劉娟妮 李俊海 白國(guó)棟 吳宏培 廖和和陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤科，陜西咸陽(yáng)712

PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義△

劉娟妮 李俊海 白國(guó)棟 吳宏培 廖和和#
陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤科，陜西咸陽(yáng)7120000

目的研究PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其與疾病發(fā)生發(fā)展、預(yù)后的關(guān)系。方法用免疫組化SP法檢測(cè)45例乳腺癌患者病理組織（觀察組）和其中15例患者癌旁正常組織（對(duì)照組）中PTEN、PI3K、AKT表達(dá)情況，采用單因素回歸分析對(duì)PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)因素進(jìn)行分析。結(jié)果PI3K、AKT在乳腺癌中的表達(dá)率分別為73.3%、75.5%，高于癌旁正常乳腺組織的33.3%、40%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PTEN在乳腺癌中表達(dá)率為22.2%，低于癌旁正常乳腺組織的53.3%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；單因素回歸分析結(jié)果顯示，患者發(fā)病年齡對(duì)PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)無關(guān)（P＞0.05）；組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)因素（P＜0.05）。結(jié)論P(yáng)I3K/AKT信號(hào)通路可能參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展，PTEN蛋白表達(dá)缺失導(dǎo)致AKT、PI3K蛋白的過度表達(dá)，PI3K、PTEN、AKT蛋白表達(dá)的檢測(cè)可能有助于預(yù)測(cè)乳腺癌的預(yù)后。

乳腺腫瘤；PTEN；PI3K；AKT；免疫組織化學(xué)

Oncol Prog，2016，14（5）

乳腺癌是我國(guó)婦女最常見的惡性腫瘤，是僅次于肺癌的第二位癌癥死亡原因。我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，已成為世界上發(fā)病率增長(zhǎng)速度最快的國(guó)家之一，其發(fā)病率以每年3%～4%的速度遞增［1］。目前研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3 kinases/protein kinase B，PI3K/AKT）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在人類腫瘤譜中存在普遍失調(diào)現(xiàn)象，該通路的某些成分突變可導(dǎo)致通路功能改變，從而引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化。其不僅可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活，還與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［2］。因此，PI3K/AKT通路成為近年來研究的熱點(diǎn)，以此信號(hào)通路中關(guān)鍵分子為靶點(diǎn)的乳腺癌治療正在研究中。本研究對(duì)PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)情況進(jìn)行分析，并探討了其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及與臨床預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2010年3月至2013年3月于核工業(yè)二一五醫(yī)院收治的乳腺癌患者45例，收集乳腺癌病理組織45例作為觀察組，并選取其中15例患者的癌旁正常組織作為對(duì)照組。入選標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)切除大標(biāo)本，病理科證實(shí)為乳腺癌；②有完整病歷資料；③術(shù)前均未行任何放化療；④所有入選患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者有嚴(yán)重心肺疾病者；②術(shù)前行新輔助放化療及靶向治療者。所有患者均為女性，平均年齡54.5歲（34～75歲）；組織學(xué)類型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌30例，浸潤(rùn)性小葉癌10例，單純癌3例，髓樣癌2例；臨床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例。

1.2方法與試劑

所有組織標(biāo)本均經(jīng)福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，每例制作成4 μm厚的切片以備免疫組化應(yīng)用，每塊組織的連續(xù)切片中，均取1張留做HE染色對(duì)照。采用免疫組化SP法檢測(cè)PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)情況。試劑購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照用公司提供的已知陽(yáng)性組織，以PBS代替一抗為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷

采用雙盲法，由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行判讀。對(duì)PTEN、PI3K、AKT蛋白的表達(dá)率檢測(cè)均以出現(xiàn)背景清晰的棕黃或棕褐色顆粒為陽(yáng)性。PTEN蛋白和PI3K蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)；AKT蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，部分表達(dá)于細(xì)胞核。判定標(biāo)準(zhǔn)，①按陽(yáng)性細(xì)胞的百分比評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞＜25%為0分，26%～50%為1分，51%～75%為2分，＞75%為3分；②按染色強(qiáng)度評(píng)分：無顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞比例和陽(yáng)性強(qiáng)度綜合評(píng)分［3］，以二者乘積的得分值＜4分為陰性表達(dá)，＞4分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用χ2檢驗(yàn)比較PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，用單因素回歸分析方法對(duì)PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)因素進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 PTEN、PI 3 K、AKT蛋白在乳腺癌和癌旁正常組織中的表達(dá)

乳腺癌中PTEN、PI3K、AKT蛋白的陽(yáng)性表達(dá)的典型結(jié)果見圖1。PTEN在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率為22.2%，低于癌旁正常乳腺組織的53.3%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PI3K、AKT在乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為73.3%、75.5%，高于癌旁正常乳腺組織的33.3%、40.0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。

圖1　PTEN、PI 3 K、AKT蛋白在乳腺癌組織中的典型表達(dá)

2.2 PTEN、PI 3 K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)因素分析

單因素回歸分析結(jié)果顯示，患者發(fā)病年齡對(duì)PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)無關(guān)（P＞0.05）；組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)因素（P＜0.05），詳見表1。

表1　PTENPTEN、PIPI3K K、AKTAKT蛋白在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)因素分析

3　討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，傳統(tǒng)的治療方法包括外科手術(shù)、化療、放療及內(nèi)分泌治療等，目前腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是治療的主要挑戰(zhàn)［4-5］。PI3K/AKT是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，該通路某些成分的突變所致的功能獲得或缺失能夠引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)該通路可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移行為密切相關(guān)［6］。PI3K/AKT信號(hào)通路在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，然而由于這條通路的復(fù)雜性，其基因的變化與臨床病理或其他生物學(xué)標(biāo)志物之間的聯(lián)系仍未明確，需進(jìn)一步研究可以預(yù)測(cè)治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物，以分辨出患者對(duì)PI3K/AKT通路阻滯劑的敏感性，從而為乳腺癌患者提供個(gè)體化的治療方案［7］。

PTEN在10號(hào)染色體上表達(dá)，是一種抑癌基因，該基因突變或缺失可發(fā)生在各類腫瘤中，如子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、小細(xì)胞肺癌等［8］。既往研究發(fā)現(xiàn)，臨床上常見PTEN基因的缺失與乳腺癌腦轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［9］。PI3K是生長(zhǎng)因子受體超家族信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一個(gè)關(guān)鍵分子，其在促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制細(xì)胞凋亡，維持細(xì)胞生存等機(jī)制中具有重要作用［10］。

本研究分析乳腺癌中PTEN、PI3K、AKT的表達(dá)情況，結(jié)果表明PI3K、AKT的過表達(dá)和PTEN的低表達(dá)與乳腺癌的形成和進(jìn)展有關(guān)，檢測(cè)PTEN、PI3K、AKT的表達(dá)可用于判定乳腺癌的惡性程度，并可作為判斷乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)。另外，單因素回歸分析結(jié)果顯示，患者發(fā)病年齡對(duì)PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)無關(guān)（P＞0.05）；組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是PTEN、 PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)因素（P＜0.05），這與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相似。學(xué)者郭紹文［11］采用免疫組化法對(duì)84例乳腺癌組織中PTEN、PI3K、AKT蛋白表達(dá)情況研究發(fā)現(xiàn)，與乳腺腺瘤組織比較，乳腺癌組織中PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率降低，AKT、PI3K蛋白的表達(dá)率升高（P＜0.05），這與本研究結(jié)果一致，因此可以推測(cè)PTEN、AKT、PI3K可能參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，其蛋白表達(dá)的檢測(cè)也可能有助于預(yù)測(cè)乳腺癌的預(yù)后。

由于乳腺癌的異質(zhì)性，PI3K/AKT通路改變的頻率及方式在不同的乳腺癌亞型中也有所不同，隨著研究的不斷深入，將會(huì)更加明確各亞型中通路的改變及其之間的聯(lián)系，這將有助于指導(dǎo)不同分子亞型乳腺癌的靶向治療及聯(lián)合治療方案；乳腺癌的發(fā)生發(fā)展不是單一因素的結(jié)果，未來乳腺癌治療一定是采用針對(duì)多條基因通路的共同抑制或激活手段，這樣才能達(dá)到理想療效。

綜上所述，PI3K/AKT信號(hào)通路可能參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展，PTEN蛋白表達(dá)缺失導(dǎo)致AKT、PI3K蛋白的過度表達(dá)，PI3K、PTEN、AKT蛋白表達(dá)的檢測(cè)可能有助于預(yù)測(cè)乳腺癌的預(yù)后；同時(shí)，以PI3K/AKT信號(hào)通路為靶點(diǎn)的分子靶向治療有望為乳腺癌治療提供新的思路。

［1］Siegel R，Ma J，Zou Z，et al.Cancer sta-tistics，2014［J］.CA Cancer J Clin，2014，64（1）：9-29.

［2］Sabine VS，Crozier C，Brookes CL，et al.Mutational analysis of pi3k/akt signaling pathway in tamoxifenexemestane adjuvant multinational pathology study［J］.J Clin Oncol，2014，32（27）：2951-2958.

［3］龔曉萌，王黎明.乳腺癌組織中PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)［J］.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2011，20（1）：75-79.

［4］Harder H，Langridge C，Solis-Trapala I，et al.Post-operative exercises after breast cancer surgery：results of a RCT evaluating standard care versus standard care plus additional yoga exercise［J］.European Journal of Integrative Medicine，2015，56：157-186

［5］Aceto N，Bardia A，Miyamoto DT，et al.Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis［J］.Cell，2014，158（5）：1110-1122.

［6］Saini KS，Loi S，de Azambuja A，et al.Targeting the pi3k/ Akt/mtor and Raf/mek/erk pathways in the treatment of breast cancer［J］.Cancer Treat Rev，2013，39（8）：935-946.

［7］廖明娟，陳紅風(fēng).PI3K-Akt信號(hào)通路與乳腺癌關(guān)系研究進(jìn)展［J］.癌癥進(jìn)展，2012，10（2）：160-164.

［8］Boosani CS，Agrawal DK.PTEN modulators：a patent review［J］.Expert Opin Ther Pat，2013，23（5）：569-580.

［9］Wikman H，Lamszus K，Detels N，et al.Relevance of PTEN loss in brain metastasis formation in breast cancer patients［J］.Breast Cancer Res，2012，14（2）：R49.

［10］Hurvitz SA，Hu Y，O'Brien N，et al.Current approaches and future directions in the treatment of HER2-positive breast cancer［J］.Cancer Treat Rev，2013，39（3）：219-229.

［11］郭紹文.乳腺癌組織中PTEN、AKT表達(dá)及與其臨床病理及預(yù)后的相關(guān)性［J］.實(shí)用癌癥雜志，2014，29（5）：495-497.

Expression of proteins associated with PI33K/AKT signaling pathway in breastt cancer and the clinical significancee △

LIU Juan-ni LI Jun-hai BAI Guo-dong WU Hong-pei LIAO He-he#
Department of Oncology，the Nuclear Industry 215 Hospital，Xianyang 712000，Shaanxi，China

ObjectivectiveTo investigate the expressions of PTEN，PI3K，and AKT in breast cancer and their relevance with the occurrence，development and prognosis of breast cancer.MethodethodThe expression of PTEN，PI3K and AKT in 45 cases of breast cancer（observer group）and 15 cases with normal adjacent tissues（comparison group）were determined using SP method of immunohistochemistry，and univariate analysis was applied to analyze the factors related with positive expression of PTEN，PI3K，and AKT protein in breast cancer tissues.ResultesultThe PI3K and AKT expression rate in breast cancer was 73.3%and 75.5%，higher than that in normal adjacent tissues at 33.3%and 40%，respectively（P＜0.05）；the expression rate of PTEN in breast cancer was 22.2%，lower than that of the adjacent normal tissues at 53.3%，and no significant difference was observed（P＞0.05）；the univariate analysis showed that，age was irrelevant（P＞0.05）；while histological grade，clinical stage，axillary lymph node metastasis were factors associated with positive expression of PTEN，PI3K，and AKT in breast cancer tissues（P＜0.05）.ConclusionusionPI3K/AKT signaling pathway may be involved in the occurrence and development of breast cancer，and the loss of expression of PTEN may contribute to overexpression of PI3K and AKT in breast cancer，so the detection of PTEN，PI3K and AKT may be helpful to predict the prognosis of breast cancer.

rdsbreast cancer；PTEN；PI3K；AKT；immunohistochemistry

中文分類號(hào)： R737. 9A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.10

陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2014JM4109）

（corresponding author）：郵箱：huhuliaoyh@fox.mail.com

2015-11-12）