盧青云，張文杰，王　沛，強(qiáng)永杰

甲胎蛋白、α-L-巖藻糖苷酶和高爾基體蛋白73檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的意義

盧青云，張文杰△，王沛，強(qiáng)永杰

（甘肅省第二人民醫(yī)院檢驗科，甘肅 蘭州 730000）

探討血清中甲胎蛋白（AFP）、α-L-巖藻糖苷酶（AFU）和高爾基體蛋白73（CP73）在原發(fā)性肝癌診斷中的意義。對原發(fā)性肝癌患者（55例）、良性肝病患者（60例）、健康體檢者（60例）共175個血清樣本，采用化學(xué)發(fā)光法檢測各組甲胎蛋白含量，用速率法測定α-L-巖藻糖苷酶含量，用酶聯(lián)免疫吸附法測定GP73含量。原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFU和GP73含量均顯著高于其他各組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；原發(fā)性肝癌患者血清AFP、AFU和GP73陽性率分別為65.6%、74.9%、83.2%，AFP、AFU和GP73聯(lián)合檢測陽性率可提高到95.2%。聯(lián)合檢測AFP、AFU 和GP73可提高原發(fā)性肝癌的診斷效率，尤其是AFP陰性原發(fā)性肝癌的診斷效率，對原發(fā)性肝癌的早期診斷有一定指導(dǎo)意義。

原發(fā)性肝癌；甲胎蛋白（AFP）；α-L-巖藻糖苷酶（AFU）；高爾基體蛋白73

原發(fā)性肝癌（Primary hepatic cancer，PHC）指肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞發(fā)生癌變，是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。我國是肝癌大國，且發(fā)病率仍在呈上升勢頭［1］。由于肝癌發(fā)病較為隱襲，早期診斷困難，大多數(shù)患者在確診時已到中晚期，治療難度大，術(shù)后易復(fù)發(fā)及發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，患者生存期短。因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高肝細(xì)胞癌患者生存率的最佳途徑［2］。被廣泛認(rèn)可的原發(fā)性肝癌血清標(biāo)志物是是甲胎蛋白（AFP），但其在病毒性肝炎和慢性肝臟疾病中亦可見不同程度升高，臨床檢測的敏感度較低。隨著蛋白組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近年來發(fā)現(xiàn)高爾基體蛋白73（GP73）、a-L巖藻糖苷酶（AFU）在原發(fā)性肝癌中呈高表達(dá)，廣泛用于原發(fā)性肝癌早期診斷［3］。本研究以原發(fā)性肝癌，良性肝病，健康對照樣本為試驗材料，分別以放射免疫法、速率法及酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清中AFP、AFU和GP73含量，探討三項聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

本研究選取我院2013年1月-2013年12月住院患者血清標(biāo)本115例，年齡在20～69歲（46.63±13.69），其中男性70例，女性45例，包括原發(fā)性肝癌55例，良性肝病60例。原發(fā)性肝癌診斷根據(jù)中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會（2001）修訂的《原發(fā)性肝癌的診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行［4］。肝硬化和肝炎的診斷按照中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會（2000）聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》進(jìn)行［5］。選擇本院同期體檢健康者60例，年齡在22～72歲（44.65±14.59），其中男性30例，女性20例，病毒檢測和ALT等檢測項目均為陰性，排除相關(guān)肝病。

1.2方法

所有受試者均于清晨空腹抽取靜脈血3mL，分離血清檢測。GP73測定采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），試劑盒購自上海泛柯生物公司。測量儀器為美國BioTck公司ELX800酶標(biāo)儀和Bio-Rad1575洗板機(jī)，美國雅培I2000全自動免疫分析儀及配套試劑，肝癌判斷值為≥90μg/L。AFP測定采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，測量儀器為BECKMANAcess化學(xué)發(fā)光儀，配套試劑肝癌判斷值為≥200μg/L。AFU測定采用速率法，測量儀器為日本奧林巴斯AU-640全自動生化分析儀及寧波美康生物科技有限公司試劑盒檢測，肝癌判斷值為≥45U/L。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)（x）±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示。用SPSSI7.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗和P值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

各組血清AFP、AFU和GP73含量比較：PHC組血清AFP、AFU和GP73含量均明顯高于良性肝病組及健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），檢測結(jié)果見表1。

2　結(jié)果

表1　三組血清AFP、AFU、GP73檢測結(jié)果比較（±s）

表1　三組血清AFP、AFU、GP73檢測結(jié)果比較（±s）

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原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFU和GP73檢測陽性率：AFP陽性率為65.6%，AFU陽性率為74.9%，GP73陽性率為 83.2%。三項聯(lián)合檢測陽性率為95.2%。

3　討論

原發(fā)性肝癌（PHC）是亞洲人和非洲人的主要死因。影像學(xué)技術(shù)檢測用于診斷肝癌仍然有很多的局限性，使很多患者未能及時得到準(zhǔn)確診斷，失去了最佳的治療時機(jī)。

AFP是一種糖原蛋白，由590個氨基酸殘基組成，屬于類白蛋白家族，具有免疫調(diào)節(jié)和調(diào)控細(xì)胞增殖等作用。在哺乳動物的胚胎期，主要由肝臟實質(zhì)細(xì)胞和卵黃囊細(xì)胞合成。出生后不久AFP的產(chǎn)生迅速降低，以后完全被白蛋白替代。血清AFP作為肝癌的普查、診斷及療效隨訪觀察指標(biāo)已多年，但高分化或分化很差的肝癌細(xì)胞常不產(chǎn)生AFP，仍有30%左右的肝癌患者AFP在正常范圍內(nèi)［6］。而且部分肝炎和肝硬化患者可出現(xiàn)AFP的一過性升高，女性妊娠期，AFP也會出現(xiàn)生理性升高。有研究認(rèn)為，AFP作為肝癌早期診斷指標(biāo)，敏感度為39%～64%，特異度為76%～91%，陽性預(yù)測值為9%～32%［7，8］。因此單純使用AFP監(jiān)測原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展已經(jīng)不能滿足臨床需要，很容易造成漏診和誤診。

AFU是一種能分解蛋白糖鏈中巖藻糖苷鍵的溶酶體酶，廣泛存在于哺乳動物的細(xì)胞和體液中，參與含巖藻糖基的糖肽、糖脂、低聚糖等生物活性大分子的分解代謝。1984年Deugnier等發(fā)現(xiàn)PHC患者血清AFU活性明顯升高。國內(nèi)外已有文獻(xiàn)表明，原發(fā)性肝癌患者的血清AFU活性不僅高于健康人，而且顯著高于肝硬化患者等，是又一診斷PHC的敏感指標(biāo)［9］。血清AFU升高對血清AFP陰性和低水平的PHC有較高的診斷意義，尤其對肝細(xì)胞癌早期診斷更有價值，與AFP檢測有互補(bǔ)性。AFU對原發(fā)性肝癌的診斷陽性率為64%～81.2%，特異性為90%左右［10］。

GP73是存在于高爾基體的一種跨膜糖蛋白，相對分子量為73Kd［11］。在正常的人體肝組織中GP73主要由膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，肝細(xì)胞很少甚至不表達(dá)。機(jī)體正常情況下，GP73是高爾基體順面膜囊上的一種整合膜蛋白，疾病狀態(tài)時候GP73可從游離于胞內(nèi)體以及細(xì)胞表面［12］，BLOCK等［13］研究發(fā)現(xiàn)在肝細(xì)胞癌中GP73表達(dá)異常活躍，可能原因是急性肝細(xì)胞損傷觸發(fā)和慢性肝臟組織的重構(gòu)和纖維化。GP73診斷肝癌的敏感性為69%，特異性為75%，對于早期肝癌的診斷，GP73的敏感性（62%）顯著優(yōu)于AFP（25%）［14］。朱國民等（2010）應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫定量測定方法檢測肝癌、慢性肝炎血清中GP73含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GP73以作為惡性肝病的獨立指標(biāo)與AFP互補(bǔ)應(yīng)用于臨床，具有更高的靈敏度，可提高原發(fā)性肝癌的診斷率。

本研究通過檢測各組血清中AFP、AFU和G P73濃度，探討它們作為原發(fā)性肝癌臨床診斷標(biāo)志物的可靠性，結(jié)果支持它們都具有較好的診斷效果；分析三者單獨和聯(lián)合檢測結(jié)果，由于每一項單項檢測均存在一定的假陰性，所檢PHC的陽性率分別是AFP陽性率為65.6%，AFU陽性率為74.9%，GP73陽性率為83.2%，而三項聯(lián)合檢測可優(yōu)勢互補(bǔ)，大大提高了PHC檢出的敏感度和準(zhǔn)確度，陽性率可達(dá)95.2%，明顯高于單項

檢測的陽性率。因此，我們認(rèn)為血清AFP、AFU和GP73三項聯(lián)合檢測有助于提高原發(fā)性肝癌的診斷率，及早采取有效治療措施改善患者預(yù)后。

［1］ 蔡永娥，喬建錦，孫曉茹，等.我國原發(fā)性肝癌研究進(jìn)展［J］. 2008，16（1）：141.

［2］Colombo M.Screening and diagnosis of hepatocellular carci noma［J］.LiveiIntemaional，2009，29（S1）：143.

［3］ StefaniukP，CianciaraJ，Wiereinska-DrapaloA，Presentand futurepossibilitiesforearlydiagnosisofhepatocellularcali noma［J］.WorldJournalofGastroenterology.2010，28，16（4）：418.

［4］ 中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會.原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)［J］.中華肝臟病雜志，2001，9（6）：324.

［5］ 中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會和肝病學(xué)分會.病毒性肝炎防治方案［J］.中華肝臟病雜志，2000，8（6）：324.

［6］ Yamamoto K，Imamura H，Matsuyama Y，et a1.AFP，AFPL3，DCP，and GP73 as markers for monitoring treatment re sponse and recurrence and as surrogate markers of clinico pathologicalvariables of HCC［J］.Journal of Gastroenterolo gy，2010，45（12）：1272—1282.

［7］ PATERON D，GANNE N，TRINCHET J C，et al.Prospective studyofscreeningforhepatocellularcarcinomainCaucasion patientswithcirrhosis［J］.JHepatol，1994，20（1）：65-67.

［8］ZOLI M，MAGALOTTI D，BIANCHI G，et al.Efficacy of a surveillanceprogramfor early detection of hepatocellular car cinoma［J］.Cancer，1996，78（5）：977-985.

［9］ 魏學(xué)，王少斌，尚靜安.原發(fā)性肝癌診斷中血清α-L-巖藻糖苷酶的價值［J］.中華腫瘤雜志，2002，22（2）：148-150.

［10］趙平，王江濱，張愛國，等.α-L-巖藻糖苷酶對原發(fā)性肝癌的診斷價值的探討［J］.臨床肝膽病雜志，2003，19（2）：109-110.

［11］KLADNEYRD，BULLAGA，GUOL，etal.GP73，a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection［J］. Gene，2000，249（1/2）：53-65.

［12］孔祥亙，韓紹磊，鄭昭敏，等.高爾基體蛋白73聯(lián)合甲胎蛋白異質(zhì)體在原發(fā)性癌診斷中的價值［J］.山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2011，49（4）：110.

［13］BLOCKTM，COMUNALEMA，LOWMANM，etal.Useof targetedglycoproteomicstoidentifyserumglycoproteinsthat correlatewithlivercancerinwoodehuksandhumans［J］.Proc NatlAcadSciUSA，2005，102（3）779-784.

［14］MarreroJA，RomanoPR，NikolaevaO，etal.GP73，aresident golgiglycoprotein，isanovel serummarkerforhepatocellular carcinoma［J］.JHepatol，2005，43（6）1007-1012.

張文杰，13919259897。