張　穎，岳姝岐，李瑞芳，孫　暉

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 中藥血清藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040）

刺五加莖總木脂素含量測(cè)定*

張穎，岳姝岐，李瑞芳，孫暉

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 中藥血清藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040）

目的：建立紫外分光光度法測(cè)定刺五加莖中總木脂素含量的方法。方法：采用紫外分光光度法以刺五加苷E為對(duì)照品，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定。結(jié)果：刺五加苷E顯色后在560nm處有最大吸收，在6.93～23.1μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9995），平均回收率為99.28%（n=6）。結(jié)論：本方法可以快速準(zhǔn)確的測(cè)定刺五加莖中總木脂素的含量。

刺五加；木脂素；含量測(cè)定

刺五加為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus（Rupr.et Maxim.）Harms的干燥根、根莖或莖，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨的功效［1］。實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)刺五加莖化學(xué)成分進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：含有大量的木脂素類化合物，并發(fā)現(xiàn)口服后在體內(nèi)直接作用物質(zhì)主要是其木脂素類成分的代謝物，提示總木脂素類成分是表達(dá)刺五加莖臨床療效的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［2］。刺五加莖中的木脂素類成分具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒抗菌、抗骨質(zhì)疏松、降血糖、神經(jīng)保護(hù)、心血管保護(hù)、雌激素樣作用［3-10］。而在以往的文獻(xiàn)報(bào)道中，僅僅是單獨(dú)測(cè)定刺五加中刺五加苷E的含量。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇紫外分光光度法測(cè)定刺五加莖中總木脂素含量。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試藥

UVmini-1240紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；分析天平PB1501-N型（瑞士梅特勒）；

刺五加莖采于黑龍江，經(jīng)王喜軍教授鑒定為正品；刺五加苷E對(duì)照品（四川省維克奇生物科技有限公司）；變色酸（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；其他所用試劑均為分析純。

1.2試劑溶液的制備

1.2.1對(duì)照品溶液的配制精密稱取干燥至恒重的刺五加苷E對(duì)照品適量，置25mL容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，溶解。得濃度為0.231mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

1.2.2供試品溶液的制備取干燥刺五加莖粉末（40目）約5g，精密稱定，置于250mL圓底燒瓶中，加入60%乙醇50mL回流提取2h，抽濾，置于250mL容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2　方法與結(jié)果

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別掃描刺五加苷E對(duì)照品溶液及供試品溶液發(fā)現(xiàn)兩者在560nm處均有一個(gè)吸收峰且峰形變化平緩便于定量測(cè)定。因此，將560nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2含量測(cè)定方法（變色酸法）

精密吸取供試品溶液及刺五加苷E對(duì)照品溶液置于10mL具塞試管中，蒸干，依次加入0.5mL 10%變色酸溶液，3mL濃H2SO4，搖勻后加入1.5mL蒸餾水，密封試管口，搖勻，置于試管架上，放入水浴鍋，沸水浴加熱30min，取出后直流水迅速冷卻，搖勻，空白試劑調(diào)零，560nm處測(cè)定。

2.3刺五加苷E標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取刺五加苷E對(duì)照品溶液150、200、250、300、350、400、450、500μL，分別置于10mL具塞試管中，按“2.2”項(xiàng)下操作?？瞻自噭┱{(diào)零，在560nm處測(cè)定吸光度，以對(duì)照品吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y=0.0295x-0.0048，r=0.9995。結(jié)果表明，刺五加苷E在6.93～23.1μg·mL-1濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1　刺五加苷E的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1　Standard curve of Eleutheroside E

2.4方法學(xué)考察

2.4.1精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液200μL，按“2.2”項(xiàng)下操作測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，其RSD值為0.28%，說明儀器精密度良好，所測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，結(jié)果見表1。

表1　精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab.1　Results of precision tests

2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液200μL，按“2.2”項(xiàng)下操作測(cè)定吸光度，每隔20min測(cè)定一次吸光度值，其RSD值為0.78%，表明供試品溶液顯色后120min內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表2。

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table.2　Results of stability tests

2.4.3加樣回收率試驗(yàn)精密吸取6份已知總木脂素含量的供試品溶液各100μL，精密加入一定量的對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下操作測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算回收率，其RSD值為2.41%，表明已建立的含量測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確，結(jié)果見表3。

表3　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table.3　Results of recovery tests

2.5樣品測(cè)定

取干燥刺五加莖粉末（40目）3份，每份約5g，精密稱定，按“1.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液200μL，按“2.2”項(xiàng)下操作測(cè)定吸光度。結(jié)果見表4。測(cè)得供試品溶液中總木脂素的平均含量為1.62%。

表4　刺五加莖總木脂素的含量測(cè)定結(jié)果（n=3）Table.4　Contents of lignans in stems of Acanthopanax senticosus（n=3）

3　結(jié)論

利用變色酸比色法測(cè)定刺五加莖總木脂素含量。其原理為：木脂素類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)上多具有1個(gè)亞甲二氧基（-OCH2-O-），濃H2SO4可使其水解并定量釋放出甲醇，后者可與變色酸反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色。在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，即可計(jì)算出總木脂素的含量。經(jīng)方法學(xué)考察，其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性RSD值分別為0.28%、0.78%、0.82%，回收率為99.28%，供試品溶液在顯色120min內(nèi)穩(wěn)定，表明建立的測(cè)定方法重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便易行，可用于刺五加莖總木脂素含量的測(cè)定。為刺五加莖總木脂素提取及富集工藝奠定基礎(chǔ)。

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Determination of content of total lignans in the stem of acanthopanax senticosus*

ZHANG Ying，YUE shu-qi，LI Rui-fang，SUN Hui
（National TCM Key Laboratory of Serum Pharmacochemistry，Hei Long Jiang University of Traditional Chinese Mdicine，Harbin 150040，China）

Objective：established A UV spectrophotometry method for the determination of total ignin in the stem of acanthopanax senticosus was.Method：Use ultraviolet spectrophotometer to measure total lignans in the stem of acanthopanax senticosus，eleutheroside E as reference substances，at the maximum absorption wavelength，respectively.Result：eleutheroside E with maximum absorption at 560nm，it had a good linear relationship within the range of 6.93～23.1ug·mL-1（r=0.9995）and the average recovery was 99.28%（n=6）.Conclusion：The method is simple，accurate，and can be used for the quantitative determination of total ignin in the stem of acanthopanax senticosus.

acanthopanax senticosus；lignans；determination

R9

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20160728

2016-05-09

國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2011BAI03B03）刺五加產(chǎn)業(yè)關(guān)鍵技術(shù)、綜合開發(fā)利用研究

張穎（1979-），女，在讀博士研究生，從事中藥質(zhì)量控制及中藥血清藥物化學(xué)研究。
導(dǎo)師簡(jiǎn)介：孫暉（1963-），女，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事中藥質(zhì)量控制、中藥血清藥物化學(xué)、方證代謝組學(xué)研究。