張霞

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076）

HPLC法測(cè)定長(zhǎng)春西汀原料的有關(guān)物質(zhì)研究

張霞

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076）

建立高效液相色譜法測(cè)定長(zhǎng)春西汀有關(guān)物質(zhì)的方法.色譜柱C18柱（4.6×250 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-乙酸銨（0.2 mol/L）（55∶45），流速為1.0m L/min，進(jìn)樣量為20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm.結(jié)果表明，依據(jù)本法檢測(cè)，長(zhǎng)春西汀的線(xiàn)性關(guān)系良好，專(zhuān)屬性強(qiáng)；精密度和穩(wěn)定性良好.該方法準(zhǔn)確、靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可用于長(zhǎng)春西汀的檢測(cè).

長(zhǎng)春西??；有關(guān)物質(zhì)測(cè)定；高效液相色譜法

長(zhǎng)春西汀是由匈牙利GedeonRichter公司開(kāi)發(fā)成功，1978年開(kāi)始生產(chǎn)上市［1］，其化學(xué)名稱(chēng)為乙基阿樸長(zhǎng)春胺-22-醋酸乙酯，分子式：C22H26N2O2，分子質(zhì)量為350.46.長(zhǎng)春西汀主要用于缺血性腦血管疾病的治療和預(yù)防.本文參照英國(guó)藥典2013年版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)長(zhǎng)春西汀原料進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)研究，為企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù).

1　儀器與試藥

1.1儀器

日本島津高效液相色譜儀（SPD-20A）

1.2試藥

長(zhǎng)春西汀原料藥（生產(chǎn)廠(chǎng)家：東北制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：140801、140901、141001）；長(zhǎng)春西汀對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院 編號(hào)：100947）；雜質(zhì)A對(duì)照品（USP藥典對(duì)照品 編號(hào)：1714619）；雜質(zhì)B對(duì)照品（USP藥典對(duì)照品 編號(hào)：1714620）；雜質(zhì)C對(duì)照品（USP藥典對(duì)照品 編號(hào)：1714641）；雜質(zhì)D對(duì)照品（USP藥典對(duì)照品 編號(hào)：1714652）；乙腈（色譜純）；乙酸銨（分析純）；鹽酸（分析純）；氫氧化鈉（分析純）；過(guò)氧化氫（分析純）；注射用水（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司）

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱（填充劑：十八烷基硅膠，4.6×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈：乙酸銨（0.2 mol/L）（55∶45）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm.

2.2供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取長(zhǎng)春西汀原料適量加注射用水溶解稀釋制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的溶液，混勻，作為供試品溶液.

2.3對(duì)照溶液的制備

精密稱(chēng)取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含長(zhǎng)春西汀對(duì)照品0.001 mg的溶液.精密稱(chēng)取雜質(zhì)A對(duì)照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)A對(duì)照品0.006 mg，精密稱(chēng)取雜質(zhì)B對(duì)照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)B對(duì)照品0.005 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)C對(duì)照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)C對(duì)照品0.005 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)D對(duì)照品適量加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)D對(duì)照品0. 005 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液.

2.4專(zhuān)屬性試驗(yàn)

分別取長(zhǎng)春西汀原料適量置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解照下述方法試驗(yàn)：1）加入鹽酸溶液（1.0 mol/L）2 mL后，放置4 h，中和，定容，搖勻，作為酸破壞樣品.2）加入氫氧化鈉溶液（1.0 mol/L）2 mL后，放置2 h，中和，定容，搖勻，作為堿破壞樣品.3）加入3%過(guò)氧化氫溶液2 mL后，放置8 h后定容，搖勻，作為氧化破壞樣品.4）放入105℃烘箱，放置24 h后定容，作為熱破壞樣品.5）置強(qiáng)光下（照度：4 500 lx）照射，放置48 h后定容，作為光照降解樣品.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：長(zhǎng)春西汀原料在酸、堿、氧化劑、熱及光照條件下較穩(wěn)定，各個(gè)降解產(chǎn)物分離度良好.

2.5線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密稱(chēng)取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品加流動(dòng)相使溶解，稀釋制成每1 mL含長(zhǎng)春西汀對(duì)照品0.001 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)A對(duì)照品加流動(dòng)相使溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)A對(duì)照品0.006 mg，精密稱(chēng)取雜質(zhì)B對(duì)照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)B對(duì)照品0.005 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)C對(duì)照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)C對(duì)照品0.005 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)D對(duì)照品適量加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)D對(duì)照品0.005 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液.分別精密量取上述各對(duì)照品溶液10、15、20、25、30 μL分別進(jìn)樣，記錄色譜圖峰面積.以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以各個(gè)雜質(zhì)峰面積為縱坐標(biāo)，回歸方程分別為：A=36.867x+36.659，R=0.999 9；B=47.311x +44.027，R=0.999 8；C=26.454x+23.937，R= 0.999 6；D=36.328x+34.654，R=0.999 8.結(jié)果證明各個(gè)雜質(zhì)在0.06～0.2μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均線(xiàn)性關(guān)系良好.

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20μL，按照如上液相條件進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算所得主峰面積的RSD值，結(jié)果如表1所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該法重復(fù)性良好.

表1　有關(guān)物質(zhì)測(cè)定分析方法重復(fù)性精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密稱(chēng)取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含長(zhǎng)春西汀對(duì)照品0.001 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)A對(duì)照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)A對(duì)照品0.006 mg，精密稱(chēng)取雜質(zhì)B對(duì)照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)B對(duì)照品0.005 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)C對(duì)照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)C對(duì)照品0.005 mg的溶液，精密稱(chēng)取雜質(zhì)D對(duì)照品適量用流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)D對(duì)照品0.005 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液.另取長(zhǎng)春西汀原料制備的供試品溶液，在室溫條件下，分別于0、3、6、9、12、18 h測(cè)定，記錄色譜圖.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，本品的供試品溶液在室溫條件下，18 h之內(nèi)穩(wěn)定.

表2　有關(guān)物質(zhì)測(cè)定分析方法穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.8回收率試驗(yàn)

精密量取本品9份，每份50mL，分別向其中加入適量6.35μg/mL雜質(zhì)A、5.15μg/mL雜質(zhì)B、5. 51μg/mL雜質(zhì)C、5.93μg/mL雜質(zhì)D，制成含雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為各自雜質(zhì)限度的80%、100%、120%的回收率樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度各3份.按照如上液相條件進(jìn)樣，結(jié)果表明，各雜質(zhì)回收率良好（見(jiàn)表3）.

表3　有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法分析方法雜質(zhì)A回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測(cè)定

對(duì)批號(hào)為140801、140901、141001的長(zhǎng)春西汀原料樣品，按照“2.2及2.3”項(xiàng)下的方法分別制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4.

表4　樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3　結(jié)語(yǔ)

參考英國(guó)藥典2013年版收載的長(zhǎng)春西汀原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［2-3］，對(duì)雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C和雜質(zhì)D進(jìn)行研究，長(zhǎng)春西汀的線(xiàn)性關(guān)系良好，專(zhuān)屬性強(qiáng)；精密度和穩(wěn)定性良好，RSD均小于2.0%.該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，可用于長(zhǎng)春西汀有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè).檢驗(yàn)結(jié)果表明：雜質(zhì)D的含量在三批原料的檢測(cè)當(dāng)中含量均在0.1%以下，所以不將雜質(zhì)D定入長(zhǎng)春西汀原料企業(yè)內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中.

［1］許焱，田軍，等.長(zhǎng)春西汀的藥理作用與臨床應(yīng)用［J］.中西醫(yī)結(jié)合研究，2012，4（1）：38-39.

［2］長(zhǎng)春西汀原料標(biāo)準(zhǔn).英國(guó)藥典［S］.2013.

［3］吳倫，蘇陽(yáng)，范海潮，等.RP-HPLC法測(cè)定北五味子中6種木脂素類(lèi)成分［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2015，31（5）：536-539

Determ ination of related substances in vinpocetine by HPLC

ZHANG Xia
（Research Center on Life Sciences and Environmental Sciences，Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China）

To establish an HPLCmethod for determining the contents of related substances in vinpocetine.The chromatographic separation was performed on a C18column（4.6×250 mm，5μm）.Themobile phase consisted of acetonitrile and 0.2 mol/L ammonium acetate （55∶45）；the flow rate was 1.0 mL/min；the injection volume was 20μL.The detection wavelength was 280 nm.The Results indicated that the calibration curves of related substances had a good linearity.The specificity was strong and the precision and stability were good.Themethod was sensitive，accurate and specific，and could be applied in determining the related substances in vinpocetine.

vinpocetine；related substances；HPLC?

R927

A

1672-0946（2016）02-0234-03

2015-08-28.

張霞（1977-），女，碩士，高級(jí)工程師，研究方向：制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).