雷玉明

河西學院農業(yè)與生物技術學院，甘肅 張掖 734000；甘肅河西走廊特色資源利用重點實驗室，甘肅 張掖 734000

鄭天翔

(河西學院農業(yè)與生物技術學院，甘肅 張掖 734000)

王玉萍

(甘肅省金塔縣農業(yè)技術推廣中心，甘肅 金塔 735300)

楊芳蘭

(甘肅省武威市農業(yè)技術推廣中心，甘肅 武威 733000)

柴文玉

(甘肅省酒泉市農業(yè)技術推廣中心，甘肅 酒泉 735000)

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4種殺菌劑對玉米大斑凸臍孺孢病菌的室內毒力測定

雷玉明

河西學院農業(yè)與生物技術學院，甘肅 張掖 734000；甘肅河西走廊特色資源利用重點實驗室，甘肅 張掖 734000

鄭天翔

(河西學院農業(yè)與生物技術學院，甘肅 張掖 734000)

王玉萍

(甘肅省金塔縣農業(yè)技術推廣中心，甘肅 金塔 735300)

楊芳蘭

(甘肅省武威市農業(yè)技術推廣中心，甘肅 武威 733000)

柴文玉

(甘肅省酒泉市農業(yè)技術推廣中心，甘肅 酒泉 735000)

采用室內生長速率法測定了4種殺菌劑對玉米大斑凸臍孺孢病菌(Exserohilumturcicum)的毒力。篩選出的2種有明顯抑菌作用的藥劑70%甲基硫菌靈WP和70%噁霉福美雙WP，在5.0μg/mL和10.0μg/mL時抑菌菌率均達100%，在1.25μg/mL和2.5μg/mL時抑菌菌率分別達90.48%～99.05%和90.95%～99.29%，抑菌效果顯著，其EC50分別為0.5322μg/mL和0.4892μg/mL。

殺菌劑;毒力測定;EC50;玉米;凸臍孺孢病菌

玉米大斑病是當今世界上玉米主要葉部病害之一，又稱玉米條斑病、玉米煤紋病。該病廣泛發(fā)生于美洲、歐洲、亞洲和大洋洲的冷涼玉米種植區(qū),有時還會引起其他病害如玉米根腐、莖腐等[1]。據報道，在嚴重流行的年份和地區(qū)，導致玉米減產50%，甚至更多[2,3],美國在1951年、1952年、1961年大發(fā)生，曾造成每公頃減產4350多kg[4]。為此，國外玉米產區(qū)對此病已進行了廣泛而深入的研究。我國自20世紀70年代以后，隨著感病雜交種的推廣及栽培制度的改變，該病的危害逐年加重，1974年東北三省發(fā)病面積近200萬hm2，減產達20%；20世紀80年代，由于感病雜交種被淘汰，此病得以控制[5]。然而，隨著玉米制種產業(yè)的迅速興起，一些感病玉米自交系、雜交種的親本材料在制種區(qū)的出現，玉米大斑病1號生理小種已躍居為優(yōu)勢種，加之近10多年制種玉米大面積連作，種子包衣品種單一，生長期葉面防治難度大，藥劑單一，造成這一病害在制種玉米田發(fā)生呈逐年提高趨勢，成為嚴重威脅制種玉米的主要問題。為此，本研究對玉米大斑病菌藥劑篩選試驗，以期為玉米種子包衣、田間藥劑噴霧提供科學依據。

1　材料與方法

1.1供試材料

1.1.1供試品種與病原菌

供試品種種子由北京德農種業(yè)張掖分公司、張掖市金秋種子公司、敦煌種業(yè)股份有限公司玉門市種子公司提供。供試的玉米大斑凸臍孺孢病病菌[Exserohilumturcicum(Pass.) Leonard et Suggs]由河西學院農業(yè)與生物技術學院植物病理實驗室從玉米種子中分離得到。

1.1.2供試藥劑

70%甲硫福美雙可濕性粉劑(thiophanate-methyl·thiram)、70%噁霉福美雙可濕性粉劑(hymexazol·thiram)、70%甲基硫菌靈(thiophanate-methyl)和70%噁霉靈可濕性粉劑(hymexazol)均為青島瀚生生物科技股份有限公司產品。

1.2試驗方法

1.2.1培養(yǎng)基的制備

采用PDA培養(yǎng)基,參照植病研究方法[6]制作,分別量取49mL培養(yǎng)基分裝在100mL三角燒瓶中滅菌后備用。

1.2.2藥劑抑制試驗

將供試4種原藥由高濃度向低濃度稀釋，先用無菌水配制10.00μg/mL的母液，依次向低濃度稀釋獲得5.00、2.50、1.67、1.25、1.00μg/mL的系列梯度藥液備用。將配成的6個濃度梯度藥劑，分別定量加入到滅菌后冷卻至50℃左右的PDA培養(yǎng)基內，充分混合均勻后倒入直徑為90mm的培養(yǎng)皿，配制成含有一定濃度的帶毒PDA平板，以不添加藥劑的PDA平板為對照(CK)，重復3次[6～8]。

將活化好的供試菌用滅菌的打孔器(Ф6mm)制取菌碟，在無菌條件下移至系列濃度的平板中央，每皿接菌餅1個，3次重復，設無藥培養(yǎng)基平板接菌為對照(CK)，將其放入28℃培養(yǎng)條件下培養(yǎng)4d。采用十字交叉測法菌落直徑，按下式計算菌落生長抑制率:

菌落生長抑制率= [(對照菌落直徑-處理菌落直徑) / (對照菌落直徑-6)]×100%

1.2.3藥劑毒力測定

將1.2.2中選出的藥劑，按1.2.2中的測定方法，以目前生產上普遍使用的70%甲基硫菌靈為對照。根據濃度梯度下菌落生長抑制率的值，將菌落生長抑制率換算成抑制機率值y，藥劑濃度對數x，機率值按回歸法求得不同殺菌劑對應菌株的劑量的回歸方程y=a+bx，并由回歸方程計算各藥劑對相應抑制中濃度EC50值及相關系數r值[8]。

2　結果與分析

2.1藥劑對玉米大斑凸臍孺孢病菌抑菌作用

由表1可見，供試的4種藥劑抑菌作用隨濃度的升高，抑菌率也在上升，但受試4種殺菌劑在不同濃度條件下對凸臍孺孢病菌的相對抑菌率存在明顯的差異。70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙在濃度為5.00μg/mL和10.00μg/mL時抑菌菌率均達100%，效果較顯著，在濃度1.25μg/mL和2.50μg/mL時抑菌菌率分別達90.48%～99.05%和90.95%～99.29%，抑菌效果明顯，且二者抑菌作用較為接近。濃度在1.0μg/mL時抑菌菌率分別為83.33%和85.74%，抑菌作用開始減弱；70%甲基硫菌靈和70%噁霉靈濃度在10.00μg/mL時抑菌菌率分別為78.57%和80.95%，抑菌作用與70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙在濃度在1.00μg/mL時抑菌作用相當，濃度在5.00μg/mL和1.00μg/mL時抑菌率分別為67.86%～9.52%和69.05～11.90%，抑菌作用明顯下降，效果較差。以上結果表明，在同一濃度條件下，70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙對大斑凸臍孺孢病菌抑菌效果明顯高于70%甲基硫菌靈和70%噁霉靈，效果顯著，可作為生產上推廣使用的有效藥劑。

表1　不同濃度殺菌劑對玉米大斑凸臍孺孢病菌抑菌活性測定結果

2.2有效藥劑的毒力測定

從表2結果可見，70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙對病菌具有較強抑菌效果，Ec50分別0.5322μg/mL和0.4892μg/mL，而甲基硫菌靈抑菌效果較差，EC50可達14.8868μg/mL。結果表明甲硫福美雙和噁霉福美雙毒力強于甲基硫菌靈。

從毒力回歸方程看，70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙回歸方程斜率值分別為5.9949和6.0820，均高于甲基硫菌靈加歸方程斜率值3.2204，表明玉米大斑凸臍孺孢病菌對甲硫福美雙和噁霉福美雙敏感度越高。

從相關系數R看，70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙、70%甲基硫菌靈對玉米大斑凸臍孺孢病菌機率值與其濃度的相關系數較高，分別達0.9841、0.9966和0.9823，表明抑制百分率的機率值與其濃度間有顯著的線性關系，可以用該回歸方程在供試濃度范圍內進行預測。綜上所述，認為70%甲硫福美雙和70%噁霉福美雙是防治玉米大斑病的有效藥劑。

表2　甲硫福美雙、噁霉福美雙對玉米大斑凸臍孺孢病菌毒力測定

3　討論

我國從20世紀70年代起對玉米大斑病菌生理分化進行了監(jiān)測，目前大斑病菌生理分化已呈現復雜化，現已命名5個生理小種，分別為0、1、23、23N和2N[9]，不同地區(qū)間報道出現的優(yōu)勢生理小種不同，是造成不同地區(qū)玉米大斑病呈加重趨勢的重要原因。目前甘肅河西地區(qū)制種玉米大斑病成逐年加重趨勢，而制種玉米親本材料大多數都來源于東北、華北、中原地區(qū)，使甘肅河西制種玉米區(qū)大斑病菌生理小種復雜化，引起病菌對藥劑產生抗藥性，造成70%甲基硫菌靈等藥劑用藥量增大，防治效果降低。藥劑室毒力測定表明，復配藥劑用藥量低，抑菌效果明顯。因此，制種玉米區(qū)可采用70%甲硫福美雙、70%噁霉福美雙2種藥劑進行葉面噴霧防治。建議最小稀釋倍數為100～150倍液。

[1]高衛(wèi)東,戴法超.玉米大斑病研究的新進展[J].植物病理學報,1993,23(3):193～195.

[2]Perkins J M,Pederson W L.Disease development and yield losses associated with northern leaf blight on corn[J].Plant disease,1987,71:940～943.

[3]Mllstrup A J,Miles S A.The effects of some lea blights of corn on grain yield[J].Phytopathology,1957,47:331～336.

[4]Carson M L,Van Dyke C G.Effect of Light andTemperature on Expression of Partial Resistance of Maize toExserohilumturcicum[J].Plant disease,1994,78:519～522.

[5]劉紀麟.玉米育種學[M].北京:農業(yè)出版社,1994.

[6]方中達.植病研究方法[M].北京:農業(yè)出版社,1998：151～154.

[7]陳年春.農藥生物測定技術[M].北京:北京農業(yè)大學出版社，1990：95～102.

[8]孫廣宇，宗兆鋒.植物病理學實驗技術[M].北京：中國農業(yè)出版社，2002：142～144.

[9]紀偉波，何海軍，趙松濤，等.黑龍江玉米大斑病菌生理分化研究[J].玉米科學，2010，18(1)：128～130，134.

2015-12-28

甘肅省農業(yè)科技創(chuàng)新項目(GNCX-2013-10)；甘肅省科技重大專項(0801NKDA016)。

雷玉明(1964-)，男，碩士，教授，主要從事植物病理研究，zyymlei@163.com。

S482.2

A

1673-1409(2016)21-0008-04

[引著格式]雷玉明,鄭天翔，王玉萍，等.4種殺菌劑對玉米大斑凸臍孺孢病菌的室內毒力測定[J].長江大學學報(自科版) ，2016，13(21)：8～11.