吳雨祺　陳伊凡　鄭火青　胡福良（浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，杭州310058）

2015年國內(nèi)外蜂王漿研究概況

吳雨祺陳伊凡鄭火青胡福良
（浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，杭州310058）

本文對2015年國內(nèi)外蜂王漿的研究概況進行了綜述，對公開發(fā)表的56篇中英文文獻及59項專利的地域分布和研究領(lǐng)域進行了統(tǒng)計分析和評述，并重點介紹了蜂王漿的化學(xué)組分、質(zhì)量控制、生物學(xué)活性等領(lǐng)域的研究新進展。與2014年相比，2015年蜂王漿的研究熱度有所下降，但成果仍然豐富。

蜂王漿；化學(xué)組分；質(zhì)量控制；生物學(xué)活性；專利

蜂王漿是僅次于蜂蜜的主要蜂產(chǎn)品，應(yīng)用歷史悠久，應(yīng)用領(lǐng)域廣泛。近年來，隨著科技的發(fā)展和新興技術(shù)的應(yīng)用，蜂王漿的研究進入了一個新的階段。關(guān)注國際、國內(nèi)蜂王漿研究動態(tài)，了解蜂王漿研究的熱點，將有助于國內(nèi)蜂王漿科學(xué)研究的縱深發(fā)展，有助于蜂王漿產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。本文介紹了2015年度國內(nèi)外蜂王漿論文、專利情況，從地域和研究領(lǐng)域兩方面入手，對蜂王漿的研究進行了分析比較，并對未來蜂王漿研究作了展望。

1　蜂王漿相關(guān)的研究性論文分布

1.1論文的地域分布

根據(jù)Google Scholar、Elsevier、Springerlink、NCBI、ISIWeb of Knowledge、中國知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫的搜索結(jié)果，2015年度發(fā)表與蜂王漿相關(guān)的中、英文研究論文共56篇，其中被SCI收錄30篇，普通英文類15篇，普通中文類11篇；相比于2014年，2015年蜂王漿領(lǐng)域的研究熱度有所下降（表1）。

在33篇SCI論文中，第一單位來自中國的論文有5篇，與去年相比略有下降；而作為蜂王漿研究傳統(tǒng)大國的日本，本年度只有2篇SCI論文，下降明顯。而伊朗有4篇SCI論文發(fā)表，埃及和土耳其各有3篇，敘利亞和約旦各1篇，顯示中東地區(qū)的蜂王漿研究發(fā)展勢頭良好，已成為蜂王漿研究的新生力量。此外，加拿大有2篇SCI論文，美國、巴西、波蘭、韓國、馬其頓、斯洛伐克、西班牙、新西蘭、意大利各有1篇。普通英文論文同樣以中東國家為主，埃及、土耳其、伊拉克和伊朗共發(fā)表了12篇，占總數(shù)的80%。本年度國內(nèi)關(guān)于蜂王漿的中文論文仍呈現(xiàn)出下降的趨勢，且沒有核心期刊論文發(fā)表。

表1　 2011~2015年國內(nèi)外蜂王漿研究論文數(shù)

1.2研究領(lǐng)域的分布

2015年蜂王漿研究仍然主要集中于生物學(xué)活性和化學(xué)成分分析。在30篇SCI論文中，有21篇是有關(guān)蜂王漿生物學(xué)活性的研究，9篇是有關(guān)蜂王漿內(nèi)、外源性物質(zhì)的研究。

2　蜂王漿研究新進展

2.1蜂王漿質(zhì)量控制研究

與往年一樣，新鮮度的相關(guān)研究仍然是蜂王漿質(zhì)量控制領(lǐng)域的重點和熱點。中國農(nóng)科院蜜蜂研究所吳黎明等[1]建立了一種基于三磷酸腺苷降解產(chǎn)物的新鮮度檢測方法，檢測蜂王漿中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、單磷酸腺苷（AMP）、肌苷（HxR）、單磷酸肌苷（IMP）、次黃嘌呤（Hx）、腺苷（Ao）和腺嘌呤（Ai）等物質(zhì)的含量，并以腺苷、腺嘌呤、肌苷和次黃嘌呤的含量之和與以上所有物質(zhì)含量之和的比值作為新鮮度指標。在實驗室中檢測儲存于不同溫度和儲存了不同時間的蜂王漿樣品，結(jié)果顯示這一指標隨儲存溫度和時間的升高而升高，且有著良好的線性關(guān)系；同時，這一方法和糠氨酸法檢測同一樣品，得到了一致的結(jié)果，顯示這一新的評價指標是可行的。意大利薩薩里大學(xué)Ciulu等[2]則提出將5-羥甲基-2-糠醛（HMF）作為一個可行的新鮮度指標，實驗結(jié)果顯示，在4℃和-20℃儲存的蜂王漿樣品中未檢出HMF，而在25℃儲存的蜂王漿樣品中能檢測到HMF，且HMF在蜂王漿中的含量會隨儲存時間的增加不斷上升，顯示HMF也可能是一個可靠的新鮮度指標。馬其頓學(xué)者Lazarevska等[3]還報道了新鮮和凍干蜂王漿的紅外光譜與拉曼光譜，以及儲存過程中的變化規(guī)律。

蜂王漿中獸藥和殺蟲劑殘留檢測是本年度研究的一個熱點，歐洲、日本和中國的學(xué)者均發(fā)表了相關(guān)研究論文；西班牙阿爾梅利亞大學(xué)Martinez-Dominguez等[4]使用氧化鋯對蜂王漿中的殺蟲劑進行吸附，并使用高效液相色譜-質(zhì)譜進行檢測；日本學(xué)者kawano等[5]則建立一種簡單高效的氯霉素檢測方法。中國清華大學(xué)Zhang等[6]建立一種簡單高效的高效液相色譜-質(zhì)譜檢測方法，能有效地檢測超過90種獸藥，且不需要對樣品進行固相微萃取，操作簡單方便。

冷凍干燥是業(yè)界常用的蜂王漿加工手段。巴西學(xué)者Nascimento等[7]對新鮮蜂王漿和凍干蜂王漿的成分進行了分析比較，并比較了這兩種蜂王漿的抗菌能力，結(jié)果顯示凍干過程對蜂王漿的成分和生物學(xué)功能沒有顯著的影響，是一種適宜的蜂王漿處理手段。

2.2蜂王漿化學(xué)組分研究

中國山東農(nóng)大胥保華教授團隊[8]對不同日齡取得的工蜂漿和蜂王漿的成分進行分析，采集了2日、3日、4日的工蜂漿和蜂王漿以及5日工蜂漿，此外還采集了幼蟲2日齡、3日齡和4日齡當(dāng)天工蜂分泌的王漿，檢測了這些樣品的基本組成和微量元素含量。結(jié)果顯示，2~4日的工蜂漿含水量均顯著高于同日齡的蜂王漿，而蜂王漿的總蛋白、10-HDA、果糖和葡萄糖含量則顯著高于工蜂漿；同時幼蟲2日齡時工蜂蜂王漿的營養(yǎng)成分顯著高于3日齡和4日齡時的蜂王漿。

中國農(nóng)科院蜜蜂研究所李建科教授團隊對東方蜜蜂和西方蜜蜂蜂王漿蛋白質(zhì)的N-糖基化進行了深入研究[9]。他們在西方蜜蜂蜂王漿中找到了80個N-糖基化蛋白，包含有190個糖基化位點，其中的23個蛋白和35個糖基化位點是首次報道；而在東方蜜蜂蜂王漿中，共檢測到43個糖基化蛋白，包含138個糖基化位點，這也是首次報道東方蜜蜂蜂王漿的蛋白糖基化情況；進一步比較發(fā)現(xiàn)，兩種蜂王漿的糖基化蛋白和位點有著一定的差異，且這些差異顯示西方蜜蜂蜂王漿缺乏一些與抗菌相關(guān)的糖基化位點，解釋了為何西方蜜蜂更易受幼蟲芽孢桿菌的侵襲。這一研究讓我們更加深入地了解了東、西方蜜蜂蜂王漿的差異和蛋白糖基化對蜂王漿生物學(xué)功能的影響。

2.3蜂王漿的生物學(xué)活性研究

2.3.1蜂王漿生物學(xué)活性的分子機制研究

本年度對蜂王漿功能性組分作用機制的研究集中于蜂王漿蛋白質(zhì)成分的功能相關(guān)結(jié)構(gòu)和基團上。

蜂王漿和蜂蜜的蛋白組成有著高度的一致性，加拿大學(xué)者Brudzynski和Sjaarda[10]在對蜂蜜的研究過程中，發(fā)現(xiàn)蜂蜜中的糖蛋白組分表現(xiàn)出高效的殺菌能力，將糖蛋白用于革蘭氏陽性菌Bacillus subtilis和革蘭氏陰性菌Escherichia coli，培養(yǎng)過夜后菌株均發(fā)生明顯的聚集效應(yīng)，同時細菌的形態(tài)有著明顯的變化，包括細胞壁的溶解、原生質(zhì)體的生成以及進一步的細胞溶解。進一步研究顯示，糖蛋白組分的殺菌功能受細胞生長階段和糖蛋白濃度影響。同時對這些蛋白進行了脫糖基處理后，其殺菌能力明顯降低，說明糖基化與這些蛋白的殺菌功能密切相關(guān)。通過對糖蛋白進行成分分析，顯示MRJP-1是主要的功能蛋白。同時Brudzynski等[11]還檢測了糖蛋白對多種抗藥菌株的效果，結(jié)果顯示殺菌效果良好，適合作為一種新的廣譜抗菌藥物。

蜂王漿中的小肽類成分的相關(guān)功能鮮有報道，2015年多位學(xué)者在這一領(lǐng)域取得重要的進展。Tamura等[12]（2009）研究發(fā)現(xiàn)，蜂王漿中的apisimin能與MRJP1形成聚合物，刺激淋巴球的增殖。最近，新西蘭學(xué)者Gannabathula等[13]在對蜂蜜的生物學(xué)活性進行研究時，發(fā)現(xiàn)apisimin在多個蜂蜜樣本中普遍存在，細胞實驗顯示apisimin單體能刺激血液單核細胞釋放TNF-α，并表現(xiàn)出濃度依賴性；同時apisimin與蜂蜜中的阿拉伯半乳糖聚糖糖蛋白(AGP)有著協(xié)同效應(yīng)，而與MRJP1和apisimin的協(xié)同效應(yīng)不同，這兩者并不需要通過形成聚合物來產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。斯洛伐克學(xué)者Bílikova等[14]對蜂王漿多肽royalisin的抗菌功能進行了深入的研究。與其他昆蟲防御素相比，royalisin的羧基段多了11個氨基酸，因此他們將royalisin的這11個氨基酸進行了刪除并使用大腸桿菌進行體外表達，這一重組多肽被命名為royalisin-D，同時使用二硫蘇糖醇破壞roaylisin和royalisin-D的二硫鍵，然后將這些樣品用于抗菌實驗。實驗結(jié)果顯示，royalisin-D的抗菌功能有了一定的降低，而破壞二硫鍵導(dǎo)致royalisin和royalisin-D的抗菌功能明顯下降，這顯示royalisin羧基段11個氨基酸和二硫鍵與其抗菌功能有著密切的關(guān)系。

2.3.2蜂王漿的保健功能研究

蜂王漿的保健功能一直是蜂王漿功究的重點。日本北海道大學(xué)Moriyama等[15]研究了溫度對MRJP1低聚物生物學(xué)活性的影響。他們首先比較了MRJP1低聚物、MRJP2、MRJP3的促細胞生殖能力，結(jié)果顯示只有MRJP1低聚物具有促細胞增殖的能力，進一步對MRJP1低聚物進行熱處理（56℃、65℃和96℃）細胞實驗，發(fā)現(xiàn)對不同的細胞系，熱處理的MRJP1的增殖效果并不一致，這4種MRJP1樣品對白血球細胞都表現(xiàn)出了一定的促增殖能力，只有96℃處理的樣品顯著下降；而對IEC-6細胞系，熱處理MRJP1的促細胞增殖能力均顯著降低。這顯示MRJP1低聚物促生長功能的熱穩(wěn)定性隨細胞的不同而變化。

果蠅是一種常用的模式生物，美國北卡羅萊納州立大學(xué)Shorter等[16]將其用于蜂王漿的保健功能機制研究，使用含蜂王漿0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%和70%的飼料來飼養(yǎng)果蠅。他們首先研究了蜂王漿對果蠅健康指標的影響，測定了果蠅的存活率、體重、發(fā)育時間、體長和后代數(shù)量等指標，結(jié)果顯示蜂王漿對果蠅的健康指標有著一定的影響；接著使用基因芯片比較了含0%、20%、50%和60%蜂王漿飼糧對果蠅基因表達譜的影響，結(jié)果表明蜂王漿對果蠅的基因表達有著明顯的影響，但主要集中于生物合成與解毒功能，可能與添加蜂王漿導(dǎo)致的營養(yǎng)過剩有關(guān)。

韓國慶熙大學(xué)Jeon和Cho[17]研究蜂王漿對外表皮保水的作用，他們設(shè)置了4個實驗組，給衰老小鼠模型分別飼喂正常日糧（對照組）、控制日糧（控制組）和含有蜂王漿的控制日糧（實驗組），飼養(yǎng)16周后發(fā)現(xiàn)飼喂蜂王漿的實驗組小鼠表皮含水量顯著高于控制組，且多個與神經(jīng)酰胺合成相關(guān)的酶表達量均有提升。

土耳其學(xué)者Saral等[18]使用肝損傷小鼠，檢驗了多種蜂產(chǎn)品的抗氧化和保肝作用，結(jié)果顯示蜂王漿具有良好的抗氧化功能和保肝作用。烏克蘭學(xué)者Mamchur等[19]比較吡拉西坦、白藜蘆醇和蜂王漿丙二醇提取物對患有代謝綜合征小鼠的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂王漿提取物和白藜蘆醇能有效改善患病小鼠的癥狀。土耳其學(xué)者Karaca等[20]評估蜂王漿免疫調(diào)節(jié)能力，使用2,4,6三硝基苯磺酸構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型并飼喂蜂王漿，結(jié)構(gòu)顯示蜂王漿能有效抑制促炎因子IL-1β和TNF-α的生成，同時提高抗炎因子IL-10的表達；飼喂蜂王漿小鼠的潰瘍損傷、體重下降指標均好于對照組小鼠。此外，他們還報道蜂王漿對糖尿病導(dǎo)致的睪丸損傷的改善作用[21]。埃及學(xué)者El-Aidy等[22]研究發(fā)現(xiàn)，蜂蜜、蜂王漿和蜂膠提取物對哮喘小鼠模型肺部炎癥具有改善作用。

2.4蜂王漿的應(yīng)用

埃及學(xué)者Mohamed等[23]評估了人工合成色素檸檬黃（tartrazine）可能的神經(jīng)毒性，發(fā)現(xiàn)使用檸檬黃飼喂小鼠30天后，小鼠腦部的多種神經(jīng)遞質(zhì)含量顯著下降，大腦皮層能觀察到大量凋亡細胞；與此同時，研究發(fā)現(xiàn)，同時服用蜂王漿和檸檬黃色素能有效抵御色素這一神經(jīng)毒性，對大腦神經(jīng)表現(xiàn)出良好的保護作用。埃及蘇伊士運河大學(xué)的Ibrahim等[24]將蜂王漿用于緩解藥物副作用，他們發(fā)現(xiàn)蜂王漿能有效降低化療藥物subchroniccisplatin對腎臟的損傷。約旦學(xué)者Alu'datt等[25]報道了蜂王漿在發(fā)酵乳制備過程中應(yīng)用。

伊朗學(xué)者報道了三項蜂王漿的臨床應(yīng)用試驗，這三項研究均是將蜂王漿用于糖尿病患者，其中一項研究對患者的血糖指標進行了檢測，發(fā)現(xiàn)蜂王漿與安慰劑的效果雖然有著一定的差異，但是在統(tǒng)計上并不顯著[26]；另一項研究則關(guān)注了蜂王漿對2型糖尿病患者的氧化應(yīng)激和胰島素耐受性，結(jié)果顯示，服用蜂王漿能改善患者的多項生理指標，對2型糖尿病有一定療效[27]；第三項研究則將關(guān)注點放在了糖尿病并發(fā)癥，他們研究了蜂王漿對糖尿病足部潰瘍患者的功效，結(jié)果顯示蜂王漿的效果并不顯著[28]。

3　蜂王漿相關(guān)專利

3.1專利的地域分布

作為最大的蜂王漿生產(chǎn)和出口國，2015年和往年一樣，我國仍然是專利最多的國家，這表明我國在蜂王漿相關(guān)領(lǐng)域的開發(fā)熱情的和對知識產(chǎn)權(quán)保護的重視。除中國外，韓國有1項專利。而在亞洲之外，美國有2項，俄羅斯和歐盟各有1項專利。

在2015年中國蜂王漿專利中，發(fā)明授權(quán)有8項，公布的發(fā)明專利28項，還有13項實用新型專利和6項外觀設(shè)計專利（表2）。這樣的結(jié)構(gòu)說明國內(nèi)的專利主要集中于創(chuàng)新含量更高的發(fā)明專利，同時也兼顧實用類技術(shù)和商業(yè)用途設(shè)計。

3.2專利領(lǐng)域分布

表2　 2015年度中國（大陸）蜂王漿專利概況

國外專利以蜂王漿制品為主，包括美國的蜂王漿蛋白抗炎制劑“anti-inflammatory proteins and peptides and methods of preparation and use thereof（US-20150337019）”和“immunostimulatory compositions and methods ofmanufacture（US-20150071968）”、韓國的蜂王漿抗衰老制劑“manufacturing method of aged food using royal jelly of honey bees,pollen powders and honey in honey combs（KR-1020150031684）”、俄羅斯的使用蜂王漿制作的糖衣“confectionary dragee with royal jelly（RU-0002538110）”、歐盟的蜂王漿生產(chǎn)器具“production device for queen bee and royal jelly（EP-2888934）”。

國內(nèi)蜂王漿專利也多與產(chǎn)品開發(fā)有關(guān)，如“一種具有護肝作用的蜂王漿口服液（CN103918963B）”、“一種鮮蜂王漿啤酒、果酒的制備方法（CN105087310A）”、“一種蜂王漿復(fù)合口服制劑（CN104783161A）”、“一種蜂王漿花粉蜜制備方法（CN104757354A）”、“一種蜂王漿及其制備方法（CN103300275B）”、“一種蜂王漿人參酒（CN104711151A）”等；蜂王漿的加工和質(zhì)量控制也是發(fā)明專利的一大熱點，如“組蛋白去乙?；敢种苿┯诟淖兎渫鯘{中MRJP3蛋白質(zhì)的新穎用途（CN101960997B）”、“一種蜂王漿組合物及其制備方法（CN103535574B）”、“一種抗氧化活性蜂王漿凍干粉的制備方法（CN105010925A）”；分子生物學(xué)研究在蜂王漿生產(chǎn)上的價值也逐步凸顯，“利用蜜蜂SsRbeta基因熒光定量PCR技術(shù)鑒別蜂王漿產(chǎn)量性能的方法（CN103421901B）”等方法為蜜蜂育種提供了新的思路；此外還有蜂王漿生產(chǎn)機具的設(shè)計，包括：“用于蜂王漿機械化生產(chǎn)的鉗蟲機（CN103329823B）”、“蜂王漿機械化生產(chǎn)鉗蟲機（CN102907352B）”、“一種高效蜂王漿挖漿器（CN104839050A）”，等等。

4　蜂王漿研究展望

相比于2014年度，2015年度蜂王漿研究熱度有所下降，但在多個領(lǐng)域仍有引人注目的成果。同時，國內(nèi)專利數(shù)量保持穩(wěn)定，說明業(yè)內(nèi)對知識產(chǎn)權(quán)保護仍很重視，對蜂產(chǎn)品的創(chuàng)新也有著很高的熱情。

從2015年的相關(guān)研究來看，蜂王漿中蛋白質(zhì)成分的相關(guān)研究仍然是目前的熱點和重點，從這幾年的研究趨勢來看，對蛋白質(zhì)的研究從其基本功能的探索逐步深入到對蛋白質(zhì)的功能基團和結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)與研究；而對蜂王漿蛋白質(zhì)組的研究也從基本組成轉(zhuǎn)向了表達后修飾等更深入的領(lǐng)域，為更深入地研究蜂王漿功能的作用機制提供思路與方向。

質(zhì)量控制是蜂王漿產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要保障，蜂王漿新鮮度檢測仍然是這一領(lǐng)域的研究熱點，本年度同樣有不少高質(zhì)量論文發(fā)表，但與此同時相關(guān)研究還需要走出實驗室，更多更好地與生產(chǎn)實際相結(jié)合。

中國、日本和歐美發(fā)達國家仍然是蜂王漿研究的先鋒和主力，很大比例的高質(zhì)量論文出自這些國家的研究團隊，但本年度日本的論文數(shù)量與往年相比有所下降。而伊朗、埃及和土耳其等一些發(fā)展中國家蜂王漿研究表現(xiàn)出良好態(tài)勢，與之前相比高水平論文的比例有了一定提高，今后很有可能成為蜂王漿研究新的主力。我們相信，加強全球蜂王漿的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究，帶動蜂王漿科研與產(chǎn)業(yè)的良性發(fā)展是未來的必然趨勢。

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Research Status of Royal Jelly in 2015

W u Yuqi Chen Yifan Zheng Huoqing Hu Fuliang
（College of Animal Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310058）

The research status of royal jelly in China and abroad in 2015 were reviewed in this article.We analyzed and summarized all 56 papers and 59 patents based on the geographical distribution and research area,and focused on the research progresses in chemical composition,quality control and biological activity.Compared with 2014,the number of royal jelly relatedpapers decreased in 2015,but lots of achievements are still obtained.

royal jelly,chemical composition,quality control,biological activity,patent

國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項（CARS-45）、國家科技支撐計劃（2011BAD33B04）資助

胡福良，E-mail:flhu@zju.edu.cn