史莉莉，李洪攀，譚海波，邱聲祥*

(1.長治學(xué)院，山西長治　046011；2.中國科學(xué)院華南植物園，廣東廣州　510650)

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小葉冷水花化學(xué)成分的研究

史莉莉1，李洪攀1，譚海波2，邱聲祥2*

(1.長治學(xué)院，山西長治046011；2.中國科學(xué)院華南植物園，廣東廣州510650)

采用硅膠色譜、Sephadex LH-20分子篩和RP-18反相硅膠色譜等技術(shù)，對小葉冷水花95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，并運用現(xiàn)代波譜技術(shù)(ESI,1HNMR,13CNMR)鑒定單體化合物結(jié)構(gòu)．發(fā)現(xiàn)從其全草乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離得到7個化合物，分別為：棕櫚油酸(1)，棕櫚酸(2)，烏蘇酸(3)，反式-植物醇(4)，(-)-丁香烯氧化物(5)，(+)-桉油烯醇(6)，α-香樹精(7)．化合物1～7均為首次從該植物中分離得到．

小葉冷水花；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

小葉冷水花(Pileamicrophylla)系蕁麻科(Urticaceae)冷水花屬(PileaLindl.,nom.conserve.)，廣泛分布在亞洲、非洲熱帶，在我國臺灣、江西、廣東、廣西、浙江等地較為常見[1]．作為民間常用的藥食同源植物，小葉冷水花以全草入藥，具有清熱、解毒、治療臃腫瘡瘍等功效，其同屬植物冷水花用于治療黃疸、肺結(jié)核等疾病[2]．現(xiàn)代藥理活性研究表明，冷水花的乙酸乙酯提取部分具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛活性[3]及體外抑菌作用[4]，但它的藥理機理及活性成分還不明朗．

到目前為止，僅印度馬尼帕爾大學(xué)(Manipal University)的Unnikrishnan課題組對小葉冷水花中的黃酮成分進(jìn)行了初步研究，并從乙醇粗提物中分離到6個黃酮苷類化合物[5]．國內(nèi)僅對同屬植物冷水花化學(xué)成分有研究[6-9]，對小葉冷水花的研究尚未見報道．此外，小葉冷水花作為防腐和抗氧化的食品添加劑，在食品工業(yè)方面也具有潛在的經(jīng)濟(jì)價值[10-11]．

為進(jìn)一步開發(fā)利用該植物的化學(xué)資源，本文對小葉冷水花的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從其全草乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部共分離得到7個化合物，分別為棕櫚油酸(1)，棕櫚酸(2)，烏蘇酸(3)，反式-植物醇(4)，(-)-丁香烯氧化物(5)，(+)-桉油烯醇(6)，α-香樹精(7)．所有化合物均為首次從該植物中分離得到．

1　儀器與材料

Eyela N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Tokyo Rikakai，日本)；Eyela SB-1100水浴鍋(Tokyo Rikakai，日本)；Eyela Aspirator A-1000S循環(huán)水真空泵(Tokyo Rikakai，日本)；DLSB-5/20低溫冷卻循環(huán)泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司，中國)；WFH-203三用紫外分析儀(上海精科儀器有限公司，中國)；APCI 2000 LC-MS-MS(Applied Biosystems，美國)；Bruker DRX-400 AVⅢ 500核磁共振儀(Bruker，瑞士)．

柱色譜硅膠(80～100目、100～200目、200～300目，青島海洋化工廠)；柱層析反相硅膠RP-18(50 μm,70 μm Baker，美國)；柱層析凝膠為Sephadex LH-20(Amersham Biosciences，瑞典)；其他有機溶劑和化學(xué)藥品均為國產(chǎn)分析純．

植物采自中國科學(xué)院華南植物園，經(jīng)中國科學(xué)院華南植物園邱聲祥研究員鑒定為蕁麻科冷水花屬植物小葉冷水花(P.microphylla)．樣本保存于中國科學(xué)院華南植物園天然產(chǎn)物化學(xué)生物學(xué)實驗室．

2　提取與分離

取小葉冷水花全草1.5 kg，充分粉碎，用95%的乙醇室溫浸泡3次，每次約24 h，合并濾液減壓濃縮至浸膏約200 g，然后加入1 500 mL水形成懸濁液，再用等體積的乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯部37.69 g．

將乙酸乙酯部進(jìn)行硅膠(80～100目)柱層析，正己烷∶乙酸乙酯(100∶1→1∶1)梯度洗脫，各組分濃縮后采用TLC板檢測，合并主點相同組分得Fr.1～Fr.6六個組分．

Fr.3(0.8 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用氯仿∶甲醇=1∶1進(jìn)行洗脫得到組分Fr.3.1，再經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫體系為正己烷∶乙酸乙酯(50∶1→10∶1)，得化合物5(8.0 mg)．

Fr.4(2.38 g)通過RP-18柱，用甲醇∶水(80%→100%)進(jìn)行梯度洗脫，得到Fr.4.1～Fr.4.3三個亞組分．組分Fr.4.1(0.8 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用甲醇進(jìn)行洗脫并合并主點相同流分；經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫體系為正己烷∶乙酸乙酯(10∶1→2∶1)；再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用氯仿∶甲醇=1∶3洗脫得化合物1(7.0 mg)．組分Fr.4.2(0.5 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用甲醇進(jìn)行洗脫并合并主點相同流分；再經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫體系為正己烷∶乙酸乙酯(10∶1→2∶1)得到化合物6(5.0 mg)．

組分Fr.5(4.24 g)通過RP-18柱，用甲醇∶水(80%→100%)進(jìn)行梯度洗脫，得到三個亞組分Fr.5.1,Fr.5.2和Fr.5.3．組分Fr.5.2經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用氯仿∶甲醇(8∶1→6∶1)梯度洗脫，再經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫梯度為正己烷∶乙酸乙酯10∶1→1∶1，經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析，得化合物4(23 mg)．組分Fr.5.3經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用氯仿∶甲醇(8∶1→6∶1)梯度洗脫，再經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫梯度為正己烷∶乙酸乙酯=10∶1→2∶1，經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析，得化合物7(16 mg)．

Fr.6(4.1 g)通過RP-18柱，用甲醇∶水(90%→100%)進(jìn)行梯度洗脫，得到8個亞組分Fr.6.1～Fr.6.8．組分Fr.6.7經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，用氯仿∶甲醇=1∶3進(jìn)行洗脫，合并主點相同流分，得到Fr.6.7.1和Fr.6.7.2兩個亞組分．Fr.6.7.1經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫梯度為正己烷∶丙酮(10∶1→2∶1)，經(jīng)TLC點板檢測，重結(jié)晶得到化合物2(5.0 mg)．Fr.6.7.2經(jīng)反復(fù)硅膠(200～300目)柱層析，洗脫梯度為正己烷∶乙酸乙酯=10∶1→2∶1，得到化合物3(15 mg).化合物1～7的結(jié)構(gòu)見圖1.

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1.無色油狀物,1HNMR(500 MHz,CDCl3)δ:5.34(2H,H-9,10),2.34(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),2.01(4H,m,H-8,11),1.62(2H,m,H-3),1.33～1.28(16H,overlap,H-4～H-7,H-12～H-15),0.88(3H,t,J=6.6 Hz,H-16)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，故鑒定化合物1為棕櫚油酸．

圖1　化合物1～7的結(jié)構(gòu)

化合物2.白色無定形粉末,1HNMR(500 MHz,CDCl3)δ:2.35(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),1.62(2H,m,H-3),1.30～1.26(24H,overlap,H-4～H-15),0.88(3H,t,J=6.6 Hz,H-16);13CNMR(125 MHz,CDCl3)δ:179.5(C-1),34.1(C-2),32.1(C-14),29.9-29.2(C-4～C-13),22.8(C-15),14.3(C-16)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，故鑒定化合物2為棕櫚酸．

化合物3.白色無定形粉末,1HNMR(500 MHz, CDCl3)δ:5.48(1H,m,H-12),3.45(1H,m,H-3),2.63(1H,d,J=11.2 Hz,H-18),1.23,1.22,1.04,0.99,0.88(each 3H,s,5-Me),0.95(3H,d,J=6.0 Hz,30-Me),0.87(3H,J=6.0 Hz,29-Me);13CNMR(125 MHz,CDCl3)δ:181.1(C-28),140.5(C-13),126.8(C-12),79.3(C-3),57.0(C-5),54.7(C-18),49.3(C-9),43.8(C-17),41.3(C-14),40.8(C-20),40.7(C-19),40.7(C-8),40.4(C-1),40.3(C-4),38.6(C-22),38.4(C-10),34.8(C-7),32.4(C-21),30.1(C-23),30.0(C-15),29.3(C-2),26.0(C-16),25.1(C-27),24.9(C-11),22.6(C-30),20.1(C-6),18.8(C-29),18.7(C-26),17.7(C-25),17.0(C-24)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，故鑒定化合物3為烏蘇酸．

化合物7.無色針狀結(jié)晶,13CNMR(125 MHz,CDCl3)δ:139.3(C-13),124.2(C-12),78.7(C-3),58.9(C-18),55.2(C-5),47.5(C-9),42.0(C-14),41.5(C-22),40.0(C-8),39.6(C-19),39.6(C-20),38.7(C-1),38.7(C-4),36.7(C-10),33.6(C-17),32.9(C-7),31.0(C-21),28.6(C-15),28.1(C-28),28.0(C-23),27.2(C-2),26.6(C-16),23.3(C-27),23.2(C-29),21.1(C-30),18.3(C-6),17.3(C-11),16.8(C-26),15.6(C-24),15.6(C-25)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]基本一致，故鑒定化合物7為α-香樹精．

4　結(jié)束語

從藥用植物中尋找發(fā)現(xiàn)具有良好活性的天然產(chǎn)物，是中藥現(xiàn)代植物藥研發(fā)的必經(jīng)之路，也是天然藥物研發(fā)的基本前提．近年來，無論是從正在研發(fā)的新藥還是已獲得批準(zhǔn)的藥物來看，天然產(chǎn)物在藥物研發(fā)中一直占據(jù)著重要地位．尤其是在抗菌抗癌和免疫抑制等藥物研發(fā)中，以天然產(chǎn)物為出發(fā)點的策略至今仍被認(rèn)為是最有效的方法．本文對傳統(tǒng)藥用植物小葉冷水花的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從其全草95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部共分離得到7個化合物，分別為棕櫚油酸(1)、棕櫚酸(2)、烏蘇酸(3)、反式-植物醇(4)、(-)-丁香烯氧化物(5)、(+)-桉油烯醇(6)、α-香樹精(7)．本實驗所有化合物均為首次從該植物中分離得到，填補了小葉冷水花化學(xué)成分研究的空白．鑒于小葉冷水花的同屬植物冷水花的乙酸乙酯部是其抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛活性的主要部位，在以后的工作中將針對分離到的7種化合物進(jìn)行生物活性測試，為小葉冷水花進(jìn)一步的藥效物質(zhì)研究奠定基礎(chǔ)．

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(責(zé)任編輯陸泉芳)

Chemical constituents from Pileamicrophylla

SHI Li-li1，LI Hong-pan1，TAN Hai-bo2，QIU Sheng-xiang2*

(1.Changzhi University,Changzhi 046011,Shaxi,China;2. South China Botanical Garden,Chinese Academy of Sciences,Guangzhou 510650,Guangdong,China)

The chemical constituents from ethyl acetate fraction of volume fraction 95% ethanolic extract ofPileamicrophyllaare isolated by various techniques including silica gel chromatographic,Sephadex LH-20 and RP-18 reversed-phasesilica gel chromatographic.Seven compounds are obtained and their structures are elucidated as palmitoleic acid(1),palmitic acid(2),ursolic acid(3),trans-phytol(4), 6,7-epoxy-3(15)-caryophyllene(5),(+)-spathulenol(6) and α-amyrin(7) by modern spectroscopic techniques(ESI,1HNMR,13CNMR).Compounds 1-7 are isolated from this plant for the first time.

Pileamicrophylla;chemical constituents;structure identification

10.16783/j.cnki.nwnuz.2016.04.014

2015-10-10;修改稿收到日期:2015-12-20

國家自然科學(xué)基金資助項目(81502949);廣東省自然科學(xué)基金博士啟動項目(2015A030310482)

史莉莉(1986—)，女，山西永濟(jì)人，講師，博士.主要研究方向為天然產(chǎn)物全合成及天然產(chǎn)物化學(xué).

E-mail:dandan986817@163.com

O 656

A

1001-988Ⅹ(2016)04-0064-04

*通訊聯(lián)系人，男，研究員，博士研究生導(dǎo)師.主要研究方向為天然藥物化學(xué).E-mail:sxqiu@scbg.ac.cn