豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3　討論

免疫抗體監(jiān)測(cè)是反映動(dòng)物免疫狀況的一項(xiàng)指標(biāo)，強(qiáng)化群體免疫抗體監(jiān)測(cè)工作，及時(shí)發(fā)現(xiàn)免疫力低下動(dòng)物，進(jìn)行補(bǔ)免，能有效提高群體抗感染能力[7-8]。從檢測(cè)結(jié)果看,在檢測(cè)的7 639份樣品中,口蹄疫抗體效價(jià)達(dá)到1∶64以上的陽(yáng)性樣品數(shù)量6 491份,陽(yáng)性合格率為84.97%，低于孫彬彬等[8]監(jiān)測(cè)的閻良區(qū)2013年和2014免口蹄疫免疫抗體合格率88.5%和88.3%，考慮地區(qū)差異以及監(jiān)測(cè)數(shù)量和監(jiān)測(cè)場(chǎng)規(guī)模不同是造成差異的主要原因。該結(jié)果表明天津市口蹄疫疫苗有較為理想的免疫效果,抗體水平能夠達(dá)到有效保護(hù),達(dá)到了農(nóng)業(yè)部要求的免疫抗體合格率70%以上的要求,抗體保護(hù)力能抵御病毒的攻擊[9]?？谔阋叩姆乐涡Ч硐?能有效抵制大規(guī)模O型口蹄疫疫情的暴發(fā)。

3.1從不同類(lèi)型養(yǎng)殖場(chǎng)分析抗體檢測(cè)水平

種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)的合格率分別是93.37%、84.89%、82.68%，種豬場(chǎng)的免疫抗體合格率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于散養(yǎng)戶(hù)的檢測(cè)結(jié)果。天津市共有種豬場(chǎng)20家分布于9個(gè)區(qū)縣，飼養(yǎng)條件較好，防疫意識(shí)較強(qiáng)，每個(gè)種豬場(chǎng)都配備了職業(yè)技術(shù)水平較高的專(zhuān)業(yè)獸醫(yī)人員，一般都制定自身豬場(chǎng)的免疫程序，除春秋防之外，都會(huì)定期進(jìn)行抽樣檢測(cè)，能做到及時(shí)補(bǔ)免，因此種豬場(chǎng)的整個(gè)豬群各階段抗體水平都較高。

而抗體合格率最低的散養(yǎng)戶(hù)也是防控工作中的重點(diǎn)和難點(diǎn)，原因在于散養(yǎng)戶(hù)防病意識(shí)相對(duì)淡薄，多停留在發(fā)病治病、無(wú)病不防的階段，另外飼養(yǎng)條件和管理水平超差，除接受村級(jí)動(dòng)物防疫人員春秋季集中免疫和固定免疫日補(bǔ)免外，基本無(wú)制定免疫程序概念，所以散養(yǎng)戶(hù)整體免疫抗體水平偏低，處于抗口蹄疫發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)薄弱環(huán)節(jié)，病原入侵威脅較大。從規(guī)模場(chǎng)的免疫抗體合格率分析，低于種豬場(chǎng)而高于散養(yǎng)戶(hù)，正體現(xiàn)出其疫病綜合防控能力和養(yǎng)殖環(huán)境也處于種豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)之間。目前天津市生豬養(yǎng)殖以規(guī)模場(chǎng)為主，本次監(jiān)測(cè)抗體合格率而規(guī)模場(chǎng)免疫合格率與梁晟[10]等研究廣西部分地區(qū)規(guī)模場(chǎng)免疫抗體合格率89.02%相比仍存在差異，表明天津市規(guī)模場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，提升綜合防控水平，以應(yīng)對(duì)集中飼養(yǎng)密度增加給疫病防控帶來(lái)的挑戰(zhàn)。

3.2從不同區(qū)域分析口蹄疫抗體檢測(cè)水平

薊縣、武清區(qū)、寶坻區(qū)、寧河縣、靜?？h5個(gè)區(qū)縣平均水平低于東麗區(qū)、西青區(qū)、津南區(qū)、北辰區(qū)和濱海新區(qū)5個(gè)區(qū)平均水平。薊縣、寶坻區(qū)、武清區(qū)、寧河縣、靜海縣屬于養(yǎng)殖大縣，生豬存欄數(shù)量與另外5個(gè)區(qū)相比數(shù)量較大,但經(jīng)濟(jì)狀況相對(duì)薄弱，特別是免疫抗體合格率最低的薊縣。由于處于半山區(qū)自然環(huán)境中，散養(yǎng)戶(hù)相對(duì)較多，且各鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站人員配備不足，特別是春秋防集中免疫期間，造成補(bǔ)免不及時(shí)現(xiàn)象存在，該現(xiàn)象與黃學(xué)寶等[11]研究不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫條件、防疫人員服務(wù)地域面積、防疫人員受教育程度等影響免疫效果的觀(guān)點(diǎn)一致。而東麗區(qū)、西青區(qū)、津南區(qū)、北辰區(qū)、濱海新區(qū)5個(gè)近郊區(qū)縣養(yǎng)殖量較小，養(yǎng)殖規(guī)模比較集中，經(jīng)濟(jì)相對(duì)發(fā)達(dá)，基層防疫人員配備充足，基層防疫條件較好，因此防疫任務(wù)相對(duì)較小。所以東麗等5個(gè)近郊區(qū)縣從養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)防控水平、政府支持力度等養(yǎng)殖大環(huán)境都顯著優(yōu)于薊縣等5個(gè)養(yǎng)殖較大區(qū)縣，同是造成免疫抗體合格率差距的重要原因之一。

3.3從不同月份分析口蹄疫抗體檢測(cè)水平

種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)均呈現(xiàn)不同月份抗體的合格率相差較大現(xiàn)象?？傮w來(lái)看5月和11月的合格率較高，分別達(dá)到89.91%和89.48%，而上半年最低為3月，下半年最低是7月，全年抗體水平中最高月份與最低月份相差15.16%，與楊本勇[12]研究不同月份抗體合格率差異較大結(jié)果一致。究其原因主要在于免疫所處階段不同抗體水平不同。天津地區(qū)春秋季集中免疫分別于3月15日和9月初開(kāi)始，1個(gè)月左右結(jié)束。因此5月和11月處于春秋兩季集中免疫后抗體應(yīng)答水平較高階段，而3月和7月處于春秋防集中免疫前1個(gè)月且距上次免疫抗體處于下降階段，因此出現(xiàn)不同月份抗體水平顯著上升或下降的現(xiàn)象。

3.4從不同日齡豬分析免疫抗體檢測(cè)水平

經(jīng)產(chǎn)母豬抗體合格率最高達(dá)95.58%，其后依次是育肥豬、仔豬、保育豬。經(jīng)產(chǎn)母豬由于常年免疫,總體保持較高的抗體水平,育肥豬階段抗體水平高于保育豬階段主要在于免疫次數(shù)差別，經(jīng)過(guò)二次免疫階段會(huì)好于首免后抗體水平。而仔豬處于15日齡～25日齡期間采血抗體水平主要源于母源抗體作用，而保育豬雖進(jìn)行了首免可正處于抗病能力較為薄弱的飼養(yǎng)階段因此抗體水平較低。檢測(cè)結(jié)果與謝翠松等[13]研究二免免疫應(yīng)答水平優(yōu)于首免免疫效果結(jié)果相符。

口蹄疫防控工作是關(guān)系國(guó)家聲譽(yù)和畜牧業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的大事，需要各級(jí)政府部門(mén)、養(yǎng)殖單位和畜主共同努力以確保口蹄疫疫情穩(wěn)定。今后要在做好當(dāng)前預(yù)防為主的防控措施基礎(chǔ)上，著力破解制約動(dòng)物疫病防控的關(guān)鍵性因素仍存在需完善和解決的問(wèn)題，如高效安全口蹄疫疫苗的研制，免疫接種方式方法的改進(jìn)，快速準(zhǔn)確診斷方法的建立等，為實(shí)現(xiàn)全國(guó)口蹄疫凈化乃至消滅目標(biāo)奠定基礎(chǔ)[14-15]。

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收稿日期：2015-12-23

基金項(xiàng)目：天津市農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化與推廣項(xiàng)目(201304040)

作者簡(jiǎn)介：孫玉霜(1982-)，女，天津?qū)氎嫒?，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防與動(dòng)物防疫體系建設(shè)工作。

中圖分類(lèi)號(hào):S852.659.6；S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

文章編號(hào):1007-5038(2016)07-0127-04

Monitoring and Analysis of Immune Antibody Level for Swine FMD in Tianjin City

SUN Yu-shuang1，LI Ying1,LI Xiu-mei1,LIANG Zhi-xuan1，GUO Li-li1,ZHU Ya-ning1,SHI Yu1，GUAN Jian-jun2

(1.TianjinCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Tianjin300402,China;2.JinghaiCountyCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Tianjin,301600,China)

Abstract:In order to understand the antibody level of FMDV in Tianjin city,7 639 serum samples were collected from January to December in 2014.The results showed that 6 491 samples(84.97%) were antibod qualified by using Liquid Blocking ELISA Kit of FMDV.The antibody qualified rate from breeding farms,scale farms to scatter-feed farms were 93.37%,84.89% and 82.68%,respectively.The highest antibody level of 89.91% was detected in May.The antibody qualified rate of sows,fattening pigs,piglets and nursing pigs were 95.58%,88.13%,80.16% and 75.38%,respectively.

Key words:Foot-and-mouth disease; antibody; monitoring; analysis