賈敏　劉震　羅義　陽軍　雷曉明　陳平安

510095廣州市胸科醫(yī)院內(nèi)二科(賈敏)；510180廣州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科(劉震、羅義、陽軍、雷曉明、陳平安)

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·臨床研究·

MiRNA- 423-5p與急性心肌梗死后心室重構(gòu)的關系

賈敏劉震羅義陽軍雷曉明陳平安

510095廣州市胸科醫(yī)院內(nèi)二科(賈敏)；510180廣州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科(劉震、羅義、陽軍、雷曉明、陳平安)

目的探討急性心肌梗死(AMI)患者血漿miRNA- 423-5p水平與心肌梗死后心室重構(gòu)嚴重程度的關系及對AMI患者臨床預后的影響。方法選擇2012年6月至2014年6月在我院心內(nèi)科住院并診斷為急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者248例，根據(jù)入院血漿miRNA- 423-5p水平的三分位數(shù)間距將患者分為低水平組(miRNA- 423-5p<0.35)80例，中水平組(0.36≤miRNA- 423-5p≤0.72)86例和高水平組(miRNA- 423-5p>0.72)82例。測定患者入院即刻N末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)水平，并于入院7～10 d內(nèi)及半年后行超聲心動圖測定患者左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)、左室舒張末期容積(LVEDV)、左室收縮末期容積(LVESV)、左室射血分數(shù)(LVEF)。動態(tài)追蹤觀察三組患者隨訪期間(6個月內(nèi))心臟不良事件(MACE)的發(fā)生情況。結(jié)果三組患者隨miRNA- 423-5p水平升高，NT-proBNP水平升高，術(shù)后半年的LVEDV和LVESV顯著增加，LVEF降低[(1075.33±98.54) pg/L比(832.17±86.55) pg/L比(552.66±68.58) pg/L；(132.35±11.56) ml比(130.66±12.25) ml比(127.51±10.35) ml；(61.86±11.53) ml比(59.92±10.25) ml比(59.02±11.23) ml；47.05%±4.16%比48.14%±3.78%比49.82%±4.53%，均為P<0.05]，STEMI患者miRNA- 423-5p與NT-proBNP水平呈正相關(r=0.412，P<0.05)。直接PCI術(shù)后隨訪6個月，Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)三組患者累積無MACE事件生存率差異有統(tǒng)計學意義(96.25% 比90.70% 比81.71%，Logrank=9.605，P=0.008)，多因素Logistic回歸分析顯示miRNA- 423-5p、NT-proBNP均為STEMI患者近期MACE發(fā)生的獨立預測因子。結(jié)論AMI患者入院血漿miRNA- 423-5p水平與心肌梗死后心室重構(gòu)密切相關，并對AMI患者的近期預后具有預測意義。

miRNA- 423-5p；心肌梗死；心室重構(gòu)

Fund program：Project of Guangzhou Municipal Science and Technology Plan(No.2012Y2- 00025)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后心室重構(gòu)是導致患者心力衰竭及預后不良的主要因素[1]。MicroRNA(miRNAs)是一組高度保守的單鏈非編碼小分子RNA，參與多種生物過程的調(diào)控[2]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)miRNAs在心力衰竭的病理生理過程中扮演重要的角色。已有報道心衰患者血漿miRNA- 423-5p水平顯著升高[3]。本研究旨在探討血漿miRNA- 423-5p水平與急性心肌梗死后左心室重構(gòu)的關系及對患者臨床預后的影響。

1　對象和方法

1.1研究對象與分組

前瞻性選擇2012年6月至2014年6月在我院心內(nèi)科住院初次發(fā)生急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevated acute myocardial infarction，STEMI)并在起病12 h內(nèi)成功接受直接經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)行再灌注的患者248例，STEMI診斷符合2001年中華醫(yī)學會心血管病分會制定的《急性心肌梗死診斷和治療指南》標準[4]。該研究通過廣州市第一人民醫(yī)院的倫理委員會審查，入選的研究對象均對本研究知情并簽署知情同意書，研究對象均排除嚴重肝腎功能不全、重癥感染、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、心原性休克等?；颊呷朐汉蠹纯坛槿§o脈血，采用熒光定量PCR技術(shù)(realtime fluorescent quantitive PCR，qRT-PCR)測定miRNA- 423-5p水平(相對表達量)，根據(jù)患者miRNA- 423-5p水平的三分位間距將患者分為低水平組(miRNA- 423-5p<0.35)80例，中等水平組(0.36≤miRNA- 423-5p≤0.72)86例和高水平組(miRNA- 423-5p>0.72)82例。

1.2方法

患者入院后均接受標準的急性冠狀動脈綜合征強化藥物治療(抗凝、抗血小板、強化降脂、改善心肌缺血)并接受直接PCI，手術(shù)均由具有介入手術(shù)資格的心血管科醫(yī)師(PCI例數(shù)大于50例/年)實施。若無禁忌證，患者術(shù)后及隨訪期間均規(guī)范接受阿司匹林0.1 g/d、氯吡格雷75 mg/d的雙聯(lián)抗血小板治療，并繼續(xù)使用β受體阻滯劑、他汀類降脂藥和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑等。對入選患者住院期間進行嚴密觀察，出院后通過住院病歷記錄、門診及電話隨訪(隨訪率100%)共6個月，記錄新發(fā)生的主要心臟不良事件(major adverse cardiac event，MACE)，包括死亡、非致命性心肌梗死或再梗死、缺血性心絞痛發(fā)作再次血運重建、惡性心律失常(室性心動過速、心室顫動、Ⅱ或Ⅲ度房室傳導阻滯)、急性心力衰竭等。

1.3指標的測定

血漿miRNA- 423-5p的檢測[5]：患者入院即刻抽取靜脈血2 ml，置于乙二胺四乙酸(EDTA-K2)無菌抗凝試管中，2 h內(nèi)分離血漿，血漿miRNA- 423-5p采用qRT-PCR進行檢測(Promega公司，美國)，以人snRNA U6(Human snRNA U6)為內(nèi)參，定義ΔCt=目的基因(miRNA- 423-5p)Ct-內(nèi)參(U6)Ct；ΔΔCt=待測樣品中目的基因(miRNA- 423-5p)ΔCt-參照樣品中目的基因(miRNA- 423-5p)ΔCt，相對樣品模板量RQ=2-ΔΔCt(注：Ct值的含義：每個反應管內(nèi)的熒光信號到達設定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù))。以相對樣本模板量表示循環(huán)miRNA- 423-5p的相對表達量。NT-proBNP水平檢測(采用德國Roche公司E170電化學發(fā)光儀，并按照Roche公司proBNP檢測試劑盒的說明書留取標本及檢測)。于入院PCI術(shù)后7～10 d及半年后由超聲室醫(yī)師使用美國GE公司VIVID7彩色多普勒超聲儀對患者行超聲心動圖檢查，測定患者左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)、左室舒張末期容積(LVEDV)、左室收縮末期容積(LVESV)、左室射血分數(shù)(LVEF)。

1.4統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示，計數(shù)資料以百分數(shù)表示，兩組間計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗，各指標間相關性分析采用Spearman相關性分析，三組間計量資料比較采用One-WayANOVA方差分析，無MACE事件生存分析采用Kaplan-Meier曲線，并采用多因素Logistic回歸分析性別、吸煙、高血壓、糖尿病、泵衰竭、高敏C反應蛋白(hs-CRP)、血漿miRNA- 423-5p、NT-proBNP、HDL-C、LDL-C、總膽固醇(CHOL)、空腹血糖(FBS)、血尿酸等多個因變量與STEMI患者隨訪6個月內(nèi)MACE發(fā)生的關系，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1患者基線臨床資料

本研究共納入248例患者，年齡45～76歲，平均(62.4±7.9)歲，男性141例，女性107例。三組患者在基線臨床資料及冠脈病變特點方面差異無統(tǒng)計學意義(均為P>0.05)，見表1。

2.2患者左室重構(gòu)指標變化

三組患者入院NT-proBNP水平、入院7～10天及半年后超聲心動圖檢查指標的比較，見表2。

表1　三組患者的臨床基線資料

注：BMI：體質(zhì)指數(shù)；ACEI：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；β-blocker：β受體阻滯劑

表2　三組患者左室重構(gòu)指標的比較±s)

注：與低水平組比較，aP<0.05，bP<0.01；與中水平組比較，cP<0.05，dP<0.01；LVEDd：左室舒張末期內(nèi)徑；LVEDV：左室舒張末期容積；LVESV：左室收縮末期容積；LVEF：左室射血分數(shù)

2.3血漿miRNA- 423-5p與NT-proBNP水平的相關性

Spearman相關分析顯示，STEMI患者入院時血漿miRNA- 423-5p水平與NT-proBNP水平呈正相關(r=0.412，P<0.05)。

2.4三組患者隨訪期間無MACE事件生存率的比較

入選患者定期隨訪6個月，低水平組患者發(fā)生MACE 3例(3.75%)，中水平組患者共發(fā)生MACE 8例(9.30%)；高水平組患者共發(fā)生MACE 15例(18.29%)。Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)低水平、中水平、高水平三組患者累積無事件生存率差異有統(tǒng)計學意義(96.25% 比90.70% 比81.71%，Logrank=9.605，P=0.008)，見圖1。

圖1　三組STEMI患者隨訪期間無MACE事件生存曲線比較

2.5血漿miRNA- 423-5p水平近期預后的預測價值

多因素Logistic回歸分析顯示，血漿miRNA- 423-5p、NT-proBNP與糖尿病、泵衰竭2級以上、多支冠脈病變均是STEMI患者直接PCI術(shù)后發(fā)生MACE的獨立預測因子，見表3。

3　討論

近年來的研究報道循環(huán)miRNAs作為一類單鏈內(nèi)源性非編碼小分子RNA，其在患者生理或病理狀態(tài)下的變化早于其他生物標志物，并且具有良好的抗RNA酶降解能力和較高的穩(wěn)定性，這就為血清/血漿miRNAs作為疾病的生物標記物進行檢測提供了可能[6]。以往的研究已發(fā)現(xiàn)miRNA- 423-5p與心力衰竭有著密切的關系，但目前關于循環(huán)miRNA- 423-5p與急性心肌梗死后心室重構(gòu)和心力衰竭的關系及機制如何，國內(nèi)外對此的研究報道甚少。本研究通過觀察入院不同血漿miRNA- 423-5p水平組STEMI患者PCI術(shù)后超聲心動圖左室重構(gòu)指標的差異，旨在探討miRNA- 423-5p水平對心肌梗死后左心室重構(gòu)的預測價值，并觀察其對患者臨床預后的影響。

Tijsen等[7]發(fā)現(xiàn)心力衰竭患者血漿miRNA- 423-5p水平明顯升高，并且與NT-proBNP和LVEF水平具有良好的相關性，Goren等[8]也報道了循環(huán)miRNA- 423-5p在心衰患者中表達升高，并且對心衰的鑒別具有較高的靈敏度和特異度，但上述研究均未探討循環(huán)miRNA- 423-5p與心室重構(gòu)指標的關系，尤其是在急性心肌缺血壞死情況下兩者的關系。本研究將入選的STEMI患者按入院后血漿miRNA- 423-5p水平三分位間距分為三組，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCI術(shù)后7～10 d內(nèi)三組患者超聲心動圖檢測結(jié)果LVEDd、LVEDV，LVESV、LVEF差異無統(tǒng)計學意義，但半年后血漿miRNA- 423-5p高水平組患者LVEDd、LVEDV較低水平組患者明顯增加，而LVEF顯著降低，表明STEMI患者血漿miRNA- 423-5p水平與心肌梗死后左室重構(gòu)存在一定的關系。既往的研究[9]已證實NT-proBNP對心肌梗死后心功能不全有預測價值，心肌梗死后NT-proBNP水平的持續(xù)升高對反映心室重構(gòu)的進展具有重要的意義，本研究發(fā)現(xiàn)miRNA- 423-5p水平越高組患者NT-proBNP水平越高，Spearman相關分析顯示STEMI患者miRNA- 423-5p與NT-proBNP水平呈正相關。表明循環(huán)miRNA- 423-5p可能與NT-proBNP一樣，可作為反映STEMI患者心室重構(gòu)嚴重程度和心力衰竭的一個重要生物學標志物。

表3　血漿miRNA- 423-5p與STEMI患者PCI術(shù)后近期預后的關系

本研究對接受直接PCI治療的STEMI患者隨訪6個月，miRNA- 423-5p高水平組患者累積無MACE事件生存率(81.71%)明顯低于miRNA- 423-5p低水平組的患者(96.25%)。多因素Logistic回歸分析示血漿miRNA- 423-5p、NT-proBNP水平是STEMI患者直接PCI術(shù)后近期MACE發(fā)生的獨立預測因子，表明聯(lián)合檢測STEMI患者循環(huán)miRNA- 423-5p、NT-proBNP水平有助于判斷患者的臨床預后。Thum等[10]研究發(fā)現(xiàn)受損的心肌細胞miRNA- 423-5p表達上調(diào)，所以推測循環(huán)miRNA- 423-5p可能來自于缺血壞死心肌細胞的釋放。STEMI患者循環(huán)miRNA- 423-5p水平越高，可能預示心肌缺血壞死更嚴重及心室重構(gòu)進展越迅速。蔡家爐等[11]研究發(fā)現(xiàn)miRNA- 423-5p通過增強氧化應激和炎癥反應、損傷血管內(nèi)皮細胞、影響脂質(zhì)代謝使糖尿病患者微血管并發(fā)癥顯著升高，因此推測miRNA- 423-5p在急性心肌梗死時可能通過上述機制使冠狀動脈的微循環(huán)受損，導致PCI術(shù)后心肌灌注水平降低，從而使患者更容易發(fā)生心室重構(gòu)，致使心力衰竭、心律失常及急性冠脈缺血事件發(fā)生率增加，從而影響患者的臨床預后。

綜上所述，AMI患者循環(huán)miRNA- 423-5p水平與心肌梗死后左室重構(gòu)密切相關，并對接受直接PCI治療的STEMI患者臨床預后有重要的預測價值。但目前對于如何調(diào)控心肌梗死患者的miRNAs的水平，在分子水平上對患者進行治療，仍存在著許多爭議，這將成為未來研究的重點。而且本研究存在樣本量小、隨訪時間短等缺陷，其結(jié)論仍有待進一步的大型臨床隨機對照試驗證實。

利益沖突：無

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(本文編輯：周白瑜)

Relationship between miRNA-423-5p and left ventricular remodeling in patients with acute myocardial infarction

Jia Min，Liu Zhen，Luo Yi，Yang Jun，Lei Xiaoming，Chen Ping′an

Department of 2ndIntern Med，Guangzhou Chest Hospital，Guangzhou 510095，China (Jia M)；Department of Cardiology，Guangzhou First People′s Hospital，Guangzhou 510180，China (Liu Z，Luo Y，Yang J，Lei XM，Chen PA)Corresponding author：Liu Zhen，Email：LZ71826@163.com

ObjectiveTo investigate the relationship between miRNA-423-5p and left ventricular remodeling in patients with acute myocardial infarction，and the predictive values of miRNA-423-5p for patients′ prognosis. MethodsA total of 248 patients with STEMI who underwent primary percutaneous coronary intervention (PCI) from June 2012 to June 2014 in our department of cardiology were enrolled and followed up. Patients were divided into three groups according to the plasma miRNA-423-5p levels on admission：low-level group (miRNA-423-5p<0.35) including 80 cases；mid-level group (0.36≤miRNA-423-5p≤0.72) including 86 cases and high-level group (miRNA-423-5p>0.72) including 82 cases.NT-proBNP of patients on admission was measured，and patients accept echocardiography examination 7-10 days and 6 months after PCI.Major cardiac adverse events (MACE) of patients in three groups during follow-up were recorded.ResultsCompared with low-level group，patients in mid-level or high-level group had higher NT-proBNP levels，worse indicators of left ventricular remodeling and lower LVEF 6 months after PCI.After 6 months of follow-up，Kaplan-Meiersurvival analysis showed patients in three groups had significantly different cumulative non-events survival rates (96.25%vs. 90.70%vs. 81.71%，Logrank=9.605，P=0.008).BinaryLogisticregression analysis showed that both miRNA-423-5p and NT-proBNP were strong independent predictors of recent prognosis in STEMI patients. ConclusionsMiRNA-423-5p is associated with left ventricular remodeling in patients with AMI and is valuable in predicting recent prognosis of AMI patients.

miRNA- 423-5p；Myocardial infarction；Ventricular remodeling

劉震，電子信箱：LZ71826@163.com

10.3969/j.issn.1007-5410.2016.04.004

廣州市科技計劃項目(2012Y2-00025)

2016- 05-27)