余　優(yōu)　王春臺(tái)　劉新瓊

（中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院湖北武漢430074）

果蠅唾腺染色體制片方法的改進(jìn)

余優(yōu)王春臺(tái)劉新瓊*

（中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院湖北武漢430074）

果蠅唾腺染色體的制片觀察是高等學(xué)校遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容之一，但傳統(tǒng)的制片方法往往不易得到理想的制片效果，需要大量的活體材料的準(zhǔn)備與學(xué)生剖取腺體的操作。根據(jù)長(zhǎng)期的教學(xué)實(shí)踐，對(duì)實(shí)驗(yàn)作了一些改進(jìn)，最終使唾腺染色體各臂能較好的伸展開(kāi)，易于觀察，得到了較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

果蠅唾腺染色體；解離時(shí)間；遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)

果蠅是一種模式生物，是遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的最佳材料。果蠅幼蟲(chóng)唾腺的染色體在細(xì)胞分裂間期不斷地進(jìn)行自我復(fù)制而不分開(kāi)，比普通中期相染色體大得多（約100～150倍），所以又稱(chēng)多線染色體。因此，果蠅唾腺染色體是觀察染色體形態(tài)特征，研究其化學(xué)組成、基因表達(dá)調(diào)控以及各類(lèi)神經(jīng)疾病的研究等方面很好的材料。但是按照實(shí)驗(yàn)教材上的方法，則學(xué)生難以把握，成功率較低，通過(guò)長(zhǎng)期的教學(xué)經(jīng)驗(yàn)和方法探索，筆者在實(shí)驗(yàn)操作上進(jìn)行了一些改良，取得了較好的結(jié)果。

1　材料與方法

1.1材料果蠅三齡幼蟲(chóng)。

1.3試劑0.7%氯化鈉、1mol/L HCl、改良苯酚品紅染液。

1.3操作步驟（1）挑選生長(zhǎng)肥大的3齡幼蟲(chóng)置于滴有生理鹽水的載玻片上，用解剖針（或鑷子）拉取唾腺，盡量把脂肪及其他雜物剝離干凈。（2）用濾紙吸去多余的生理鹽水，立即滴加1mol/L HCl于腺體上，解離時(shí)間設(shè)置了3個(gè)不同的時(shí)間，分別為3min、15min、30min，吸水紙吸去HCl，再滴加一滴蒸餾水輕輕沖洗，小心吸干。（3）滴加1～2滴改良苯酚品紅染液，染色10～15min。（4）蓋上蓋玻片，上方覆蓋一張濾紙，用大拇指用力按壓，使唾腺染色體充分展開(kāi)，便于觀察。（5）在低倍鏡下選擇唾腺細(xì)胞多且染色體分散好的視野，換高倍鏡仔細(xì)觀察。

2　結(jié)果與分析

此方法與傳統(tǒng)方法相比較，改進(jìn)的地方有：

（1）在拉取唾腺時(shí)，要盡量選擇肥大的幼蟲(chóng)，比較好固定，其唾腺也比較大。在實(shí)際操作過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)所用的解剖針的針頭一般較粗，往往不易固定住幼蟲(chóng)的頭部，可以用鑷子加以輔助將其固定住拉取唾腺。還可以用注射器及針頭操作，將幼蟲(chóng)頭部固定，拉取唾腺。

（2）與傳統(tǒng)方法相比較，此次實(shí)驗(yàn)增加了解離時(shí)間。解離時(shí)間梯度為：3min、15min、30min。其中15min和30min2個(gè)組別所制作出來(lái)的片子染色體都伸展的很開(kāi)，清晰可見(jiàn)，效果比傳統(tǒng)的3min要好得多（圖1）。

（3）壓片的時(shí)候，要保證染色液充滿(mǎn)整個(gè)蓋玻片再用力去壓，這樣易于染色體臂的伸展。

（4）整個(gè)操作過(guò)程中，要讓唾腺細(xì)胞要處于濕潤(rùn)的環(huán)境中，否則唾腺易干粘附在載玻片上。

（5）在給學(xué)生上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，先用保存完好的果蠅死蟲(chóng)給學(xué)生練習(xí)基本操作，熟練后，用新鮮的活蟲(chóng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。死蟲(chóng)材料充分，便于學(xué)生反復(fù)練習(xí)，但蟲(chóng)體的彈性很差，不易拉取到完整的唾腺染色體，但新鮮活蟲(chóng)的身體彈性非常好，很方便得到完整的唾腺染色體，2種材料結(jié)合使用，以利于高效高質(zhì)量地完成唾腺染色體制片。

圖1　果蠅唾腺染色體不同解離時(shí)間制片

［1］孫永林，李運(yùn)書(shū).觀察果蠅唾液腺染色體的實(shí)驗(yàn)改進(jìn)［J］.生物學(xué)教學(xué)，2005，30（9）：49.

［2］龔慧明.果蠅唾液腺染色體制片應(yīng)注意的問(wèn)題［J］.生物學(xué)教學(xué)，2007，32（10）：27.

［3］郝大翠，姚明鏡，劉焰，等.果蠅唾液腺染色體試材準(zhǔn)備及觀察方法的改進(jìn)［J］.生物學(xué)通報(bào)，2010，45（4）：48-49.

［4］饒友生，柴學(xué)文，王樟鳳.一種改進(jìn)的果蠅唾液腺染色體裝片制作方法［J］.生物學(xué)通報(bào)，2014，49（5）：44-46.

［5］薛小橋，曾慶韜，楊勇.一種易于掌握的果蠅唾腺染色體制片方法［J］.實(shí)驗(yàn)室研究與探索，2000，5：108-112.

［6］李瑤.果蠅唾腺染色體制片中4種染色方法的初探［J］.中國(guó)科教創(chuàng)新導(dǎo)刊，2012（10）：25-28.

（責(zé)編：張宏民）

An Improved Method for Drosophila Salivary Gland Chromosome

Yu You et al.
（College of Life Science，South-Central for Nationalities，Wuhan 430074，China）

Drosophila salivary gland chromosome sectioning observation is one of the main contents of genetics experiment in universities，but it is often difficult to get ideal production for the students who followed the traditional production methods，which often need large amount of living material preparation and student section glands.According to the long-term teaching practice，some improvement of the experiment was made.In the end，the drosophila salivary gland chromosomes of each arm can be better to stretch，easy to be observed and good experimental results are obtained.

Drosophila salivary gland chromosome；Dissociation time；Genetics experiments

Q311

A

1007-7731（2016）09-29-02

湖北省本科高校“專(zhuān)業(yè)綜合改革”試點(diǎn)項(xiàng)目（GJZ15006）。

余優(yōu)（1994-），女，湖北武漢人，研究方向：生物技術(shù)。*通訊作者

2016-04-15